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表达鸡传染性法氏囊病毒vp2蛋白的干酪乳杆菌免疫保护效力

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生物工程学报 2014年第11期30卷 1679-1690页

作者：林红丽侯申达王嵩王宇鹏栾云艳侯喜林黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中山大学医学院广东广州510000

利用干酪乳杆菌作为传染性法氏囊病毒(IBDV)vp2抗原传递系统,探讨口服雏鸡的免疫次数、免疫剂量、免疫途径和攻毒保护效果。用pLA-vp2重组干酪乳杆菌对5日龄雏鸡进行二次和三次免疫,并设108、109、1010 CFU/mL的重组干酪乳杆菌组,间接EL... 详细信息

利用干酪乳杆菌作为传染性法氏囊病毒(IBDV)vp2抗原传递系统,探讨口服雏鸡的免疫次数、免疫剂量、免疫途径和攻毒保护效果。用pLA-vp2重组干酪乳杆菌对5日龄雏鸡进行二次和三次免疫,并设108、109、1010 CFU/mL的重组干酪乳杆菌组,间接ELISA检测血清IgG和小肠洗液sIgA,末免后7 d攻毒,计算保护效果。根据确定的2次免疫和109 CFU/mL免疫剂量免疫5日龄雏鸡,分别口服、滴鼻/点眼pLA-vp2/***,口服、肌注商品活苗及口服pLA/***和PBS为对照,监测IgG和sIgA抗体水平;末免后7 d检测脾淋巴细胞增殖情况并攻毒,7 d后剖检,观察法氏囊损伤程度并记录病变得分和保护率。结果表明各组的特异性sIgA、IgG抗体水平显著高于对照组(Pvp2/***组的淋巴细胞刺激指数显著高于其他组(P<0.01),保护率高达83.3%,免疫保护效果优于滴鼻/点眼组。因此,构建的重组干酪乳杆菌的安全性优于商品活苗,可以作为IBDV候选疫苗。

关键词：传染性法氏囊病毒(IBDV) vp2蛋白重组干酪乳杆菌黏膜免疫免疫次数免疫剂量免疫途径保护率

犬细小病毒vp2蛋白在真核细胞中的分泌表达及特性

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微生物学报 2009年第5期49卷 648-652页

作者：王微李秀锦仲飞王幸兴韩冬梅靳慧君潘素敏李巍河北农业大学动物科技学院基础兽医系保定071001 燕山大学环境与化学工程学院生物工程系秦皇岛066004

【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒vp2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)vp2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达... 详细信息

【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒vp2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)vp2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒。然后再通过PCR方法从含有犬细小病毒vp2基因的质粒中扩增vp2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp载体中CD5信号肽的下游,构建成vp2基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5sp-vp2。经磷酸钙介导转染293T细胞,使其在真核细胞中进行分泌表达,并通过ELISA检测表达的vp2蛋白与犬转铁蛋白受体(TfR)结合的活性。【结果】序列分析结果表明,本实验构建的犬细小病毒vp2基因真核分泌型表达载体结构正确,将该表达载体转染的293T细胞,在培养基中通过Western-blot检测到有vp2重组蛋白的存在。经ELISA检测表明表达的重组vp2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。【结论】利用人的CD5信号肽实现了犬细小病毒vp2蛋白在真核细胞中的分泌表达,表达的vp2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。

关键词：犬细小病毒 vp2蛋白 293T细胞分泌性表达 TfR

猪细小病毒vp2蛋白在干酪乳杆菌表面的表达

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生物工程学报 2007年第2期23卷 315-318页

作者：徐义刚崔丽春马广鹏唐丽杰葛俊伟夏春丽乔薪媛赵丽丽李一经东北农业大学动物医学院哈尔滨150030 东北林业大学哈尔滨150040

将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原vp2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-vp2,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒vp2蛋白的重组干酪乳杆菌系统,经2%乳糖在MRS培养基中... 详细信息

将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原vp2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-vp2,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒vp2蛋白的重组干酪乳杆菌系统,经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达,SDS-PAGE检测表明,有约74kD蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。Western-blot结果分析表明,表达的蛋白可被鼠源PPV抗血清所识别,间接免疫荧光实验结果表明,所表达的蛋白能够在干酪乳杆菌菌体表面检测到。

关键词：猪细小病毒 vp2蛋白干酪乳杆菌表面表达

一株抗蓝舌病病毒8型vp2蛋白单克隆抗体识别的线性抗原表位的鉴定

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生物工程学报 2017年第8期33卷 1244-1252页

作者：臧明鑫李佳璇谢双羽崔文姜艳平徐义刚乔薪瑗王丽周晗刘敏李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究本实验室制备的一株抗蓝舌病病毒8型(BTV-8)vp2蛋白的单克隆抗体(MAb)3G11识别的B细胞抗原表位,利用噬菌体肽库展示技术对3G11识别的抗原表位进行筛选并鉴定。经过4轮淘选后挑取蓝斑测序,测序结果经分析后获得KLLAT序列,与BTV-8 ... 详细信息

为研究本实验室制备的一株抗蓝舌病病毒8型(BTV-8)vp2蛋白的单克隆抗体(MAb)3G11识别的B细胞抗原表位,利用噬菌体肽库展示技术对3G11识别的抗原表位进行筛选并鉴定。经过4轮淘选后挑取蓝斑测序,测序结果经分析后获得KLLAT序列,与BTV-8 vp2蛋白氨基酸序列比对后获得共同的短肽序列为283LL284;合成4种短肽序列:KLLAA、KALAT、KLAAT和KLLAT,与3G11细胞上清和腹水分别进行间接ELISA鉴定,结果表明,短肽KLLAA和KLLAT与3G11细胞上清及腹水具有较强的结合能力;与24种BTV标准阳性血清反应结果表明,这两种短肽都可与BTV-8阳性血清发生特异性反应;序列分析结果可见,该表位的氨基酸序列283LL284在不同来源的BTV-8毒株间保守,确定283LL284为MAb3G11识别抗原表位的关键氨基酸。本研究为建立8型BTV特异性的免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒8型 vp2蛋白单克隆抗体抗原表位

表达猪细小病毒vp2蛋白的重组干酪乳杆菌诱导小鼠产生特异性抗体

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中国农业科学 2008年第3期41卷 846-851页

作者：徐义刚崔丽春葛俊伟唐丽杰赵丽丽李一经东北农业大学动物医学院东北林业大学研究生处

【目的】研究以干酪乳杆菌作为传递抗原活载体表达猪细小病毒主要免疫保护性抗原vp2蛋白的免疫特性。【方法】将构建的重组猪细小病毒(PPV)vp2基因的细胞表面表达型载体pPG-vp2电转化干酪乳杆菌***393,获得阳性重组菌pPG-vp2/***393。... 详细信息

【目的】研究以干酪乳杆菌作为传递抗原活载体表达猪细小病毒主要免疫保护性抗原vp2蛋白的免疫特性。【方法】将构建的重组猪细小病毒(PPV)vp2基因的细胞表面表达型载体pPG-vp2电转化干酪乳杆菌***393,获得阳性重组菌pPG-vp2/***393。重组菌以2%乳糖为诱导物,在MRS培养基中进行诱导,经SDS-PAGE、Westernblot及间接免疫荧光分析,目的蛋白获得表达。将重组菌及空质粒菌株分别口服接种Balb/c小鼠,收集粪便及肠黏液样品测定小鼠产生抗vp2的特异性sIgA,采集血液样品测定小鼠产生抗vp2的特异性IgG,并对获得的抗体进行PPV中和活性的测定。【结果】重组干酪乳杆菌pPG-vp2/***393免疫小鼠能够产生明显的抗PPV的sIgA和IgG抗体水平,其对PPV的中和效价分别为1﹕24和1﹕128。【结论】为PPV重组乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要的物质基础。

关键词：猪细小病毒 vp2蛋白干酪乳杆菌黏膜免疫

传染性法氏囊病毒vp2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定

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畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 692-697页

作者：宋幸辉王睿王选年鲍登克杨苏珍卢清侠王寅彪赵东张改平河南农业大学郑州450002 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室郑州450002 新乡学院生物技术研究所新乡453003

为鉴定IBDV vp2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BAL... 详细信息

为鉴定IBDV vp2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份。应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性。结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1∶105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合。本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础。

关键词： IBDV vp2蛋白 P22多肽抗原表位免疫

表达流行毒株vp2蛋白的IBDV重组疫苗株rGtHLJvp2的构建及其免疫效力的评价

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 794-799页

作者：高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为应对传染性法氏囊病病毒(IBDV)变异毒株及超强毒株(vvIBDV)等突发疫情的出现,解决传统疫苗株筛选费时费力的难题,在流行病学调查的基础上,克隆了超强毒株HLJ0504的vp2基因,并突变细胞嗜性决定氨基酸位点(Q253H/A284T),用其替换IBDV弱... 详细信息

为应对传染性法氏囊病病毒(IBDV)变异毒株及超强毒株(vvIBDV)等突发疫情的出现,解决传统疫苗株筛选费时费力的难题,在流行病学调查的基础上,克隆了超强毒株HLJ0504的vp2基因,并突变细胞嗜性决定氨基酸位点(Q253H/A284T),用其替换IBDV弱毒株Gt基因组的相应区段,成功获得1株表达流行vvIBDV vp2蛋白的重组病毒rGtHLJvp2。体内、外复制动力学研究表明,该重组病毒与亲本病毒Gt的复制能力相当。动物试验结果表明,该重组病毒对接种鸡无明显致病性,接种鸡法氏囊指数均在0.7以上,法氏囊无明显萎缩现象。该重组病毒可以诱导机体产生良好的免疫应答,其抗体水平明显高于亲本毒,能够完全抵抗vvIBDV的攻击。另外,该重组病毒具有良好的遗传稳定性。本研究结果为新型传染性法氏囊病疫苗的研发奠定了基础,对于IBDV突发疫情的应急防控具有重要意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒重组病毒 vp2蛋白免疫效力

Asia1型口蹄疫病毒vp2蛋白B细胞线性表位的鉴定

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畜牧兽医学报 2009年第10期40卷 1508-1513页

作者：徐宗香高明春李勐李爽刘思莹葛兰云张润祥马波王君伟东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

为了对Asia1型口蹄疫病毒vp2蛋白进行抗原表位作图,设计了7个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个vp2蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用Asia1型口蹄疫感染血清对7个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出vp2蛋白B细... 详细信息

为了对Asia1型口蹄疫病毒vp2蛋白进行抗原表位作图,设计了7个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个vp2蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用Asia1型口蹄疫感染血清对7个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出vp2蛋白B细胞线性抗原表位位于氨基末端的第1-44氨基酸区域,并且证实O型、A型、C型口蹄疫标准血清和感染SAT2型口蹄疫康复期的牛血清也能识别融合蛋白F1(1-44 aa)。在此基础上,针对F1(1-44 aa)短肽,设计了6个相互重叠5个氨基酸的短肽片段,进一步鉴定出了vp2蛋白B细胞线性表位位于氨基末端的第6-15氨基酸区域。

关键词：口蹄疫病毒 vp2蛋白 B细胞线性表位鉴定

虹鳟IPNV分离株vp2蛋白的表达及免疫原性检测

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大连海洋大学学报 2019年第2期34卷 179-185页

作者：赵景壮贺文斌徐黎明纪锋曹永生胡朝卢彤岩中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 四川省都江堰管理局四川都江堰611830

为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白vp2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能... 详细信息

为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白vp2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能性,对其特定区段进行了原核表达,并利用表达蛋白制备鼠抗血清及免疫学鉴定。结果表明:本实验室得到的分离株与中国已报道的毒株具有不同的来源;SDS-PAGE分析显示,表达纯化的vp2蛋白为单一条带,相对分子质量约为45 000;ELISA分析显示,利用表达蛋白制备的鼠抗血清与IPNV分离株细胞培养物的效价为1∶20 000,与vp2蛋白的效价为1∶40 000;间接免疫荧光分析显示,细胞感染IPNV病毒24、48 h后,该鼠抗血清均能与IPNV毒株发生特异性反应,并呈现出特异性绿色荧光。研究表明,本研究中表达的vp2蛋白与IPNV病毒的vp2蛋白具有相近的免疫原性,这一结果为IPNV检测方法的建立及疫苗的构建提供了重要的试验依据。

关键词：传染性胰腺坏死病病毒蛋白表达 vp2蛋白免疫原性