CTAB对口蹄疫病毒样颗粒纯化及组装的影响

作     者：刘潇 蔺晓忠 严欢 李敏 李仙月 朱映新 杨雪 何清 钟丽君 余谦 田丽梅 杜平 

作者机构：华宇生物科技(腾冲)有限公司 华派生物技术(集团)股份有限公司 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：中央引导地方科技发展资金项目(202207AC110015) 云南省生物医药重大科技专项(202302AA310023) 云南省创新引导与科技型企业培育计划项目(202304AP080110) 云南省科技人才与平台计划项目(202405AC350099) 

主　　题：CTAB FMDV结构蛋白 DNA 内毒素 VLPs 

摘      要：为确定十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethyl ammonium bromide，CTAB)对大肠杆菌发酵菌泥重悬液的澄清效果及口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth disease virus-like particles，FMD VLPs)组装的影响，通过在破碎后的FMDV结构蛋白大肠杆菌发酵重悬液中加入CTAB，用核酸电泳和鲎试剂显色法分别检测DNA及内毒素含量的变化，确定CTAB对发酵菌泥重悬液的澄清效果，然后经His亲和层析凝胶法纯化目标蛋白，并将纯化蛋白在无细胞体系内组装成FMD VLPs，利用蔗糖密度梯度超速离心结合高效液相分析法对FMD VLPs进行定量分析。结果表明，加入CTAB后，均质离心后上清中宿主DNA含量明显减少(P0.01)，纯化后收获目的蛋白浓度未出现明显变化(P0.05)，但收获蛋白的内毒素含量明显上升(P0.01)，重悬液上清及纯化蛋白Zeta电位绝对值明显降低(P0.05)，且FMD VLPs的组装量显著减少(P0.05)。CTAB在一定盐浓度溶液中能够沉淀DNA，利于宿主DNA的去除，但同时会改变目标蛋白的带电属性，增强目标蛋白与内毒素的结合，并降低组装体系的稳定性，致使FMD VLPs的组装率显著下降。