检索结果-南通市图书馆

miR-98通过调控PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

临床肺科杂志 2022年第4期27卷 520-526页

作者：孙祥军王程汉川市人民医院呼吸与危重症医学科湖北汉川431600

目的明确miR-98对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响和机制。方法肺泡上皮细胞A549分成Control、SP(肺炎链球菌刺激)、mir-NC+SP(转染mimics control,肺炎链球菌刺激)、miR-98+SP组(转染miR-98 mimics,肺炎链球菌刺... 详细信息

目的明确miR-98对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响和机制。方法肺泡上皮细胞A549分成Control、SP(肺炎链球菌刺激)、mir-NC+SP(转染mimics control,肺炎链球菌刺激)、miR-98+SP组(转染miR-98 mimics,肺炎链球菌刺激),qRT-PCR方法检测miR-98表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测C-Caspase-3、Bax蛋白表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平。利用targetscan分析miR-98可能的靶基因,以荧光素酶报告系统,鉴定二者的靶向关系。将pcDNA-PALM3和miR-98 mimics共转染到肺泡上皮细胞A549,肺炎链球菌刺激,同样测定细胞增殖、凋亡和C-Caspase-3、Bax蛋白表达,以及细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平。结果SP组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平增加,与Control组比较,差异有统计学意义(PmiR-98+SP组细胞增殖能力升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,与mir-NC+SP组比较,差异有统计学意义(PmiR-98靶向下调肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中PALM3表达水平。pcDNA-PALM3对miR-98抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和C-Caspase-3、Bax蛋白表达,以及TNF-α、IL-1β、IL-6分泌有逆转作用。结论上调miR-98靶向抑制PALM3减少肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌。

关键词：肺炎链球菌 miR-98 肺泡上皮细胞凋亡炎症因子

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

结肠癌组织中miR-98的表达及作用机制

中国医科大学学报 2018年第1期47卷 9-12页

作者：王俊江周天羽张扬刘明欣辽宁中医药大学附属医院肛肠科沈阳110032

目的探讨结肠癌组织中mi R-98的表达及作用机制。方法搜集40例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,实时PCR检测mi R-98在组织中的表达。在HCT116细胞中分别过表达/沉默mi R-98后,MTT实验观察mi R-98对其增殖的影响;流式细胞技术分析mi ... 详细信息

目的探讨结肠癌组织中mi R-98的表达及作用机制。方法搜集40例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,实时PCR检测mi R-98在组织中的表达。在HCT116细胞中分别过表达/沉默mi R-98后,MTT实验观察mi R-98对其增殖的影响;流式细胞技术分析mi R-98对细胞周期的影响;Hochest 33258染色判断mi R-98对其凋亡的影响。结果实时PCR检测发现,与癌旁组织比较,mi R-98在肿瘤中低表达(P=0.022);生存分析发现mi R-98表达低的患者5年生存率较低(P98可以抑制细胞增殖。mi R-98过表达可以抑制细胞周期进程,促进HCT116细胞凋亡。结论 mi R-98可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。mi R-98表达与结肠癌患者的生存期密切相关。

关键词： miR-98 结肠癌增殖凋亡生存期

miR-98在消化系统肿瘤中作用机制研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华南国防医学杂志 2022年第5期36卷 403-406页

作者：康殷楠李璠解有成刘珊山贾栋于晓辉甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃兰州730000 联勤保障部队940医院消化内科

微小RNA(microRNA,mirNA)是一种小的非编码RNA分子,其长度约为20个核苷酸片段,它可以通过与特异信使RNA的3’-非翻译区(3’-untranslated area,3’-UTR)结合调节靶基因的表达^([1])。研究证实,mirNA可以作为癌基因或抑癌基因来影响细胞... 详细信息

微小RNA(microRNA,mirNA)是一种小的非编码RNA分子,其长度约为20个核苷酸片段,它可以通过与特异信使RNA的3’-非翻译区(3’-untranslated area,3’-UTR)结合调节靶基因的表达^([1])。研究证实,mirNA可以作为癌基因或抑癌基因来影响细胞多种生物学行为^([2-4])。miR-98是mirNA家族的成员之一,研究发现其在某些恶性肿瘤中异常表达。Li等^([5])研究发现,miR-98-5p能抑制胶质瘤细胞增殖,而胶质瘤组织中miR-98-5p的表达水平降低。

关键词： miR-98 恶性肿瘤肝癌结肠癌胰腺癌胃癌进展

miR-98通过IKKε调控NF-κB通路在胶质瘤侵袭中的作用及机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-98通过IKKε调控NF-κB通路在胶质瘤侵袭中的作用及机制研究

作者：范阳华南昌大学

学位级别：硕士

目的本研究以不同病理级别的胶质瘤组织和U87、U251脑胶质瘤细胞为实验对象,检测miR-98与IKKε在脑胶质瘤组织及细胞中的表达及其相关性,进一步探讨miR-98介导IKKε/NF-κB通路的调控机制及与脑胶质瘤侵袭性生物学行为的关系,以期为胶... 详细信息

目的本研究以不同病理级别的胶质瘤组织和U87、U251脑胶质瘤细胞为实验对象,检测miR-98与IKKε在脑胶质瘤组织及细胞中的表达及其相关性,进一步探讨miR-98介导IKKε/NF-κB通路的调控机制及与脑胶质瘤侵袭性生物学行为的关系,以期为胶质瘤的防治提供新的思路。方法1.第一步通过Real-Time PCR、Western blot方法检测53例脑胶质瘤标本、10例正常脑组织标本及胶质瘤细胞中的miR-98与IKKε、NF-κB p65的表达水平,初步探究分析miR-98与IKKε、NF-κB在脑胶质瘤组织中表达的相关性。2.第二步采用荧光素酶实验:检测miR-98与IKKε之间的调控关系。3.第三步研究人脑胶质瘤细胞转染miR-98 mimics后对胶质瘤细胞侵袭的影响及IKKε/NF-κB表达的体外研究,并初步探讨其潜在机制。a.采用miR-98 mimics转染U87及U251胶质瘤细胞,采用Real time PCR检测miR-98及IKKε、MMP-9 m RNA的表达,采用Western blot检测IKKε、细胞总NF-κB p65及细胞核中NF-κB p65、MMP-9蛋白表达;b.Transwell实验检测转染miR-98 mimics后侵袭能力的改变,划痕实验评价转染miR-98 mimics后细胞迁移能力的改变。4.第四步研究在脑胶质瘤中IKKε及NF-κB p65在miR-98调控中的作用的体外研究,并进一步验证其机制a.pc DNA3/IKKε及miR-98 mimics共转染U87及U251胶质瘤细胞,Western blot检测IKKε、MMP-9、细胞核中NF-κB p65蛋白的表达情况。采用Real time PCR检测IKKε、MMP-9 m RNA的表达;b.Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的改变,细胞划痕实验检测转染后细胞迁移能力的改变。c.pc DNA3/NF-κB p65及miR-98 mimics共转染U87及U251胶质瘤细胞,Western blot检测细胞核中NF-κB p65蛋白的表达情况;Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的改变,细胞划痕实验检测转染后细胞迁移能力的改变。结果1、脑胶质瘤中miR-98、IKKε、NF-κB p65的表达相关性a.miR-98表达水平与脑胶质瘤组织病理级别呈负相关;IKKε、NF-κB P65表达水平与脑胶质瘤组织病理级别呈正相关。b.miR-98与IKKε表达水平呈密切负相关(r2=0.7223,pmiR-98与NF-κB P65表达水平呈密切负相关(r2=0.6337,pmiR-98表达下降,IKKε表达增高;荧光素酶实验显示:转染miR-98 mimics后,IKKε-WT报告载体的荧光强度受到显著抑制;而IKKε-MUT报告载体的荧光强度基本不变,说明IKKεm RNA的3’UTR上存在miR-98的结合位点,证实IKKε是miR-98下游靶基因。3、转染miR-98 mimics发现:a.上调miR-98能够有效抑制脑胶质瘤侵袭与迁移能力。b.上调miR-98表达能够下调IKKε的表达水平及抑制NF-κB p65从细胞质到细胞核的转座,从而调控NF-κB通路及抑制MMP-9的表达水平,而不影响NF-κB p65在细胞中的总含量。4、转染pc DNA3/IKKε及miR-98 mimics发现:a.上调IKKε能够恢复因转染miR-98 mimics而降低的脑胶质瘤侵袭与迁移能力;b.上调IKKε能恢复NF-κB p65的转座从而调控NF-κB通路及恢复MMP-9的表达水平。5、转染IKKεsi RNA+miR-98 mimics与IKKεsi RNA+miR-98 inhibitor发现:抑制IKKε表达后miR-98 mimics及miR-98 inhibitor对NF-κB p65的转座及MMP-9的表达无差别。6、转染pc DNA3/NF-κB p65及miR-98 mimics发现:上调NF-κB p65能够恢复因转染miR-98 mimics而降低的脑胶质瘤侵袭与迁移能力结论miR-98可以通过IKKε基因调控NF-κB通路,影响脑胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力。miR-98在胶质瘤中作为一个抑癌基因并可做为潜在治疗脑胶质瘤的分子靶点。

关键词： miR-98 IKKε NF-κB p65 人脑胶质瘤

miR-98在运动性骨骼肌损伤修复过程中作用的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-98在运动性骨骼肌损伤修复过程中作用的研究

作者：宋亚运上海体育学院

学位级别：硕士

研究目的:随着人们观念的改变和大众健身的普及,运动性骨骼肌损伤已经不仅存在于竞技体育,也成为困扰大众健身的常见问题。损伤后的修复会出现一系列问题,如:瘢痕、纤维化、疼痛等。相关研究发现:miR-98可以调控骨骼肌卫星细胞的分化,... 详细信息

研究目的:随着人们观念的改变和大众健身的普及,运动性骨骼肌损伤已经不仅存在于竞技体育,也成为困扰大众健身的常见问题。损伤后的修复会出现一系列问题,如:瘢痕、纤维化、疼痛等。相关研究发现:miR-98可以调控骨骼肌卫星细胞的分化,使其成为骨骼肌损伤修复的又一靶点。本实验通过研究下坡跑大鼠股直肌损伤修复过程中miR-98的作用,为运动性骨骼肌损伤的治疗提供新的理论基础和实验依据。研究方法:72只两月龄健康雄性SD大鼠,随机分为9组,每组8只。分组:安静对照组(C)、运动后0 h组、运动后6 h组、运动后12h组、运动后24 h组、运动后48 h组、运动后72 h组、运动后1 W组、运动后2 W组。利用下坡跑建立运动性骨骼肌损伤实验模型,运动方案参数:跑台速度为16m/min,坡度为-16°,运动时长为120min。用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉,通过下腔静脉取血,离心取血清后保存在-80℃C冰箱;取血后迅速取股直肌,肌肉标本迅速放入用液氮冷却的异戊烷中冷冻10s左右;完全冷冻后放于干冰上,待异戊烷完全挥发后,迅速用锡箔纸包上放入超低温冰箱储存。所取组织样本进行以下实验:1)股直肌进行冰冻切片HE染色(横切)进行形态学观察;2)采用比色法和ELISA试剂盒分别对血清中CK和CK-MM的变化进行检测;3)采用RT-PCR对股直肌中miR-98、E2F5、ID1 mRNA水平进行检测;4)采用Western-Blot实验对股直肌中E2F5、ID1蛋白表达情况进行检测。研究结果:1.HE染色结果:对照组结果显示:肌纤维成多边形,大小均一,排列紧密规则,肌细胞核均匀的分布在细胞膜下;运动后Oh、6h、12h、24h、48h、72h组切片显示:肌纤维排列散乱,细胞间隙变大,形状不规则,呈肿胀状态;运动后1w和2w组切片显示:肌纤维形态和对照组相似,趋于正常。2.血清 CK 和 CK-MM:与C组相比,运动后Oh组血清CK的含量明显升高,具有显著性差异(PmiR-98、E2F5和ID1 mRNA水平变化:与C组相比,运动后Oh和6h组miR-98 mRNA的含量稍有升高,无显著性差异;运动后12h组miR-98 mRNA含量下降,无显著性差异;运动后24h、48h和72h组miR-98 mRNA含量明显下降,具有显著性差异(PmiR-98 mRNA含量稍降低,无显著性差异;运动后W组miR-98 mRNA含量稍升高,无显著性差异。与C组相比,运动后Oh组E2F5mRNA含量升高,无显著性差异;运动后6h、12h和24h组E2F5 mRNA含量明显升高,具有显著性差异(PmiR-98含量下降,促进骨骼肌损伤的修复。

关键词： miR-98 运动性骨骼肌损伤 E2F5 ID1

miR-98靶向Cyclin D2抑制糖尿病大鼠血管内皮细胞增殖的机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-98靶向Cyclin D2抑制糖尿病大鼠血管内皮细胞增殖的机制

作者：李新新滨州医学院

学位级别：硕士

本论文分两部：第一部分研究miR-98在2型糖尿病SD大鼠血管内皮细胞增殖中的作用;第二部分研究miR-98下调Cyclin D2表达抑制大鼠主动脉血管内皮细胞（rat vascular aortic endothelial cells,RAOEC）细胞的增殖。一、miR-98在糖尿病SD大... 详细信息

本论文分两部：第一部分研究miR-98在2型糖尿病SD大鼠血管内皮细胞增殖中的作用;第二部分研究miR-98下调Cyclin D2表达抑制大鼠主动脉血管内皮细胞（rat vascular aortic endothelial cells,RAOEC）细胞的增殖。一、miR-98在糖尿病SD大鼠血管内皮细胞增殖中的作用通过建立2型糖尿病大鼠模型,利用Real-time PCR检测miR-98在糖尿病大鼠血管内膜组织中的表达明显低于正常大鼠组织,推测miR-98在血管内皮细胞增殖中发挥作用。进一步Western blotting检测Cyclin D2的表达,其在糖尿病大鼠血管内膜组织中的表达明显高于正常大鼠组织,与cyclinD2相关的p-Rb表达升高,结果提示,cyclin D2和与其相关的Rb的磷酸化在血管内皮细胞增殖中发挥重要作用。在细胞水平,MTT检测高糖处理对RAOEC细胞增殖的影响,结果显示,高糖处理组细胞的增殖率明显高于低糖处理组。进一步检测高糖处理细胞后对细胞周期的影响,与高糖培养基处理组相比,正常组的细胞主要停滞在G1期,而高糖处理组的细胞主要进行分裂增殖。通过Real-time PCR检测高糖处理细胞后miR-98的表达,高糖处理组miR-98的表达明显低于低糖处理组（对照组）。进一步Western blotting检测Cyclin D2和p-Rb在高糖处理组的表达明显高于低糖处理组,结果显示,cyclin D2和与其相关的Rb的磷酸化在血管内皮细胞增殖中发挥重要作用。二、miR-98通过下调Cyclin D2表达抑制RAOEC细胞的增殖构建pcDNA-GFP-cyclin D2-3’UTR的载体,化学合成miR-98及反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASO-98）,共转染RAOEC细胞,利用荧光倒置显微镜和流式细胞术检测GFP的表达,结果显示,与对照组相比,转染miR-98组绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）的表达量显著下降;MTT检测转染miR-98后,细胞的增殖情况,实验结果显示,miR-98转染组细胞增殖受到抑制;进一步检测miR-98对细胞周期和细胞凋亡的影响,miR-98转染组的细胞停滞在G1期,促进了血管内皮细胞的凋亡,抑制了细胞的分裂增殖。在细胞水平,Real-time PCR检测转染miR-98后,miR-98的含量明显升高。Western blotting检测到转染miR-98后,Cyclin D2口p-Rb的表达明显低于对照组;另外,抗凋亡基因Bcl-2和NF-KB的表达降低;促凋亡基因BAX和Caspase9勺表达升高,推测miR-98抑制大鼠血管内皮细胞的增殖与上述因子变化有关。综上所述,Cyclin D2在2型糖尿病大鼠血管内皮细胞增殖中发挥作用,miR-98通过调节Cyclin D2的表达抑制大鼠血管内皮细胞的增殖。miR-98也可能通过影响l-2、NF-KB、BAX、Caspase9的表达抑制大鼠血管内皮细胞的增殖。

关键词： Cyclin D2 miR-98 2型糖尿病大鼠基因表达

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-98促进肝癌发生发展机制初步研究

miR-98促进肝癌发生发展机制初步研究

作者：何涵南方医科大学

学位级别：硕士

一、研究背景和目的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是全球高发的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类生命健康,肝癌病因尚未明确,早期无明显症状,容易发生转移,这些是导致其预后差,病死率居高不下的重要因素。肝癌的发生发展是一... 详细信息

一、研究背景和目的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是全球高发的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类生命健康,肝癌病因尚未明确,早期无明显症状,容易发生转移,这些是导致其预后差,病死率居高不下的重要因素。肝癌的发生发展是一个多阶段、多步骤、多因素的复杂过程,近年来,一些重要的信号通路在肝癌发生发展中的作用得以阐明,然而,肝癌早期诊断难,晚期治疗效果差的现状仍然没有被改变。因此,深入理解肝癌发生发展的分子机制,寻找新的诊治靶点迫在眉睫。 microRNAs(mirNAs)是一类内源性非编码小分子RNA,长约19-25个核苷酸(nucleotide,nt),通过结合靶基因mRNA的3’非翻译区(3’untranslated region,3’-UTR),阻遏靶基因的翻译,从而抑制基因表达。mirNA参与动植物的组织器官发育、细胞分化和凋亡、胰岛素分泌、脂肪代谢等生命活动,在许多病理过程包括癌症发生及癌细胞转移中扮演重要的角色。mirNAs作为一类新型的调节因子,既可以作为原癌基因发挥作用,也可以作为抑癌基因调节细胞的生物学特性。目前为止,已发现多个发挥原癌基因或肿瘤抑制基因作用的mirNAs,如mir-17-92cluster、let-7、mir-143、mir-21和mir-373、mir-145、mir-372以及miR-98等,它们通过调控下游靶基因的转录和翻译参与了肿瘤的演进过程。肝癌的发生机制比较复杂,目前研究发现染色体突变、表观遗传、非编码RNA基因的突变及蛋白编码基因突变等均与肝癌的发生发展密切相关。尽管在肝癌中发现了许多癌基因和肿瘤抑制基因,但microRNA小分子在肝癌生物学中的功能则是近几年来才被开始关注。mirNA在肝细胞癌发生过程中的功能以及与肝细胞癌诊断、治疗的关系是目前备受关注的课题之一,与肝细胞癌发生发展相关的mirNA研究证实有很多,如mir-23a、mir-27a、mir-223、mir-21、mir-221及mir-17-92等,它们可以通过抑制或促进相关癌相关基因的表达而发挥重要的作用。由此可见,mirNAs调节HCC发生发展的分子机制研究可能为肝癌的早期诊断和治疗提供一种新的途径。 Hsa-miR-98(miR-98)首先从Hela细胞中克隆得到,全长21nt,在多种组织中泛表达,无组织特异性。miR-98的表达失调参与了多种肿瘤的发生发展和侵袭转移,如肺癌、乳腺癌和结肠癌等。miR-98家族是一个高度保守的微小RNA家族,可以调控RAS、MYC、HMGA2、CDC25A、CDK6等靶基因,与生命中的多种生物学现象和生理过程息息相关,特别是在细胞增殖与分化以及肿瘤相关方面的作用尤为突出。人体内let-7/miR-98家族成员表达失调参与一些疾病的发生发展,比如miR-98异常表达在乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌中起了一定的作用。还有研究表明,miR-98通过Fas家族可以直接作用于Fas基因的3’-UTR区域,调节Fas基因的表达,并影响Fas介导的细胞凋亡,miR-98在SC I型细胞中低表达,在SCⅡ型细胞中高表达,这与miR-98负向调节Fas是一致的。成熟的mirNA可以与其他蛋白质一起组成RISC (RNA-induced silencing complex)复合体,通过核酸序列互补与靶基因mRNA的作用,mirNA主要是在数量上对靶基因进行调节作用。这展示了mirNA在临床应用方面的巨大前景。但是miR-98和肝癌的关系尚未报道,我们前期结果提示miR-98在肝癌组织中表达明显高于正常对照组。本课题的研究目的为鉴定miR-98在肝癌细胞和组织中的表达特性,然后通过改变miR-98的表达水平观察对于肝癌细胞生物学特性的影响,最后结合生物信息学预测和分析其靶基因,阐明miR-98在肝癌发病机制中所扮演的角色,为深入理解肝癌发病的分子机制和寻找新的分子靶向治疗靶点奠定理论基础。二、研究方法 1.荧光定量PCR方法检测肝癌组织、正常肝组织及肝癌细胞株中miR-98的表达取已裂解的组织或收集培养的细胞,加入TRIZOL试剂提取microRNA。采用microRNA反转录试剂盒,逆转录合成cDNA;以cDNA为模板,U6为内对照,采用荧光定量PCR试剂盒,使用Stratagene公司的Mx3000P定量PCR仪进行荧光定量PCR反应,检测各模板的Ct值。 2.对miR-98的靶基因进行预测利用mirBase、Pictar和’TargetScan三个经典的在线靶基因预测软件对miR-98的靶基因进行预测,然后三者取交集。随后对该交集中的靶基因进行初步的基因功能分析(Gene Ontology enrichment analysis)。 3.慢病毒包装方法构建过表达／干扰miR-98的肝癌细胞株 PCR扩增miR-98上下游侧翼序列,TA克隆后,将测序正

关键词：肝癌 miR-98 增殖侵袭

As2O3上调miR-98表达缓解博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

As2O3上调miR-98表达缓解博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

作者：高淑艳滨州医学院

学位级别：硕士

本论文主要探讨三氧化二砷（As203）通过上调miR-98表达缓解博莱霉素（BLM）诱导大鼠肺纤维化损伤的机制,整体分两部分：（一）个体水平研究As2O3、miR-98在BLM诱导大鼠肺纤维化损伤中的作用;（二）细胞水平探讨As2O3、miR-98抗纤维化... 详细信息

本论文主要探讨三氧化二砷（As203）通过上调miR-98表达缓解博莱霉素（BLM）诱导大鼠肺纤维化损伤的机制,整体分两部分：（一）个体水平研究As2O3、miR-98在BLM诱导大鼠肺纤维化损伤中的作用;（二）细胞水平探讨As2O3、miR-98抗纤维化的分子机制。1.个体水平研究As2O3、miR-98在BLM诱导的大鼠肺纤维化发病中的作用;（1）成功建立BLM诱导大鼠肺纤维化模型。40只大鼠随机分为BLM造模组（0d、14d、28d）、As2O3干预组及生理盐水（NS）造模对照组。BLM造模采用博来霉素5mg/kg气管内注射,NS造模采用生理盐水1ml/kg气管内注射,As203干预组自BLM造模14天开始给予As2O3（0.4mg/kg/d）尾静脉注射治疗14天。BLM模型组分别在造模同时、造模后14、28天处死,NS造模对照组28天处死。As203干预组在造模后28天即治疗14天后处死。然后通过HE染色观察大鼠肺组织形态变化、Masson染色观察肺组织内胶原的表达、羟脯氨酸（HYP）检测肺组织内胶原含量,Western blotting检测肺组织内a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）及E-钙粘蛋白（E-cadherin）的表达,综合分析As203对肺纤维化发展的干预作用。结果显示,随着BLM造模时间的延长,气管内注射BLM大鼠肺间质逐渐增宽,肺泡结构紊乱,间质胶原沉积逐渐增多,胶原含量明显增加,而NS造模组肺组织结构变化不著,As2O,治疗组肺间质增宽较28d BLM造模组减轻,证明大鼠肺纤维化模型成功构建,As203治疗可以减轻博来霉素所致的大鼠肺纤维化损伤。（2）检测miR-98在肺纤维化模型中的表达变化。RT-qPCR检测各组肺组织中miR-98的表达,提示随着BLM诱导肺纤维化的发生,miR-98的表达逐渐减低,As203治疗组miR-98的表达较28d BLM造模组显著增加,提示As203可能通过miR-98发挥治疗作用。（3）检测miR-98下游Jak-Stat3信号因子及Bax/Bcl-2的表达。随着BLM造模时间的延长,肺组织内Stat3及p-Stat3表达均明显增加,伴有肺组织内Bax/Bcl-2表达比率的升高。与此相反,As203治疗抑制了Jak-Stat3信号通路及Bax/Bcl-2的表达,提示As203可能通过上调miR-98抑制Jak-Stat3信号通路发挥其抗纤维化效应。2.细胞水平探讨As203及miR-98抗纤维化的分子机制。（1）TGF-β1诱导A549细胞发生上皮间质转分化（EMT）构建纤维化发生的细胞模型。在细胞培养液中加入TGF-β1, A549细胞逐渐发生形态变化,由立方形或三角形逐渐变为长梭形;免疫荧光检测显示细胞表面上皮标志性蛋白E-Cadherin表达减少,相反,间质标志性蛋白α-SMA表达增加,即TGF-β1可诱导A549细胞发生EMT。（2）As203干预及miR-98转染A549细胞对TGF-β1诱导A549细胞EMT的影响。细胞形态学观察,提示As203干预及miR-98转染A549细胞可以减轻TGF-β1诱导A549细胞发生EMT的形态变化。免疫荧光检测提示,As203干预及miR-98转染A549细胞可以促进细胞表达上皮标志性蛋白E-Cadherin,同时降低间质标志性蛋白α-SMA的表达。（3）As203干预及miR-98转染A549细胞可以抑制Jak-Stat3信号通路活化及Bax/Bcl-2的表达。Western Blotting结果提示As203干预及miR-98转染可以通过降低细胞内Stat3及p-Stat3的表达,同时降低Bax/Bcl-2比值,有效抑制EMT的发生。

关键词：博来霉素肺纤维化 TGF-β1 三氧化二砷 miR-98 Jak-Stat3信号通路

转染pre-hsa-miR-98对BV-2细胞活化和凋亡的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

滨州医学院学报 2020年第4期43卷 249-251页

作者：霍颖倩衣香明贾瑞滨州医学院附属医院神经内科山东滨州256603

目的用pre-hsa-miR-98转染鼠小胶质细胞系BV-2细胞,观察转染率、转染后细胞活化或凋亡的影响。方法构建pre-hsa-miR-98质粒Hmir和对照质粒Cmir转染BV-2细胞,荧光显微镜与流式细胞仪计数计算转染率,MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法流式... 详细信息

目的用pre-hsa-miR-98转染鼠小胶质细胞系BV-2细胞,观察转染率、转染后细胞活化或凋亡的影响。方法构建pre-hsa-miR-98质粒Hmir和对照质粒Cmir转染BV-2细胞,荧光显微镜与流式细胞仪计数计算转染率,MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法流式细胞术检测细胞凋亡率。结果转染后,荧光显微镜观察和流式细胞术计数显示两组细胞转染率均达60%左右。转染Hmir后,MTT法检测细胞增殖率随转染时间延长有所降低。转染后各组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义。结论构建的pre-hsa-miR-98质粒Hmir和对照质粒Cmir能成功转染BV-2细胞,细胞增殖率比较差异不明显,转染后未明显诱导细胞凋亡,可用于后续研究。

关键词： miR-98 BV-2细胞转染率增殖抑制细胞凋亡率