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中国兽医科学 2023年第5期53卷 613-620页

作者：冯政苏洋洋全柯吉秦涛陈素娟彭大新扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为鉴定鸡白痢沙门菌生物被膜形成不依赖Rpo S的调控基因,以鸡白痢沙门菌S6702及其rpos基因缺失株S6702Δrpos为母本,对S6702生物被膜状态和S6702Δrpos生物被膜状态(S7BF vs S7SBF)及S6702Δrpos浮游状态和S6702Δrpos生物被膜状态(S7SF... 详细信息

为鉴定鸡白痢沙门菌生物被膜形成不依赖Rpo S的调控基因,以鸡白痢沙门菌S6702及其rpos基因缺失株S6702Δrpos为母本,对S6702生物被膜状态和S6702Δrpos生物被膜状态(S7BF vs S7SBF)及S6702Δrpos浮游状态和S6702Δrpos生物被膜状态(S7SFY vs S7SBF)进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,构建基因缺失株并验证其生物被膜形成能力。结果显示,S7BF vs S7SBF组共鉴定出83个差异表达基因,S7SFY vs S7SBF组共鉴定出1984个差异表达基因,筛选出15个可能与生物被膜形成相关的基因。以STM2361和STM1703为靶标构建基因缺失株,结晶紫染色定量结果显示,STM2361不影响鸡白痢沙门菌生物被膜的形成,而STM1703缺失能增强鸡白痢沙门菌的生物被膜形成能力。本研究鉴定出不依赖rpos的鸡白痢沙门菌生物被膜形成调控基因,丰富了鸡白痢沙门菌生物被膜调控的信息。

关键词：鸡白痢沙门菌生物被膜 rpos 转录组分析

The rpos deficiency suppresses acetate accumulation in glucose-enriched culture of Escherichia coli under an aerobic condition

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Frontiers of Chemical Science and Engineering 2012年第2期6卷 152-157页

作者： Prayoga SURYADARMA Yoshihiro OJIMA Yuto FUKUDA Naohiro AKAMATSU Masahito TAYA Division of Chemical Engineering Graduate School of Engineering Science Osaka University Osaka 560-8531 Japan

The role ofEscherichia coli rpos on the central carbon metabolism was investigated through analyzing the deficiency of this regulon gene under aerobic and glucose- enriched culture conditions. The experimental results showed that while the wild type cells exhibited an overflow metabolism effect, the rpos-deleting mutation alleviated this effect with the significant suppression of acetate accumulation under a high glucose condition. This gene deletion also induced the twofold upregulation ofgltA and one-tenth downregulation of poxB, respectively. The overflow metabolism effect was confirmed to be recovered by re-introducing rpos gene into the mutant. These results demonstrated rpos changed the central carbon metabolism toward acetate overflow through dehydrogenation of pyruvate and reduction of TCA cycle activity.

关键词： Escherichia coli rpos aerobic and glucoseenriched culture overflow metabolism

rpos和RpoN对鼠伤寒沙门菌重要生物学特征的影响及其调控作用研究

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RpoS和RpoN对鼠伤寒沙门菌重要生物学特征的影响及其调控作用研究

作者：李鑫鸽中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1.研究转录调控因子rpos与RpoN在鼠伤寒沙门菌抗逆生长、生物膜形成能力、毒力等方面的调控作用,探究二者调控关系,为进一步对鼠伤寒沙门菌进行抗菌治疗提供支持。2.通过对鼠伤寒沙门菌进行抗逆条件下的蛋白质组学分析,探究rpos与R... 详细信息

目的:1.研究转录调控因子rpos与RpoN在鼠伤寒沙门菌抗逆生长、生物膜形成能力、毒力等方面的调控作用,探究二者调控关系,为进一步对鼠伤寒沙门菌进行抗菌治疗提供支持。2.通过对鼠伤寒沙门菌进行抗逆条件下的蛋白质组学分析,探究rpos与RpoN两个调控因子间的通路关联,为研究σ因子家族间调控关系提供参考。方法:1.选择SH15SF175鼠伤寒沙门菌为研究对象,通过CRISPR方法构建rpo S基因敲除株和rpo Srpo N双基因敲除株,通过菌落PCR和m RNA表达水平进行验证。2.通过对敲除前后菌株在不同p H、渗透压、氧应激、低水分子活度、干燥条件下的生长情况进行测定,评估菌株抗逆生长能力变化;采用结晶紫染色法、激光共聚焦显微镜观察法以及刚果红培养基培养法进行生物膜形成能力的评价;通过鞭毛相关基因的m RNA表达水平、运动性实验和Hela细胞对细菌的黏附和侵袭实验来评价敲除前后菌株毒力特征变化;采用Biolog生化鉴定进行生化反应比较分析。3.采用DIA蛋白质组学对野生株与SF175?rpo S、SF175?rpo Srpo N的蛋白质产物进行鉴定,通过结构域分析和GO功能分析对差异蛋白质功能进行描述,通过KEGG通路分析找到主要差异蛋白质通路。结果:1.通过菌落PCR和m RNA表达水平的方法验证了SF175?rpo S和SF175?rpo Srpo N构建成功。2.结晶紫染色法测定生物膜实验结果显示SF175?rpo S和SF175?rpo Srpo N较野生株生物膜形成能力均减弱,在28℃条件下,SF175?rpo Srpo N生物膜形成能力较SF175?rpo S有所增强。3.刚果红实验发现SF175?rpo S和SF175?rpo Srpo N较野生株纤维素含量明显下降,但SF175?rpo S和SF175?rpo Srpo N之间形态并无明显差异。4.毒力实验结果显示SF175?rpo S的黏附率增加,侵袭率降低,SF175?rpo Srpo N的黏附率和侵袭率均降低。5.生化鉴定结果显示10种生化反应值发生改变,其中两个敲除株对应的8个孔的细菌生化反应值较野生株降低,2个孔较野生株升高,且SF175?rpo Srpo N的生化反应值高于SF175?rpo S。***蛋白质组学数据显示面对高渗环境,SF175?rpo S、SF175?rpo Srpo N较野生株在海藻糖6-磷酸合成酶(Ots A)的表达上出现显著下调,结构域预测分析显示差异蛋白质主要在ABC转运子和响应调节接收子,GO功能分析显示28℃高渗条件下SF175?rpo Srpo N和SF175?rpo S的蛋白差异最显著的通路是谷氨酰胺家族氨基酸生物合成,KEGG通路分析表明28℃高渗条件下SF175?rpo S和SF175?rpo Srpo N差异蛋白通路最显著的是精氨酸合成通路。结论:1.本研究证实了rpo S敲除后,细菌在不同环境压力下的生长能力和生物膜形成能力和毒力作用均有所减弱,显示rpo S在应对环境胁迫、生物膜形成和毒力方面时起到十分重要的调控作用。2.本研究发现rpo S和rpo N在不同环境压力、生物膜形成及毒力方面都发挥了重要的调控作用,且均显示出不同的调控方向。3.本研究蛋白质组学分析显示rpo S通过ots A,rpo N通过hpf共同参与应对高渗环境压力,精氨酸合成通路可能是28℃高渗环境下rpo S和rpo N共同参与调控的重要机制之一。

关键词： rpos RpoN 抗逆生长生物膜蛋白质组学

大肠杆菌RNA分子伴侣Hfq与DsrA和rpos作用机制的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2013年第7期40卷 627-633页

作者：王丽君王维维龚庆国吴季辉施蕴渝中国科学技术大学合肥微尺度物质科学国家实验室(筹) 生命科学学院合肥230026

RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpos编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpos的翻译激活是必需的.然... 详细信息

RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpos编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpos的翻译激活是必需的.然而,Hfq使用何种机制来促进sRNA和mRNA配对一直有两种并不互斥的模型存在:Hfq远侧和近侧两个表面同时结合sRNA和mRNA,使得两条RNA相互靠近,便于形成碱基配对;Hfq可能结合一条或者两条RNA,改变它们的二级结构或者三级结构,从而促进sRNA-mRNA配对的实现.最近的研究报道,成功在体外捕捉到了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物,测定了AU6A-Hfq-A7三元复合物的晶体结构,并且在大肠杆菌体内证实了三元复合物的形成对于Hfq帮助sRNA DsrA激活mRNA rpos的翻译是重要的.本文以sRNA DsrA和mRNA rpos为例综述了蛋白质Hfq与RNA的结合特性,同时也讨论了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物的存在对于研究sRNA介导的调控机制的一些启示.

关键词： Hfq RNA分子伴侣 sRNA DsrA mRNA rpos Hfq-RNA复合物晶体结构翻译激活

鼠伤寒沙门菌rpos基因缺失菌株的构建及rpos因子在环境胁迫下的作用

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食品科学 2018年第6期39卷 141-147页

作者：梁运改桂萌王顺刘密张清周康四川农业大学食品学院四川雅安625014 北京市水产科学研究所北京100071

鼠伤寒沙门菌在应对环境胁迫时,通过自身的调节机制适应环境,其中Rpo S因子在其中起着重要的作用。为研究Rpo S因子在环境胁迫下对鼠伤寒沙门菌的影响,本研究用Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌Salmonella typhimurium 1344的rpo S缺失... 详细信息

鼠伤寒沙门菌在应对环境胁迫时,通过自身的调节机制适应环境,其中Rpo S因子在其中起着重要的作用。为研究Rpo S因子在环境胁迫下对鼠伤寒沙门菌的影响,本研究用Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌Salmonella typhimurium 1344的rpo S缺失菌株SL1344/Drpo S,并在不同条件下比较亲本菌株SL1344和基因缺失菌株SL1344/Drpo S的生长情况,这些条件分别为:3.5%NaCl、42℃、pH 4.0。此外本实验还重点研究了沙门菌在不同盐质量分数中预处理不同时间后置于含3.5%NaCl的培养基中培养的生长情况,以说明rpo S对于沙门菌在逆境中适应性的影响。结果表明在3.5%NaCl条件下,二者生长均受到较大的抑制作用,且SL1344/Drpo S受到的抑制作用更大,SL1344的最大生长速率为SL1344/Drpo S的2.49倍;在42℃条件下,SL1344的最大生长速率仅为SL1344/Drpo S的1.33倍,而在pH 4.0条件下,SL1344的最大生长速率为SL1344/Drpo S的2.77倍;此外,二者在不同盐质量分数中处理不同时间后的生长情况也存在差异。rpo S基因缺失菌株SL1344/Drpo S的构建为进一步研究Rpo S因子在鼠伤寒沙门菌应对环境胁迫的作用机制,以及为预防和控制由沙门菌导致的食源性疾患提供了理论支持。

关键词：鼠伤寒沙门菌基因敲除 rpos 渗透压温度 pH值

rpos基因插入突变对铜绿假单胞菌两个吩嗪合成基因簇的调控

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微生物学报 2010年第3期50卷 411-417页

作者：周金凤葛宜和刘婷程显好王磊高兴喜鲁东大学生命科学学院烟台264000

【目的】为了研究铜绿假单胞菌rpos基因对吩嗪(Phenazine)合成基因簇phz1和phz2的调控方式与机制。【方法】采用抗庆大霉素基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了rpos基因突变株PA-SG;同时利用lacZ的翻译融... 详细信息

【目的】为了研究铜绿假单胞菌rpos基因对吩嗪(Phenazine)合成基因簇phz1和phz2的调控方式与机制。【方法】采用抗庆大霉素基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了rpos基因突变株PA-SG;同时利用lacZ的翻译融合表达载体pME6015,构建了phz1′-′lacZ和phz2′-′lacZ翻译融合表达载体pMEZ1和pMEZ2。采用电转化法分别将pMEZ1、pMEZ2和pME6015导入铜绿假单胞菌突变株PA-SG和野生株PAO1,用Miller法检测融合β-半乳糖苷酶活性。【结果】在KMB或PPM培养基中,pMEZ1在突变株PA-SG中的表达均增强,为野生株的4-5倍;而pMEZ2在突变株PA-SG中的表达均降低,野生株是突变株的2-3倍。【结论】由此推测,铜绿假单胞菌rpos基因对两个不同吩嗪合成基因簇的调控作用具有特异性,在一定程度上,rpos负调控phz1,正调控phz2。

关键词：铜绿假单胞菌 phz1 phz2 rpos 吩嗪

rpos基因缺失突变对荧光假单胞菌胁迫耐受性、群体感应及腐败活性的影响

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微生物学报 2018年第9期58卷 1563-1572页

作者：沈碧妙吴淘栩朱俊杰徐琳娜刘小香朱军莉杭州医学院检验医学院浙江杭州310053 杭州医学院基础医学部浙江杭州310053 浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品安全重点实验室浙江杭州310035

【目的】微生物活动是引起食品腐败的主要原因,研究食品腐败菌的腐败作用调控机制对于保证食品的质量和安全具有重要意义。荧光假单胞菌是一种代表性的食品腐败菌,本文旨在研究RNA聚合酶的选择性sigma因子Rpo S在荧光假单胞菌致腐败过... 详细信息

【目的】微生物活动是引起食品腐败的主要原因,研究食品腐败菌的腐败作用调控机制对于保证食品的质量和安全具有重要意义。荧光假单胞菌是一种代表性的食品腐败菌,本文旨在研究RNA聚合酶的选择性sigma因子Rpo S在荧光假单胞菌致腐败过程中的作用。【方法】运用同源重组的方法构建荧光假单胞菌冷藏鱼分离株的rpo S基因缺失突变株,比较野生型和突变株暴露于不同胁迫条件下的存活率;通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析野生型和突变株产生高丝氨酸内酯类(AHLs)群体感应信号分子的种类和含量;检测野生型和突变株接种于灭菌三文鱼汁后4°C贮存过程中的菌落总数和挥发性盐基氮的生成量。【结果】成功构建了荧光假单胞菌rpo S基因缺失突变株。rpo S基因的缺失导致荧光假单胞菌对10 mmol/L H2O2和15%乙醇的耐受性显著降低,对150μg/m L结晶紫和175 mmol/L醋酸的耐受性有一定程度增强,不影响其对47°C和20%Na Cl的耐受性。荧光假单胞菌在rpo S基因缺失突变后长链信号分子C_(10)-HSL、C_(12)-HSL和C_(14)-HSL的含量增加。在灭菌三文鱼汁中的腐败活性检测表明rpo S基因缺失可导致荧光假单胞菌挥发性盐基氮的生成量显著降低。【结论】荧光假单胞菌的Rpo S不仅调节细菌对多种胁迫条件的耐受性,还影响AHL群体感应和腐败活性。

关键词： rpos 荧光假单胞菌耐受性食品腐败群体感应

rpos对鳗弧菌MHK3株Hcp表达和杀菌能力的影响

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渔业科学进展 2021年第6期42卷 125-134页

作者：王小鹿李杰李贵阳唐磊杨慧超莫照兰中国海洋大学海洋生命学院山东青岛266003 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室山东青岛266071 中国海洋大学三亚海洋研究院海南三亚572000 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306

溶血素共调节蛋白(Hcp)的合成和分泌是六型分泌系统(T6SS)行使功能的重要特征。RNA聚合酶的σ亚基rpos参与调节细菌的生长和应激反应。为了探究rpos对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)T6SS的调控作用,本研究构建了 MHK3Δrpos突变株,检测了... 详细信息

溶血素共调节蛋白(Hcp)的合成和分泌是六型分泌系统(T6SS)行使功能的重要特征。RNA聚合酶的σ亚基rpos参与调节细菌的生长和应激反应。为了探究rpos对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)T6SS的调控作用,本研究构建了 MHK3Δrpos突变株,检测了部分表型特征的变化;利用lacZ半乳糖苷酶报告基因检测了突变株hcpl和hcp2在转录水平的变化;进行Western blot并定量分析突变株Hcp在翻译水平的变化;并通过细菌拮抗实验检测了突变株杀菌能力的变化。结果显示,MHK3Δrpos突变株的生长情况、泳动性、明胶酶活性及酪蛋白酶活性与MHK3野生株相比无显著差异(P>0.05),而平台早期的菌膜形成能力有显著上升(Prpos的hcpl和hcp2在转录水平的表达量均较MHK3有显著上升(Prpos在胞内和胞外Hcp的分泌均有显著升高(Prpos对大肠杆菌(Escherichia coli) E5的杀菌能力约为MHK3的1%。研究表明,rpos对鳗弧菌MHK3株的生长情况、泳动性、明胶酶活性及酪蛋白酶活性均无显著调控作用,但对平台早期的菌膜形成能力具有一定的负调控作用,在转录和翻译水平上也负调控Hcp的表达。而在杀菌能力上,rpos发挥一定的正调控作用。说明菌株的杀菌能力强弱并非直接与Hcp的表达和分泌量正相关。本研究为进一步阐明T6SS的调控机制及其介导的杀菌作用机制提供了新思路,并丰富了其理论基础。

关键词：鳗弧菌 rpos Hcp T6SS 杀菌

Function of rpos in stress survival,quorum sensing,and spoilage potential of ***

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Function of RpoS in stress survival,quorum sensing,and spoil...