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microrna-1在心肌肥大中对L-型钙通道β_2亚基的负性调控作用

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中国应用生理学杂志 2012年第4期28卷 304-308页

作者：吴扬耿鹏王玉琴刘艳南通大学航海医学研究所江苏南通226001

目的:研究微小RNA-1(microrna-1,miR-1)在心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)的负性调控作用及机制。方法:应用异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;采用HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用数据库microCosm预测miR-... 详细信息

目的:研究微小RNA-1(microrna-1,miR-1)在心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)的负性调控作用及机制。方法:应用异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;采用HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用数据库microCosm预测miR-1的靶基因;构建含Cavβ23’UTR报告基因质粒和miR-1瞬时共转染HEK293细胞,验证Cavβ2为miR-1靶基因;应用qRT-PCR或Western blot方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、miR-1和Cavβ2mRNA和蛋白表达水平;转染miR-1模拟物上调miR-1或应用Cavβ2RNAi干扰Cavβ2蛋白的表达,观察对心肌细胞肥大的影响。结果:①在ISO诱导的心肌细胞肥大中,miR-1表达显著下降;应用miR-1 mimic转染心肌细胞使miR-1表达上调,心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达均显著低于ISO组(P1的潜在靶点;将miR-1和含Cavβ23’UTR报告基因质粒共转染HEK293细胞,其萤光值显著降低(P1)。转染miR-1 mimic使心肌细胞miR-1表达上调,可以明显抑制Cavβ2蛋白的表达。③在ISO诱导心肌细胞肥大中Cavβ2表达较对照组显著增加;应用RNAi技术下调Cavβ2表达可明显抑制心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加。结论:预测并验证L-型钙通道β2亚基为miR-1的靶基因。miR-1可能通过抑制其靶基因Cavβ2蛋白的表达,降低细胞内钙离子浓度,抑制心肌细胞肥大。

关键词： microrna-1 L-型钙通道β2亚基心肌细胞肥大

microrna-1对肝癌细胞BAG4表达的影响

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 479-482,487页

作者：刘煜李华李东张涛第三军医大学研究生管理大队重庆400038 成都军区总医院肿瘤诊治中心 610083

目的观察microrna-1(miR-1)对肝癌细胞系Hep3B死亡结构域沉默子(BAG4)的表达及细胞凋亡的影响。方法 Western blot检测肝癌组织中BAG4蛋白表达情况;将过表达miR-1的质粒转染肝癌细胞Hep3B,分别用RT-qPCR及Western blot检测BAG4 mRNA和... 详细信息

目的观察microrna-1(miR-1)对肝癌细胞系Hep3B死亡结构域沉默子(BAG4)的表达及细胞凋亡的影响。方法 Western blot检测肝癌组织中BAG4蛋白表达情况;将过表达miR-1的质粒转染肝癌细胞Hep3B,分别用RT-qPCR及Western blot检测BAG4 mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡;生物信息学软件分析miR-1和BAG4 3’UTR作用关系。结果 BAG4蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织;Hep3B转染miR-1过表达质粒后,相较于阴性对照(NC)组,BAG4mRNA和蛋白水平的表达均有所降低;早期凋亡率明显增高。生物信息学分析提示BAG4是miR-1潜在靶基因。结论 miR-1可以诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,其作用可能和抑制BAG4表达有关。

关键词：肝癌 microrna-1 死亡结构域沉默子凋亡

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中南大学学报（医学版） 2011年第10期36卷 964-971页

作者：李健哲彭军王晨静邓汉武李元建中南大学药学院药理学系长沙410078 广西中医学院附属瑞康医院药剂科南宁530011 青岛大学医学院附属医院药剂科山东青岛266003

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对心肌细胞凋亡的抑制作用及其潜在的机制。方法:异丙肾上腺素(10-5 mol/L)孵育48 h以诱导体外培养的大鼠心肌细胞凋亡,不同浓度的CGRP(10-8或10-7mol/L)在异丙肾上腺素孵育前1 h给药。药物处理结束后,... 详细信息

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对心肌细胞凋亡的抑制作用及其潜在的机制。方法:异丙肾上腺素(10-5 mol/L)孵育48 h以诱导体外培养的大鼠心肌细胞凋亡,不同浓度的CGRP(10-8或10-7mol/L)在异丙肾上腺素孵育前1 h给药。药物处理结束后,检测心肌细胞凋亡率和细胞内活性氧的水平以及microrna-1和microrna-133a表达的变化。结果:异丙肾上腺素能显著增加心肌细胞的凋亡和细胞内活性氧的产生,同时伴随着microrna-1表达的上调和microrna-133a表达的下调,预先给予CGRP可显著抑制异丙肾上腺素的上述效应,但CGRP的有益效应可被CGRP受体拮抗剂所取消。结论:CGRP可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制活性氧的产生进而调节microrna-1和microrna-133a的表达有关。

关键词：降钙素基因相关肽异丙肾上腺素心肌细胞凋亡活性氧 microrna-1 mi-croRNA-133a

microrna-1调控人结肠癌细胞周期及其机制的研究

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中国细胞生物学学报 2017年第3期39卷 271-279页

作者：陈通克陈林华王教王丽花温州医科大学实验动物中心温州325000 温州医科大学眼视光学院温州325027

该研究通过阳离子脂质体介导的方法将microrna-1(miR-1)转染入人结肠癌细胞HT-29和HCT 116,使其过表达。应用MTS法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后细胞增殖及细胞周期的变化情况,结果发现,miR-1能使HT-29和HCT 116细胞周期滞留在G... 详细信息

该研究通过阳离子脂质体介导的方法将microrna-1(miR-1)转染入人结肠癌细胞HT-29和HCT 116,使其过表达。应用MTS法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后细胞增殖及细胞周期的变化情况,结果发现,miR-1能使HT-29和HCT 116细胞周期滞留在G1期,显著抑制细胞的增殖;通过靶基因预测及荧光素酶分析法预测并确定CCND1(cyclin D1)和CDK6(cyclin dependent kinases 6)是miR-1作用的靶基因。采用Western blot法检测细胞内相关蛋白质表达水平,结果发现,miR-1能下调HT-29和HCT 116中细胞周期相关蛋白CDK2、CDK4、p-Rb(retinoblastoma gene)、E2F1(E2F transcription factor 1)、p-Cdc2(cell division cycle 2)等蛋白质水平。通过人结肠癌裸鼠动物模型检测miR-1对结肠癌细胞体内成瘤能力的改变情况,研究发现,miR-1能在体显著抑制人结肠癌细胞增殖能力。该研究表明,miR-1通过下调靶基因cyclin D1、CDK6的表达,并影响细胞周期相关蛋白CDK2、CDK4的水平,下调了决定细胞周期进程的关键蛋白Rb及Cdc2的磷酸化水平,同时也降低了E2F1蛋白质水平,使细胞周期滞留在G1期,从而抑制了细胞增殖。

关键词： microrna-1 人结肠癌增殖细胞周期

microrna-1调控神经嵴细胞进而影响颅面发育

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南京医科大学学报（自然科学版） 2020年第9期40卷 1302-1306页

作者：钦文皓赵娜袁礼婵李强郭舒瑜马俊青南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室江苏南京210029 南京医科大学附属口腔医院口腔正畸科江苏南京210029

目的:采用基因敲除斑马鱼模型,观测microrna-1(miR-1)对神经嵴细胞(neural crest cell,NCC)和颅面发育的影响。方法:用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除斑马鱼miR-1,观察其神经嵴衍生物的表型。原位杂交检测NCC诱导分化相关基因的表达,并用... 详细信息

目的:采用基因敲除斑马鱼模型,观测microrna-1(miR-1)对神经嵴细胞(neural crest cell,NCC)和颅面发育的影响。方法:用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除斑马鱼miR-1,观察其神经嵴衍生物的表型。原位杂交检测NCC诱导分化相关基因的表达,并用实时定量PCR(qRT-PCR)等检验与凋亡相关基因的表达。结果:基因敲除组斑马鱼下颌骨严重萎缩,色素细胞延迟出现。原位杂交显示,受精后24 h,tfap2a、dlx3b、ngn1和snailb表达下降。qRT-PCR结果证明miR-1影响凋亡相关基因的表达。结论:miR-1参与NCC的调控进而影响颅面发育,其可能通过凋亡相关通路而发挥作用。

关键词： microrna-1 基因敲除斑马鱼凋亡

血浆microrna-1与肌钙蛋白T在急性心肌梗死早期诊断中的比较

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中华急诊医学杂志 2013年第11期22卷 1247-1251页

作者：黎立明蔡文波叶钦刘见民李欣廖晓星彭湃纪念医院急诊科广东省海丰516400 中山大学附属第一医院急诊科

目的评估血浆microrna-1（miR-1）在早期诊断急性心肌梗死（AMI，acute myocardial infarction）中的价值，并与肌钙蛋白T（cardiac troponin T，cTnT）进行比较分析。方法收集2011年5月至2012年5月间的56名AMI患者和28名无AMI的对照者... 详细信息

目的评估血浆microrna-1（miR-1）在早期诊断急性心肌梗死（AMI，acute myocardial infarction）中的价值，并与肌钙蛋白T（cardiac troponin T，cTnT）进行比较分析。方法收集2011年5月至2012年5月间的56名AMI患者和28名无AMI的对照者的血浆标本，通过实时定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测血浆中miR-1的含量，同时通过电化学发光法检测血浆cTnT的变化。对所得数据应用SPSS16.0软件包进行分析。AMI与对照组病例的临床特征数据的比较采用t检验或Fisher’S检验。MicmRNA在AMI和对照病例间表达的差异运用Mann—Whitney检验。AMI病例不同时间点间血浆microrna表达差异的两两比较采用Wilcoxon检验。受试者工作特征曲线（receiver operating characteristi ccurve，ROC）用于分析AMI病例与对照组间的差异。结果AMI患者血浆中miR-1的含量较对照组明显升高（P〈0．01），AMI患者14d时miR-1的含量已回落到基线水平。血浆miR-1值的变化与研究对象的自身特征无相关性（P〉0．05）。同时，通过ROC曲线分析，笔者发现miR-1具有早期诊断AMI的特异性和敏感性，但并不优于hs—cTnT。结论血浆miR-1在早期诊断AMI方面具有明确的心肌特异性和敏感性，可作为AMI诊断的生物学标志物，但其诊断价值并不优于cTnT。

关键词： microrna-1 肌钙蛋白T 急性心肌梗死生物学标志物早期诊断特异性敏感性

microrna-1在喉鳞状细胞癌HEp2细胞中靶向调节fibronectin1基因

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microRNA-1在喉鳞状细胞癌HEp2细胞中靶向调节fibronectin1基因

作者：王菲菲天津医科大学

学位级别：硕士

目的微小RNA (microrna, miRNA)是一类广泛存在的在转录后水平调节基因表达的小分子非编码RNA,参与多种生理和病理过程。近来研究表明, miRNAs主要是通过特异性识别信使RNAs (messenger RNAs, mRNAs)的3,-非翻译区(3’-untranslated reg... 详细信息

目的微小RNA (microrna, miRNA)是一类广泛存在的在转录后水平调节基因表达的小分子非编码RNA,参与多种生理和病理过程。近来研究表明, miRNAs主要是通过特异性识别信使RNAs (messenger RNAs, mRNAs)的3,-非翻译区(3’-untranslated regions,3’-UTRs)发挥调节作用的。其中,某些miRNA还具有癌基因或抑癌基因的活性,在肿瘤发生和发展过程中发挥重要作用。前期本实验室利用寡核苷酸微阵列技术,发现在人类喉鳞状细胞癌组织中microrna-1(miR-1)表达水平显著下调。本课题进一步研究了miR-1对喉鳞状细胞癌HEp2细胞生长表型的影响,并预测及验证了miR-1直接作用的靶基因,以期探寻miR-1对喉鳞状细胞癌发生和发展作用的分子机制。方法在人类喉鳞状细胞癌细胞系HEp2细胞中,过表达和封闭内源性miR-1的功能后,利用MTT实验和克隆形成实验检测细胞生长活性的变化。而后综合利用生物信息学方法和cDNA微阵列技术筛选miR-1的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验验证miR-1对靶基因的直接调控作用。通过real-time PCR、Western blot和免疫荧光实验检测miR-1过表达和封闭后的喉鳞癌HEp2细胞中靶基因mRNA和蛋白水平的表达变化,进一步验证miR-1对靶基因的调控作用。同时,采用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术在HEp2细胞中沉默靶基因的表达,检测其对细胞生长表型的影响。结果在人类喉鳞癌HEp2细胞中,过表达miR-1的初始转录本pri-1后,细胞生长明显受到抑制,而且克隆形成能力明显降低;而以反义互补的寡核苷酸(ASO-1)封闭miR-1后,细胞生长活性增加,克隆形成能力也有所上升。靶基因筛选结果表明,纤维连接蛋白1(fibronectin1, FN1)是miR-1的候选靶基因,其3’-非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)包含miR-1的潜在结合位点。荧光报告载体实验表明,miR-1能够通过作用于FN1基因3’-UTR的特定结合位点,对其表达进行负性调节。此外,real-time PCR、Western blot和免疫荧光实验证明,过表达miR-1可以下调靶基因的mRNA和蛋白水平,而封闭miR-1后,靶基因的mRNA和蛋白水平均有升高。采用RNAi技术沉默内源性FN1后,细胞的生长活性和克隆形成能力下降,这与过表达miR-1的结果相一致。结论在人类喉鳞状细胞癌HEp2细胞中,miR-1能够通过抑制细胞的生长活性,起到抑癌基因的作用;miR-1通过靶定FN1基因的3’-UTR区调节喉鳞癌HEp2细胞的生长活性;FN1可促进细胞的生长活性,可能发挥了癌基因的功能。通过研究miR-1在喉鳞癌细胞系中的具体作用机制,有利于我们对恶性肿瘤的发生和发展进行深入地了解,同时也为miRNAs作为肿瘤早期诊断和治疗的分子标记物提供新的线索。

关键词：微小RNA microrna-1 抑癌基因人类喉鳞状细胞癌靶基因纤维连接蛋白1

microrna-1,133在心房颤动模型犬与患者心房肌中的表达差异

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microRNA-1,133在心房颤动模型犬与患者心房肌中的表达差异

作者：约尔古丽·玉素甫阿吉（YUSUFUAJI·Yue-erguli）新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：microrna(miRNA)是一类由20-24个核苷酸构成的高度保守的、非编码的、在转录后水平调节基因表达的小分子RNA。近年来研究发现microrna-1,133大量表达于心脏,调控心脏的各项病理生理过程,诱导或抑制心脏心肌肥大,作用于成纤维细胞... 详细信息

目的：microrna(miRNA)是一类由20-24个核苷酸构成的高度保守的、非编码的、在转录后水平调节基因表达的小分子RNA。近年来研究发现microrna-1,133大量表达于心脏,调控心脏的各项病理生理过程,诱导或抑制心脏心肌肥大,作用于成纤维细胞,调控心脏纤维化,并且参与心脏离子通道和电生理过程。本研究包括：(1)比较房颤模型犬和假手术组犬心房肌miRNA-1与miRNA-133的表达差异;(2)进一步比较行心脏外科搭桥手术的成年房颤患者和成年窦性心律患者右心房microrna-1,133的表达差异。方法：(1)20只比格犬根据是否起搏干预分为实验干预组即房颤组和假手术组即窦律组,每组10只,其中,起搏干预组行心房快速起搏8周(600次/分),实验前后应用心脏超声测量心脏结构大小,用实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction, Real-time PCR)法检测心肌组织中的miRNA-1与miRNA-133的表达水平差异;(2)40例须行心脏外科搭桥手术的患者,纳入的患者均为65岁以下,窦性心律或者持续性房颤的患者,房颤患者20例,窦性心律患者20例,术中取右心耳组织,用Real-time PCR法检测心肌组织中的miRNA-1与miRNA-133的表达水平差异。结果：(1)房颤模型组犬相比假手术组犬心房肌miRNA-1和miRNA-133表达降低：(2)房颤患者相比窦律患者右心耳miRNA-1,133表达降低。结论：房颤组比格犬左心房肌和患者右心耳microrna-1,133表达下降;提示miRNA-1,133作为HCN2、HCN4通道的转录后调控因子,可能和房颤的发生和维持有关。此发现将会为今后开发新的、安全有效的预防及治疗房颤药物提供新思路。

关键词：心房颤动 microrna-1 microrna-133 实时定量聚合酶链反应

急性心肌梗死后血浆中升高的microrna-1与QT离散度的相关性研究

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中国药理学通报 2013年第2期29卷 253-256页

作者：张荣徐毅王晓丹牛慧芳张涛何美娇孙荣哈尔滨医科大学药理学教研室省-部共建生物医药国家重点实验室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学统计学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第一临床医院心内科黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二临床医院心内科黑龙江哈尔滨150081

目的研究急性心肌梗死后血浆中升高的microrna-1(miR-1)与QT离散度(QTd)的相关性及临床意义。方法选取急性心肌梗死(AMI)患者53例[无室性心律失常(VA)者40例、有VA者13例],健康对照人群49例,对血浆中miR-1的表达含量进行绝对定量,并测... 详细信息

目的研究急性心肌梗死后血浆中升高的microrna-1(miR-1)与QT离散度(QTd)的相关性及临床意义。方法选取急性心肌梗死(AMI)患者53例[无室性心律失常(VA)者40例、有VA者13例],健康对照人群49例,对血浆中miR-1的表达含量进行绝对定量,并测定心电图QT间期计算出QTd及校正的QTcd,再进行相关性分析。结果AMI患者血浆中miR-1的实际表达量和QTd及QTcd值均高于正常对照人群,而且有VA者的QTd及QTcd值均大于无VA者,QTd的延长与VA的发生密切相关,血浆中的miR-1表达水平与QTd呈正相关性。结论 AMI患者血浆中miR-1与QTd具有良好的正相关性,二者联合对AMI患者预警恶性心律失常的发生、近期预后评估具有重要的临床参考价值。

关键词：急性心肌梗死 microrna-1 血浆 QT离散度室性心律失常预警