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中医药调控线粒体功能防治肝衰竭的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 234-243页

作者：田晓玲张彧陈斌湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义... 详细信息

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义。LF发病机制复杂,线粒体是肝细胞内较敏感的细胞器之一,作为细胞内能量代谢的中心环节,已有大量研究显示,在LF中,肝细胞内线粒体在结构和功能上发生了改变,线粒体结构和功能异常在LF疾病进程中发挥着重要作用。其中线粒体呼吸链障碍、线粒体DNA损伤、线粒体通透性转换孔开放、线粒体质量控制失衡及线粒体氧化应激等多种因素交织成网络,构成一个复杂而统一的整体,成为影响LF病程进展的关键节点。近年来,研究人员开始着力于研究能够通过调节肝脏线粒体功能,防治LF的药物。随着研究的深入,中医药在LF防治中不断有新的突破,诸多研究证实了中医药可通过保护线粒体功能来发挥防治LF的效用,其作用效果可概括为减轻肝细胞损伤、抑制肝细胞死亡及促进肝细胞再生3个方面,以有效代偿肝功能,促进肝实质质量与功能的恢复。该文对线粒体的结构与功能、LF与线粒体的关系及中医药领域干预线粒体功能防治LF的研究进行总结性梳理,以期为临床中医药治疗LF提供一定的思路及借鉴。

关键词：中医药肝衰竭线粒体作用机制

滋阴明目方对视网膜色素变性模型小鼠视网膜组织凋亡及内质网应激的影响

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中医杂志 2024年第17期 1808-1815页

作者：欧晨宋厚盼谢薇王英彭俊彭清华湖南中医药大学第一附属医院湖南中医药大学

目的探讨滋阴明目方治疗视网膜色素变性的可能机制。方法将60只rd10小鼠采用随机数字表法分为模型组、维生素A组和滋阴明目方低、中、高剂量组，每组12只；另将12只C57BL/6小鼠作为空白组。滋阴明目方低、中、高剂量组小鼠分别给予滋... 详细信息

目的探讨滋阴明目方治疗视网膜色素变性的可能机制。方法将60只rd10小鼠采用随机数字表法分为模型组、维生素A组和滋阴明目方低、中、高剂量组，每组12只；另将12只C57BL/6小鼠作为空白组。滋阴明目方低、中、高剂量组小鼠分别给予滋阴明目方13.5、27.0、54.0 g/（kg·d）灌胃，维生素A组小鼠给予维生素A软胶囊750 IU/（kg·d）灌胃，空白组和模型组小鼠给予生理盐水13.5 ml/（kg·d）灌胃。各组均每天灌胃1次，共28天。运用眼底照相、光学相干断层扫描检测小鼠眼底、视网膜形态，TUNEL法检测小鼠视网膜组织细胞凋亡情况，微滴式数字PCR和免疫荧光双染检测小鼠视网膜组织葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶（IRE1）、活化转录因子6 (ATF6)、C/EBP同源蛋白（CHOP）mRNA和蛋白表达水平。结果模型组小鼠视盘色蜡黄，眼底萎缩样改变，可见大片色素沉着，视网膜血管变细，可见大量血管白鞘，视网膜细胞核排列紊乱，可见大量凋亡细胞；滋阴明目方各剂量组和维生素A组小鼠眼底状况较模型组均有不同程度改善，凋亡细胞减少，其中以滋阴明目方中、高剂量组改善较显著。与空白组比较，模型组小鼠视网膜厚度减少，GRP78、IRE1、ATF6、CHOP mRNA及蛋白表达均升高（P<0.01）。与模型组比较，维生素A组和滋阴明目方中、高剂量组视网膜厚度均增加，GRP78、IRE1、ATF6mRNA和蛋白表达均降低；滋阴明目方低、中、高剂量组CHOP mRNA和蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）。与维生素A组和滋阴明目方低剂量组比较，滋阴明目方高剂量组视网膜厚度增加（P<0.01）。与维生素A组比较，滋阴明目方中、高剂量组GRP78、ATF6、IRE1、CHOP mRNA表达降低，GRP78、CHOP蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）。与滋阴明目方低剂量组比较，滋阴明目方中、高剂量组CHOP蛋白表达降低（P<0.01）。结论滋阴明目方可以通过抑制内质网应激反应以减少视网膜组织的细胞凋亡，进而延缓视网膜病变进展，保护视功能，且具有剂量依赖性。

关键词：视网膜色素变性内质网应激细胞凋亡滋阴明目方

桃红四物汤调控Nrf2/Keap1/HO-1信号通路介导的铁死亡在膝骨关节炎中的作用机制

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中药药理与临床 2024年第7期 10-15页

作者：段航曾凡王林华邝高艳卢敏湖南中医药大学第一附属医院湖南中医药大学

目的:桃红四物汤调控核因子E2相关因子(Nrf2)/Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路介导的铁死亡在膝骨关节炎(KOA)中的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、桃红四物汤9 g/kg组、双醋瑞... 详细信息

目的:桃红四物汤调控核因子E2相关因子(Nrf2)/Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路介导的铁死亡在膝骨关节炎(KOA)中的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、桃红四物汤9 g/kg组、双醋瑞因胶囊0.0045 g/kg组，每组各10只；各组均采用内侧半月板失稳手术造模，造模成功1 w后各组灌胃给予相应的药物或无菌水，1次/d,连续8 w。干预完成后，检测各组大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-18含量及关节软骨组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、活性氧(ROS)含量；透射电镜观察大鼠软骨线粒体数量、形态、结构及分布情况；Western Blot法检测大鼠关节软骨组织Keap1、Nrf2、HO-1、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、肿瘤抑制蛋白53(P53)、溶质载体家族7成员11重组蛋白(SLC7A11)的表达。结果:与假手术对照组比较，模型对照组Mankin和OARSI病理评分增加，IL-1β、TNF-α、IL-18、MDA、ROS含量显著升高，Keap1、P53蛋白表达显著上调，SOD活力显著降低，Nrf2、HO-1、GPX4、SLC7A11蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较，桃红四物汤组Mankin和OARSI病理评分降低，IL-1β、TNF-α、IL-18、MDA、ROS含量降低，Keap1、P53蛋白表达显著下调，SOD活力显著升高，Nrf2、HO-1、GPX4、SLC7A11蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:桃红四物汤可能通过激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制大鼠关节软骨铁死亡。

关键词：桃红四物汤核因子E2相关因子铁死亡膝骨关节炎氧化应激谷胱甘肽过氧化物酶4

润目逍遥散对干眼肝经郁热证模型小鼠角膜、泪腺组织miR-146a-5p与IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路的影响

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中医杂志 2024年第18期 1915-1924页

作者：刘婷婷陈彦坤刘培蒋鹏飞谭亢颜春薇彭清华湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

目的从miR-146a-5p与白细胞介素1受体相关激酶1/肿瘤坏死因子受体相关因子6/核因子κB(IRAK1/TRAF6/NF-κB)信号通路探讨润目逍遥散治疗干眼肝经郁热证的可能机制。方法 80只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、激动剂组、抑制剂组... 详细信息

目的从miR-146a-5p与白细胞介素1受体相关激酶1/肿瘤坏死因子受体相关因子6/核因子κB(IRAK1/TRAF6/NF-κB)信号通路探讨润目逍遥散治疗干眼肝经郁热证的可能机制。方法 80只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、激动剂组、抑制剂组、玻璃酸钠组和润目逍遥散高、中、低剂量组，每组10只。除正常组外，其余各组小鼠采用苯扎氯铵溶液滴眼联合慢性疼痛刺激构建干眼肝经郁热证小鼠模型。于造模第30日开始，润目逍遥散高、中、低剂量组小鼠分别给予润目逍遥散每次29、14.5、7.25 g/kg，每日2次灌胃；玻璃酸钠组小鼠双眼给予玻璃酸钠滴眼液每次每只眼5μl，每日2次；激动剂组小鼠双眼每次每只眼给予agomir-146a-5p 2 nmol滴眼，抑制剂组小鼠双眼给予antagomir-146a-5p 5 nmol滴眼，隔日1次，每周3次；正常组、模型组小鼠按1 ml/（100 g·d）灌胃去离子水。各组均持续干预14天，最后一次干预后次日检测各组小鼠泪液分泌量、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色情况、易激惹程度评分；HE染色观察各组小鼠角膜、泪腺的病理情况；检测角膜、泪腺炎症因子白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、miR-146a-5p表达；检测角膜中基质金属蛋白酶3 (MMP-3)、基质金属蛋白酶9 (MMP-9)表达，角膜、泪腺中IRAK1、TRAF6、核因子κB p65 (NF-κB p65)蛋白及mRNA表达，磷酸化核因子κB p65 (p-NF-κB p65)蛋白表达。结果与正常组比较，模型组小鼠泪液分泌量减少、泪膜破裂时间缩短、易激惹程度评分增高（P<0.05），病理显示角膜中央出现染色、有明显角膜损伤，泪腺腺泡细胞体积增大，排列紊乱，大量炎性细胞浸润，新生血管增多的表现；角膜、泪腺组织中IL-1β、TNF-α表达升高，miR-146a-5p表达降低，IRAK1、TRAF6、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白与IRAK1、TRAF6、NF-κB p65 mRNA表达升高，角膜中MMP-3、MMP-9蛋白表达升高（P<0.05）。与模型组比较，润目逍遥散高剂量组上述各指标均显著改善，而玻璃酸钠组和润目逍遥散中、低剂量组部分指标改善（P<0.05）。与模型组比较，激动剂组角膜、泪腺IRAK1、TRAF6 mRNA及IRAK1、TRAF6、p-NF-κB p65蛋白表达降低；与抑制剂组相比，润目逍遥散各剂量组角膜、泪腺中部分IRAK1、TRAF6、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达下降（P<0.05）。结论润目逍遥散可以通过上调miR-146a-5p负调控肝经郁热证干眼模型小鼠角膜及泪腺中IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路，从而抑制炎症反应减轻眼表组织损伤，且以高剂量效果最好。

关键词：干眼肝经郁热证润目逍遥散角膜泪腺组织炎症反应

基于代谢组学和网络药理学研究五虎汤干预RSV诱导哮喘的效应物质及作用机制

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中国中药杂志 2024年

作者：姚冰刘靖雷王孟清罗银河谢静荀春铮李凡黄婷曾庆佳湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒（RSV）诱发哮喘的效应物质及作用机制。使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分；借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及基因本体（GO）功... 详细信息

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒（RSV）诱发哮喘的效应物质及作用机制。使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分；借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及基因本体（GO）功能分析。同时将靶点蛋白及代谢物-靶点-通路等信息导入STRING数据库，构建蛋白互作网络，明确五虎汤核心成分及关键通路。体内实验部分使用RSV联合鸡卵清蛋白（OVA）建立哮喘模型，通过肺功能、苏木精-伊红（HE）染色、酶联免疫吸附实验（ELISA）、蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法验证五虎汤对RSV诱导哮喘小鼠的干预作用。结果显示，五虎汤入血成分以黄酮类、苯丙素类、木脂素类、萜类等化合物为主，作用于儿童哮喘的核心成分有(－)-表没食子儿茶素、山柰素、异甘草素、香叶木素、桦木酸、熊果酸、瑞香素、七叶素等，钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、NOD样受体信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等是其靶点主要作用通路。体内实验结果表明，五虎汤能够改善肺功能指标，下调白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17((IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，并且能够降低肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、核因子-κB亚基1（NFKB1）等蛋白的表达，减轻中性粒细胞炎症浸润及肺淤血。结果表明，五虎汤通过多组分、多靶点、多途径的协同作用干预病毒诱发哮喘，体内实验证明其能抑制NOD样受体信号通路的激活，减轻哮喘小鼠气道炎症与气道损伤。

关键词：代谢组学网络药理学五虎汤中药入血成分 RSV 儿童哮喘 NOD样受体信号通路

基于p53/SLC7A11/GPX4通路研究疏肝祛瘀解毒方诱导肝癌细胞铁死亡的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第8期30卷 74-82页

作者：蔡晓钧杨仁义王智槟龚怡琳王科林丽珠钟崇李菁湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学中西医结合学院长沙410208 湖南中医药大学长沙410208 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的:基于肿瘤蛋白53(p53)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路探讨疏肝祛瘀解毒方诱导肝癌细胞铁死亡。方法:将MHCC97H细胞分为空白血清组(含10%空白血清培养基)、疏肝祛瘀解毒方(SGQYJDF)低浓度组(含5%含药... 详细信息

目的:基于肿瘤蛋白53(p53)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路探讨疏肝祛瘀解毒方诱导肝癌细胞铁死亡。方法:将MHCC97H细胞分为空白血清组(含10%空白血清培养基)、疏肝祛瘀解毒方(SGQYJDF)低浓度组(含5%含药血清、5%空白血清培养基)、SGQYJDF中浓度组(含7.5%含药血清、2.5%空白血清培养基)、SGQYJDF高浓度组(含10%含药血清的培养基)和索拉非尼组(索拉非尼浓度为10μmol·L-1的10%空白血清培养基)。按分组干预24 h后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法检测细胞增殖能力;亚铁离子荧光探针(FerroOrange)染色法检测细胞内亚铁离子(Fe2+)水平;比色法检测细胞内丙二醇(MDA)及谷胱甘肽(GSH)水平;透射电镜观察细胞线粒体超微形态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11和GPX4表达水平。结果:细胞活性方面,与空白血清组比较,SGQYJDF各浓度组能够呈浓度相关性地降低MHCC97H细胞存活率,SGQYJDF中、高浓度组的MHCC97H细胞存活率显著降低(P<0.01);同时EdU结果显示SGQYJDF中、高浓度组均能够明显抑制MHCC97H细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01)。铁死亡生化指标方面,与空白血清组比较,SGQYJDF中、高浓度组能够呈浓度相关性地提高细胞内Fe2+水平(P<0.01);SGQYJDF低、中、高浓度组能够呈浓度相关性地降低MHCC97H细胞内GSH的水平(P<0.01),同时提高细胞内MDA水平(P<0.05,P<0.01)。在通路相关蛋白表达方面,与空白血清组比较,SGQYJDF中、高浓度组可显著增加p53表达(P<0.01);SGQYJDF低、中、高浓度组能够显著降低GPX4表达(P<0.01);SGQYJDF高浓度组能够显著降低SLC7A11的表达(P<0.01)。铁死亡细胞形态方面,与空白血清组比较,透射电镜发现SGQYJDF低浓度组存在变性线粒体,而SGQYJDF中、高浓度组可观察到线粒体体积缩小、双层膜密度增加和线粒体嵴减少,这些特征与索拉非尼组诱导的铁死亡相似。此外与索拉非尼组比较,SGQYJDF高浓度组细胞存活率、增殖能力、Fe2+水平、MDA水平和GSH水平差异无统计学意义。结论:提示SGQYJDF可能通过上调肝细胞癌MHCC97H细胞内p53的表达、抑制GPX4和SLC7A11的表达,下调GSH的水平,同时导致细胞内Fe2+和MDA的累积,从而诱导其发生铁死亡,抑制其增殖。

关键词：疏肝祛瘀解毒方肝细胞癌铁死亡增殖

针灸辅助改善冻融胚胎移植疗效的网状meta分析

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World Journal of Acupuncture-Moxibustion 2024年第2期34卷 103-116页

作者：罗敏辉谭艳左耀辰石文英王鑫章薇湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

Objective:To evaluate the clinical effect of acupuncture-moxibustion as the adjuvant therapy on frozenthawed embryo transfer(FET)using network ***:In PubMed,Embase,Cochrane Library,Chinese National Knowledge Infrastructure(CNKI),Wanfang database(WanFang),VIP database and Chinese Biomedical Literature Database(SinoMed),the randomized controlled trials(RCTs)of the adjuvant therapy of acupuncture-moxibustion for FET were retrieved,from database inception to April 1,*** risk of bias assessment tool was used to screen and evaluate the quality of the included studies,and RevMan 5.3,GeMTC0.14.3 and Stata16.0 software were adopted to complete the network ***:Twenty-nine RCTs comprising 2880 patients were finally included,involving 17 interventions and 4 outcome *** results of network meta-analysis showed that the top three therapies under each outcome based on the magnitude of SUCRA values were:(1)Clinical pregnancy rate(CPR,%):"transcutaneous electrical acupoint stimulation+herbal medicine"(76.4),"moxibustion+herbal medicine"(74.7),"acupuncture+moxibustion"(73.3);(2)Biochemical pregnancy rate(BPR):"moxibustion+herbal medicine"(89.3),"acupuncture+moxibustion"(82.1),"acupuncture+herbal medicine"(78.7);(3)Endometrial thickness:"acupoint injection+Western medicine"(87.2),auricular therapy(76.8),"acupuncture+herbal medicine"(73.5);(4)Type A endometrial morphology rate:"acupoint injection+Western medicine"(78.3),"moxibustion+herbal medicine"(58.0)and"acupuncture+moxibustion"(52.6).Conclusion:The combined treatment of acupuncture-moxibustion was superior to single therapy for FET *** combined therapy of transcutaneous electrical acupoint stimulation and herbal medicine had the best effect for improving CPR,"moxibustion+herbal medicine"obtained the best average comprehensive effect,and"acupoint injection+Western medicine"was conductive to ameliorate the endome trial thickness and *** to the limitations of e

关键词： Acupuncture Moxibustion Frozen-thawed embryotransfer Pregnancy rate Endometriumthickness Endometrial morphology Networkmeta-analysis

不同时相HBV-ACLF患者外周血Treg/Th17细胞变化及与HBV-DNA相关性研究

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中国病原生物学杂志 2024年第10期19卷 1117-1122页

作者：杜珊谭年花彭杰曾孟晖陈斌湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学

目的研究不同时相乙肝相关性慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血Treg/Th17细胞表达差异,以及与HBV-DNA水平的相关性。方法 60例HBV-ACLF患者分为不同时相,即进展期(Adv-ACLF)28例和平台期(Pla-ACLF)32例,同时纳入慢性乙型肝炎(CHB)患... 详细信息

目的研究不同时相乙肝相关性慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血Treg/Th17细胞表达差异,以及与HBV-DNA水平的相关性。方法 60例HBV-ACLF患者分为不同时相,即进展期(Adv-ACLF)28例和平台期(Pla-ACLF)32例,同时纳入慢性乙型肝炎(CHB)患者、健康志愿者(NC)各20例作为对照。流式细胞仪检测各组受试者外周血Treg、Th17细胞频率并计算Treg/Th17比值,流式细胞微球芯片捕获技术(CBA)检测细胞因子转化生长因子(TGF-β)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-17A(IL-17A)、白介素-23(IL-23)水平,实时荧光定量RT-PCR法检测Treg、Th17细胞特异性转录因子FoxP3、ROR-γt mRNA表达;进一步分析不同时相患者Treg、Th17细胞频率及Treg/Th17细胞比值与HBV-DNA水平的相关性。结果与NC组、CHB组比较,HBV-ACLF进展期及平台期患者炎症指标TNF-α、IL-17A、IL-23水平以及ROR-γtmRNA表达明显升高(P<0.01),Th17细胞频率升高、Treg/Th17值下降(P<0.01),Treg/Th17细胞失衡向Th17方向偏移,与平台期比较进展期更严重(P<0.05);进展期HBV-ACLF患者外周血Treg、Th17细胞频率与HBV-DNA水平呈正相关(Treg r=0.516,P=0.005;Th17 r=0.420,P=0.026),但Treg/Th17比值与HBV-DNA水平无相关性。平台期HBV-ACLF患者外周血Treg、Th17细胞频率以及Treg/Th17比值均与HBV-DNA水平无相关性。结论 HBV-ACLF进展期、平台期患者均存在Treg/Th17细胞失衡,进展期患者Treg/Th17失衡较平台期更严重。进展期HBV-ACLF患者Treg、Th17细胞频率与HBV-DNA水平呈正相关。

关键词：肝衰竭 Treg细胞 Th17细胞炎症反应

滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

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北京中医药大学学报 2024年第6期47卷 773-781页

作者：欧晨宋厚盼谢薇彭俊曾梅艳彭清华湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目... 详细信息

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清,采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组,分别进行干预。干预24 h后,采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察,CCK-8法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较,滋阴明目方含药血清组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少;滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高,细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低,牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡,其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达,抑制细胞内质网应激反应有关。

关键词：滋阴明目方人视网膜色素上皮细胞系-19 内质网应激葡萄糖调节蛋白78/1型内质网转膜蛋白激酶/活化转录因子6通路凋亡