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HPLC测定重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液中抗氧剂及其降解物

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中国现代应用药学 2024年第1期41卷 112-118页

作者：鹿泽华冀苏龙刘帅虎王力高彦申志强李景艳王斌河南晟明生物技术研究院有限公司河南新乡453000 华兰生物基因工程有限公司河南新乡453000

目的建立HPLC对重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液中11种抗氧剂及其降解物含量测定方法。方法采用饱和硫酸铵沉淀蛋白,离心后上清液转移至经甲醇活化后的C_(18)固相萃取小柱中,分别用4 mL甲醇、5 mL乙酸乙酯依次洗脱小柱,洗脱液用甲醇-... 详细信息

目的建立HPLC对重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液中11种抗氧剂及其降解物含量测定方法。方法采用饱和硫酸铵沉淀蛋白,离心后上清液转移至经甲醇活化后的C_(18)固相萃取小柱中,分别用4 mL甲醇、5 mL乙酸乙酯依次洗脱小柱,洗脱液用甲醇-乙酸乙酯(2∶3)混合溶剂定容后过0.22μm PTFE疏水滤膜,经HPLC分析,外标法定量。色谱条件:Kinetex■ XB-C_(18) 100A(100 mm×4.6 mm,2.6μm)色谱柱,检测波长230 nm,柱温箱30℃,进样量5μL,流速0.4 mL·min^(–1),流动相0.1%甲酸-甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B),运行时间45 min。结果 11种目标物在2.5~35μg·mL^(–1)内线性关系良好(R~2≥0.99)。在25,10,5μg·mL^(–1) 3个浓度水平下,平均加样回收率为88.1%~106.5%,RSD为0.10%~9.05%。6份样品重复性RSD为2.01%~4.77%,12份样品中间精密度RSD为2.58%~9.75%,对3批次重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液的0月,25℃加速3月及6月正/倒置样品进行检测,结果显示所有批次样品在不同检测点均未有抗氧剂及其降解物浸出。结论该方法专属性好、准确度与精密度高、溶液稳定性好、方法耐用性高,能够用于对药品中抗氧剂类物质的含量检测。

关键词：重组Exendin-4-FC融合蛋白注射液抗氧剂高效液相色谱法

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P7脂肽的合成工艺与生物活性研究

日用化学工业（中英文） 2024年第9期54卷 1050-1058页

作者：张文杰石峰咸瑞卿董玉香郭凯姬胜利润辉生物技术(威海)有限公司山东威海264402 山东省食品药品检验研究院山东济南250000

对P7脂肽的合成工艺及生物活性进行研究。采用固相多肽法(SPPS)和疏水载体辅助液相法(LPPS)人工合成P7脂肽;利用分子对接技术将合成的化合物与受体蛋白(3OCG)进行对接;采用MTT法与Griess试剂法检测P7脂肽的生物毒性和抗炎活性。成功合... 详细信息

对P7脂肽的合成工艺及生物活性进行研究。采用固相多肽法(SPPS)和疏水载体辅助液相法(LPPS)人工合成P7脂肽;利用分子对接技术将合成的化合物与受体蛋白(3OCG)进行对接;采用MTT法与Griess试剂法检测P7脂肽的生物毒性和抗炎活性。成功合成P7脂肽并对其进行质谱表征;SPPS法与LPPS法的收率分别为34.45%和66.31%,物料消耗量分别为129.12和83.08 g,废液产生量分别为7.12和3.38 L,PMI分别为30.81,10.29,E-因子分别为1 700.62,419.70;分子对接结果表明,P7脂肽与p38蛋白激酶(3OCG)的对接结合能最小,GHK分子与残基ARG67、LYS53和GLY36形成氢键,P7肽与残基ALAA34、TYRA35、THRA185形成氢键,P7脂肽与残基ARGA70、ARGA189、TYRA35、ARGA67、ASNA155、ASPA168形成氢键并与残基存在范德华力、pi-烷基、C-H键等相互作用力;P7脂肽在32μmol/L浓度以内无生物毒性;不同浓度的P7脂肽对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型中NO的释放具有很好的下调作用。通过对P7脂肽的合成研究,表明LPPS法的总体收率比SPPS法收率高且物料消耗量及“三废”产生量少,更适合于工业化生产;分子对接与细胞实验结果表明设计合成的P7脂肽具有良好的抗炎抗骨质疏松活性。

关键词：多肽 LPPS法 SPPS法分子对接

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真空预冷对松茸木质化及相关酶活力的影响

食品科学 2024年第10期45卷 249-256页

作者：赵焯然王凤玲王璇关文强胡昕刘镇国姚刚路鹏天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室天津300134 深圳顺丰泰森控股(集团)有限公司广东深圳518000

为探究真空预冷处理对松茸贮藏过程中木质化的影响,以松茸为实验材料,对贮藏期间松茸菌盖、菌柄的硬度、果肉紧实度、木质素、几丁质和纤维素含量及纤维素酶(cellulase,CX)、苯丙氨酸转氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、多酚氧化... 详细信息

为探究真空预冷处理对松茸贮藏过程中木质化的影响,以松茸为实验材料,对贮藏期间松茸菌盖、菌柄的硬度、果肉紧实度、木质素、几丁质和纤维素含量及纤维素酶(cellulase,CX)、苯丙氨酸转氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活力的变化规律进行研究。结果表明,与对照组相比,真空预冷处理能够显著抑制菌盖与菌柄硬度和果肉紧实度的下降,有效抑制细胞壁中几丁质降解和CX活力的上升,维持较高的纤维素含量,延缓木质素积累,其菌盖和菌柄的PAL活力峰值分别比对照组低8.2%和2.9%,POD活力峰值分别比对照组低10%和3.7%,PPO活力峰值分别比对照组低23.1%和5.2%。此外,与菌盖相比,松茸菌柄木质化高峰出现时间早,更易出现木质化现象。真空预冷处理能够延缓松茸木质化进程,较好地维持松茸品质。

关键词：真空预冷木质化松茸保鲜

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稻米油及其γ-谷维素营养的研究进展

粮油食品科技 2024年第5期32卷 84-92页

作者：张伟君朱振南马一玮顾杰王勇姜元荣丰益(上海)生物技术研发中心有限公司上海200137

我国稻米资源丰富,其加工产物稻米油(RBO)不仅脂肪酸组成均衡,还富含γ-谷维素、植物甾醇、维生素E等脂质伴随物,对人体健康十分有益。对稻米油及其γ-谷维素营养研究进展进行检索分析,阐述了稻米油及其γ-谷维素在血脂、血糖、情绪/睡... 详细信息

我国稻米资源丰富,其加工产物稻米油(RBO)不仅脂肪酸组成均衡,还富含γ-谷维素、植物甾醇、维生素E等脂质伴随物,对人体健康十分有益。对稻米油及其γ-谷维素营养研究进展进行检索分析,阐述了稻米油及其γ-谷维素在血脂、血糖、情绪/睡眠、肌肉力量/运动表现、免疫调节等方面的营养功效及潜在机制,其中关于RBO对血脂影响的临床研究最多,食用RBO可能有效改善成人受试者的脂质参数,降低血脂异常/高脂血症风险,以预防和控制心血管疾病。为整体了解稻米油及γ-谷维素营养特性及潜在应用价值,未来需进一步探索RBO在不同人群中健康效应及作用机制。

关键词：稻米油脂质伴随物 γ-谷维素营养功效应用

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同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定血清皮质醇候选参考方法的建立及评价

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中华检验医学杂志 2024年第8期47卷 927-935页

作者：黄昌发林丹付晓雅翁旭琦孙雅玲李伟广州万孚生物技术股份有限公司广州510663

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采... 详细信息

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采用电喷雾电离源正离子模式(ESI+)及多反应监测(MRM)分析方法, 标准溶液及内标的配制、样本与内标的混合均采用重量法进行控制, 括号法计算皮质醇浓度。参照美国临床实验室标准化协会C62-A、C50-A及国内专家共识文件《液相色谱-质谱临床应用建议》《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》等对方法正确度、精密度、特异性、线性、检测限和定量下限等性能进行系统评价。数据经Excel2019进行处理, 最小二乘法进行线性回归分析。结果方法准确精密, 测定有证标准物质ERM-DA192、ERM-DA193以及2021—2023年RELA样本的相对偏倚均<2%, 加标回收率98.2%~101.1%, 批内及批间不精密度均<2%, 检测结果不受其他结构类似物干扰, 在25~1 600 nmol/L范围内呈现出良好线性, 方法检测限和定量下限分别为0.5和1.0 nmol/L。经溯源后的皮质醇测定试剂盒(化学发光免疫分析法)与该候选参考方法同时测定46例临床血清样本的相关性良好。结论建立了一种灵敏、准确且操作简便的血清皮质醇浓度测定候选参考方法, 可为临床常规测定方法的量值溯源及正确度评价提供参考。

关键词：氢化可的松同位素稀释液相色谱-串联质谱候选参考方法

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后生元的作用机制及其在食品领域的应用

食品科学 2024年第8期45卷 354-363页

作者：谢莹莹庞旭周海泳徐健祁姣姣朱剑锋李雪玲杨美艳胡文锋华南农业大学食品学院应用微生物实验室广东广州510642 广州柏芳生物科技有限公司广东广州510765 生物源生物技术(深圳)股份有限公司广东深圳518118 筠海食品(深圳)有限公司广东深圳518000

后生元是由对宿主健康有益的无生命的微生物细胞和/或其成分,以及其代谢产物制成的微生态制剂。后生元具有调节肠道菌群平衡、增强免疫力、抗炎抗菌等功效。与由活性细胞组成的益生菌相比,后生元更安全、更稳定、更有效和更方便。本文... 详细信息

后生元是由对宿主健康有益的无生命的微生物细胞和/或其成分,以及其代谢产物制成的微生态制剂。后生元具有调节肠道菌群平衡、增强免疫力、抗炎抗菌等功效。与由活性细胞组成的益生菌相比,后生元更安全、更稳定、更有效和更方便。本文概述了后生元的由来、来源菌株、制备途径及其优点,并与益生菌进行对比,阐述了后生元的作用机制。此外,本文从功能性食品补充剂、食品品质改良剂、食品防腐剂以及食品脱毒剂4个方面介绍后生元在食品的应用。相信随着后生元的定义、分类、作用成分变得更加清晰,它将会更广泛地应用于普通食品、营养保健品、特殊医学食品、婴幼儿食品和个护日化产品等领域,还将推动一系列基础科学与应用科学的跨越式发展。

关键词：后生元灭活乳酸菌作用机制食品应用

CTAB对口蹄疫病毒样颗粒纯化及组装的影响

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中国兽医科学 2024年

作者：刘潇蔺晓忠严欢李敏李仙月朱映新杨雪何清钟丽君余谦田丽梅杜平华宇生物科技(腾冲)有限公司华派生物技术(集团)股份有限公司

为确定十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethyl ammonium bromide，CTAB)对大肠杆菌发酵菌泥重悬液的澄清效果及口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth disease virus-like particles，FMD VLPs)组装的影响，通过在破碎后的FMDV结构蛋白大肠杆... 详细信息

为确定十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethyl ammonium bromide，CTAB)对大肠杆菌发酵菌泥重悬液的澄清效果及口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth disease virus-like particles，FMD VLPs)组装的影响，通过在破碎后的FMDV结构蛋白大肠杆菌发酵重悬液中加入CTAB，用核酸电泳和鲎试剂显色法分别检测DNA及内毒素含量的变化，确定CTAB对发酵菌泥重悬液的澄清效果，然后经His亲和层析凝胶法纯化目标蛋白，并将纯化蛋白在无细胞体系内组装成FMD VLPs，利用蔗糖密度梯度超速离心结合高效液相分析法对FMD VLPs进行定量分析。结果表明，加入CTAB后，均质离心后上清中宿主DNA含量明显减少(P＜0.01)，纯化后收获目的蛋白浓度未出现明显变化(P＞0.05)，但收获蛋白的内毒素含量明显上升(P＜0.01)，重悬液上清及纯化蛋白Zeta电位绝对值明显降低(P＜0.05)，且FMD VLPs的组装量显著减少(P＜0.05)。CTAB在一定盐浓度溶液中能够沉淀DNA，利于宿主DNA的去除，但同时会改变目标蛋白的带电属性，增强目标蛋白与内毒素的结合，并降低组装体系的稳定性，致使FMD VLPs的组装率显著下降。

关键词： CTAB FMDV结构蛋白 DNA 内毒素 VLPs

桃红侧耳原生质体细胞融合选育高产菌丝蛋白菌株

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食品与发酵工业 2024年

作者：魏荷芬潘晶张健温庆仕刘庆国唐成伦周萍南京高新工大生物技术研究院有限公司江苏科技大学江苏集萃工业生物技术研究所有限公司南京生命原健康科技有限公司

随着人口的快速增长，全球范围内对优质蛋白质的需求日益增强，通过食用菌育种技术培育高产、高蛋白的优质菌株，菌丝体蛋白用作新的蛋白质来源，可以缓解蛋白质短缺的问题。该研究以桃红侧耳GXGD-13-1为原始菌株，通过原生质体细胞融... 详细信息

随着人口的快速增长，全球范围内对优质蛋白质的需求日益增强，通过食用菌育种技术培育高产、高蛋白的优质菌株，菌丝体蛋白用作新的蛋白质来源，可以缓解蛋白质短缺的问题。该研究以桃红侧耳GXGD-13-1为原始菌株，通过原生质体细胞融合技术，提高桃红侧耳菌丝体的蛋白质产量。菌丝体的细胞壁在组合酶M2中酶解3 h，释放的原生质体利用250 g/L的聚乙二醇为融合剂进行聚集融合，最终融合率达到53%，有效克服了桃红侧耳四极性的交配系统亲和率低的育种壁垒。融合再生后的菌株经过选育高产菌丝蛋白菌株的初筛和复筛，得到融合菌株R-1，经凯氏定氮仪测定，计算其菌丝体蛋白质产量比原始菌株GXGD-13-1提高约23%。该文的实验工作，证明了原生质体细胞融合育种技术对选育高产菌丝体蛋白质菌株的有效性，为满足不断增长的蛋白质需求提供新的有效途径。

关键词：桃红侧耳原生质体细胞融合蛋白质酶解聚乙二醇

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不同加工工艺卤蛋的质构与风味特征

中国食品学报 2024年第1期24卷 315-327页

作者：张海茹李祖悦刘忠思陈历水温军辉金永国黄茜华中农业大学食品科学技术学院武汉430070 漯河市卫龙生物技术有限公司河南漯河462000

为分析不同加工工艺卤蛋的品质差异,选取4种市售卤蛋产品(WT溏心卤蛋、WY盐焗卤蛋、XY盐焗卤蛋和XW传统卤蛋),测定其基本营养成分、pH、质构、微观结构以及水分分布状态,并进行风味分析和感官评价。结果表明:4种卤蛋蛋白的蛋白质含量、... 详细信息

为分析不同加工工艺卤蛋的品质差异,选取4种市售卤蛋产品(WT溏心卤蛋、WY盐焗卤蛋、XY盐焗卤蛋和XW传统卤蛋),测定其基本营养成分、pH、质构、微观结构以及水分分布状态,并进行风味分析和感官评价。结果表明:4种卤蛋蛋白的蛋白质含量、蛋黄的脂肪含量(干质量)和蛋黄pH分别在64.48%~74.57%,53.19%~60.55%,6.53~7.13之间。WT溏心卤蛋蛋白和蛋黄的水分含量最高(P <0.05),分别为77.81%和52.58%。WT溏心卤蛋和XW传统卤蛋的蛋黄硬度(530.43 g和595.57 g)显著低于两种盐焗卤蛋(P <0.05),蛋黄颗粒较为紧密。在4种卤蛋中分别检出67,53,29,25种风味物质,主要挥发性成分为酚类或吡嗪类。水分分布结果显示蛋白和蛋黄的水分流动性均具有显著差异(P <0.05)。72位鉴评人员对卤蛋进行感官评价,得出WT溏心卤蛋的感官总分最高(76.19分)(P <0.05),具有蛋白嫩滑、蛋黄细腻且不噎口的特点。本研究明确了不同加工工艺卤蛋的质地和风味特点,为卤蛋加工企业选择合适的加工工艺提供了数据支持。

关键词：卤蛋质构风味感官分析