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LncRNA LUCAT1靶向miR-502-5p对人视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的影响

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中华实验眼科杂志 2023年第4期41卷 321-329页

作者：邢枫李永明高明敏河南省人民医院眼科河南省立眼科医院郑州450003 河南省人民医院神经外科郑州450003

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(mir)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本,... 详细信息

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(mir)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本,正常视网膜组织标本(12例眼球破裂伤、7例眼球萎缩、8例眼球穿通伤合并有色素膜嵌顿)取自同期在河南省立眼科医院行眼球摘除术的27例患者。采用实时荧光定量pCR检测LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在RB组织、细胞系(Y-79、WERI-Rb-1、HXO-RB44)及人视网膜上皮细胞(ARpE-19)中的表达。将RB细胞Y-79分为对照组、小干扰RNA(si)-LncRNA LUCAT1组、si-对照(con)组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA LUCAT1组、mir-con组、miR-502-5p组、si-LncRNA LUCAT1+anti-mir-con组和si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组,分别转染相应试剂。采用Western blot法检测MMp2和MMp9蛋白表达;采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增生活力;采用克隆形成实验检测细胞增生能力;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量pCR验证LncRNA LUCAT1对miR-502-5p的靶向调控作用。结果RB组织中LncRNA LUCAT1表达量为2.73±0.34,明显高于正常视网膜组织的1.00±0.15;miR-502-5p表达量为0.42±0.06,明显低于正常视网膜组织的1.00±0.13,差异均有统计学意义(t=24.190、21.049,均ppE-19细胞,miR-502-5p表达水平明显低于ARpE-19细胞,差异均有统计学意义(均p5)。si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量,MMp2、MMp9蛋白相对表达量,吸光度(A)值,细胞增生、迁移、侵袭数量较对照组均明显减少,差异均有统计学意义(均p5)。miR-502-5p组miR-502-5p表达量高于mir-con组,MMp2、MMp9蛋白相对表达量,细胞活力A值,细胞增生、迁移、侵袭数量少于mir-con组,差异均有统计学意义(t=20.274、14.884、14.181、12.692、17.749、20.889、21.913,均pmiR-502-5p组miR-502-5p表达量低于si-LncRNA LUCAT1+anti-mir-con组,MMp2、MMp9蛋白相对表达量,细胞活力A值,细胞增生、迁移、侵袭数量高于si-LncRNA LUCAT1+anti-mir-con组,差异均有统计学意义(t=14.097、15.839、15.757、11.860、16.235、16.565、16.487,均pmiR-502-5p组相对荧光素酶活性值低于mir-con组,差异有统计学意义(t=16.379,ppcDNA-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量高于pcDNA组,miR-502-5p表达量低于pcDNA组,si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量低于si-con组,miR-502-5p表达量高于si-con组,差异均有统计学意义(均p5)。结论抑制LncRNA LUCAT1表达通过靶向上调miR-502-5p可减弱人RB细胞的增生、迁移和侵袭能力。

关键词：视网膜母细胞瘤 miR-502-5p 增生迁移侵袭长链非编码RNA 肺癌相关转录因子1

Hsa＿circ＿0079557通过hsa＿circ＿0079557/miR-502-5p/CCND1轴促进结直肠癌增殖

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Hsa＿circ＿0079557通过hsa＿circ＿0079557/miR-502-5p/CCND1轴...

作者：余超南方医科大学

学位级别：硕士

背景人类基因组除少部分被转录成编码RNA外,大部分都被转录为非编码RNA。这些非编码RNA被分为不同类别,微小RNA(mirNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)、与piwi蛋白相作用的RNA(piRNA)是四种主要的非编码RNA,它们在癌症中发... 详细信息

背景人类基因组除少部分被转录成编码RNA外,大部分都被转录为非编码RNA。这些非编码RNA被分为不同类别,微小RNA(mirNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)、与piwi蛋白相作用的RNA(piRNA)是四种主要的非编码RNA,它们在癌症中发挥着重要功能。mirNA是一种长度约为22个核苷酸的非编码RNA。mirNA与靶向mRNA中的互补序列结合,并导致RNA诱导沉默复合物(RISC)降解靶向mRNA。piRNA长度为24-30核苷酸。主要存在于生殖系细胞中,参与染色质的表观遗传调控。lncRNA和circRNA的长度超过200核苷酸,lncRNA为线性,circRNA为环状。LncRNA和circRNA通过多种机制调节基因表达。它们可以吸附下游mirNA,进而防止mirNA靶向的mRNA降解。它们可以调节转录因子与启动子结合,从而调节靶向基因表达。它们还可以作为调节蛋白质-蛋白质相互作用和相关下游信号通路的支架。环状RNA(circRNA)是40多年前发现的一类独特的RNA分子,通过线性RNA的反向剪接通过共价连接产生。测序技术和生物信息学工具的最新进展促使我们发现环状RNA新的生物学功能。近年来的相关研究表明,circRNA在癌症的发生和发展中起着重要的调节作用。上调的circRNA与癌症的发展有关。然而还有许多关于circRNA的调控机制尚未完全了解,探索circRNA在肿瘤发生发展中的作用可能有助于发现新的诊断标志物和治疗靶点。结直肠癌是第三常见的恶性肿瘤,由于肿瘤确诊多为晚期、远处转移和化疗耐药,结直肠癌患者的预后仍然不佳,在此,我们研究了hsa＿circ＿0079557在结直肠癌(CRC)中的作用和调节机制。方法从基因表达综合数据库(GEO)下载了多个环状RNA基因表达谱的数据集,去除了数据集之间的批次效应并将其组合成一个新的数据集,从中发现多个环状RNA在结直肠癌中高表达,在这些环状RNA中,我们实验验证了 hsa＿circ＿0079557在结直肠癌组织和细胞中的表达相对较高。进行定量实时聚合酶链反应(qRT-pCR)、流式细胞术、细胞集落形成、细胞计数实验(CCK-8)、细胞迁移实验、细胞划痕试验、裸鼠皮下成瘤实验和免疫组织化学染色(IHC),以评估其在体外和体内的作用。进行荧光原位杂交(FISH)和双荧光素酶报告物测定,以确认hsa＿circ＿0079557与所识别的靶mirNA之间的位置和关联。使用网络工具“TargetScan”用于预测下游靶蛋白,并使用蛋白质印迹(WB)测定其表达。结果发现hsa＿circ＿0079557在结直肠癌组织和细胞系中相对上调。表达下调的hsa＿circ＿0079557抑制了体外和体内结直肠癌细胞的增殖。此外,发现hsa＿circ＿0079557充当miR-502-5p的“分子海绵”,并上调CCND1的表达。结论我们鉴定了一种在结直肠细胞中相对高表达的circRNA,并提出了在结直肠癌细胞中的一种新的hsa＿circ＿0079557/miR-502-5p/CCND1通路。

关键词：结直肠癌 hsa＿circ＿0079557 miR-502-5p CCND1 数据集

circ_0000144靶向miR-502-5p调控人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡及迁移侵袭

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国际眼科杂志 2021年第10期21卷 1686-1692页

作者：储明慧陈海银张晓力中国江苏省海安市中医院眼耳鼻喉科 226600

目的:探讨环状RNA(circRNA)circ_0000144是否靶向微小RNA(mirNA)-502-5p调控人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。方法:将Y79细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ_0000144组(转染si-circ_0000144)、mir-NC组(转染mir-NC)、miR-502-5p组(转染miR-502-5p mimic)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ_0000144组(转染pcDNA-circ_0000144)、si-circ_0000144+anti-mir-NC组(转染si-circ_0000144+anti-mir-NC)、si-circ_0000144+anti-miR-502-5p组(转染si-circ_0000144+anti-miR-502-5p)。实时定量聚合酶链反应(qRT-pCR)检测视网膜母细胞瘤组织和细胞中circ_0000144和miR-502-5p表达,溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)检测细胞增殖,免疫印迹实验(western blot)测定细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMp)-2、MMp-9蛋白表达,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell测定细胞迁移、侵袭。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验分析circ_0000144是否靶向miR-502-5p。结果:31例视网膜母细胞瘤组织中circ_0000144表达量比瘤旁组织高,miR-502-5p表达量比瘤旁组织低(pp-2、MMp-9蛋白表达量、迁移、侵袭细胞数减少,Bax蛋白表达量、凋亡率增加(pmiR-502-5p的表达。miR-502-5p组较mir-NC组增加Y79细胞凋亡率、Bax蛋白表达量,减少OD值、迁移及侵袭细胞数、Ki-67、Bcl-2、MMp-2、MMp-9蛋白表达量(pmir-NC组比较,si-circ_0000144+anti-miR-502-5p组Y79细胞凋亡率、Bax蛋白表达量降低,OD值、迁移及侵袭细胞数、Ki-67、Bcl-2、MMp-2、MMp-9蛋白表达量升高。结论:视网膜母细胞瘤组织中circ_0000144高表达,通过负调控miR-502-5p抑制其表达降低视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、迁移侵袭,促进凋亡。

关键词：视网膜母细胞瘤 circ_0000144 miR-502-5p 增殖凋亡迁移侵袭

miR-502-5p在膀胱癌中的抑癌作用及其分子机制研究

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miR-502-5p在膀胱癌中的抑癌作用及其分子机制研究

作者：应宇凡浙江大学

学位级别：硕士

背景:膀胱癌在泌尿系统的恶性肿瘤疾病发病率中高居第二,每年在全世界范围内有两百万人罹患此病,近年来随着治疗技术的进步死亡率逐渐降低,但膀胱癌的进展与转移仍然危害着众多的患者。约1/4的患者在初次诊断时已发现肿瘤侵犯肌层甚至... 详细信息

背景:膀胱癌在泌尿系统的恶性肿瘤疾病发病率中高居第二,每年在全世界范围内有两百万人罹患此病,近年来随着治疗技术的进步死亡率逐渐降低,但膀胱癌的进展与转移仍然危害着众多的患者。约1/4的患者在初次诊断时已发现肿瘤侵犯肌层甚至远处转移,虽然近年来针对膀胱癌的诊疗策略不断更新,但是未发生远处转移的肌层浸润型膀胱癌的治疗策略仍以根治性手术为主,然后患者术后的5年生存率仅为62%。因此,发现膀胱癌新型生物标记物,对于膀胱癌的早期诊断以及改善患者的生存预后都有着重要意义。越来越多的研究显示micro RNA在多种肿瘤中扮演着重要的调控因子。然而miR-502-5p作为一种micro RNA在膀胱癌中的作用机制尚无研究阐明。方法:1)通过RT-qpCR检测分析miR-502-5p在膀胱癌中的表达模式,并且通过甲基化测序分析miR-502-5p的表达是否与启动子区的差异甲基化相关。2)通过CCK-8,平板克隆,流式细胞学分析等一系列功能实验评估miR-502-5p在膀胱癌中的生物学功能。3)通过生物信息学数据库筛选备选基因,双荧光素酶报告基因实验进一步验证备选基因与miR-502-5p的靶向关系。然后利用一系列功能实验评估靶基因在膀胱癌中的生物学功能。通过裸鼠皮下成瘤实验进一步评估miR-502-5p在体内对膀胱肿瘤增殖能力的影响。结果:1)我们发现miR-502-5p在膀胱肿瘤中低表达,且与其启动子区的异常高甲基化状态相关。2)我们发现miR-502-5p高表达之后,膀胱癌的体外迁移和增殖能力均受到抑制。3)我们发现miR-502-5p可以直接靶向CCND1,DNMT3B和NOp14,并且敲低DNMT3B和NOp14的表达水平可以抑制膀胱癌的体外迁移和增殖能力。并且miR-502-5p与DNMT3B形成了一条正反馈的调节环路。4)我们发现过表达miR-502-5p在体内也可以显著抑制膀胱癌的增殖能力。结论:我们发现miR-502-5p对膀胱癌细胞的增殖迁移有抑制作用,并验证了其可能通过靶点CCND1/DNMT3B/NOp14介导的通路发挥作用,这些结果为未来提供更可靠的膀胱癌治疗方法提供了思路。

关键词： miR-502-5p 膀胱癌上皮间质转化 CCND1 DNMT3B NOp14

毛蕊异黄酮对人骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

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广西医科大学学报 2021年第11期38卷 2133-2139页

作者：廖军锋王虹吕晓宇中国人民解放军南部战区总医院康复医学科广州510010

目的:探讨毛蕊异黄酮对人骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:将人骨关节炎软骨细胞分为对照组、毛蕊异黄酮低剂量组、毛蕊异黄酮中剂量组、毛蕊异黄酮高剂量组、毛蕊异黄酮高剂量+anti-mir-NC组和毛蕊异黄酮高剂量+anti... 详细信息

目的:探讨毛蕊异黄酮对人骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:将人骨关节炎软骨细胞分为对照组、毛蕊异黄酮低剂量组、毛蕊异黄酮中剂量组、毛蕊异黄酮高剂量组、毛蕊异黄酮高剂量+anti-mir-NC组和毛蕊异黄酮高剂量+anti-miR-502-5p组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、流式细胞术及western blotting分别检测细胞增殖、细胞周期和凋亡及细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达,实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测miR-502-5p表达。结果:与对照组比较,毛蕊异黄酮中、高剂量组骨关节炎软骨细胞增殖活性升高(均p5),细胞周期G0~G1期缩短(p5),S期延长(p5),细胞凋亡率和Bax蛋白表达降低(均p5),而Bcl-2蛋白和miR-502-5p表达升高(均p5),并呈剂量依赖性。与毛蕊异黄酮高剂量+anti-mir-NC组比较,毛蕊异黄酮高剂量+anti-miR-502-5p组骨关节炎软骨细胞增殖活性降低(p5),细胞周期G0~G1期延长(p5),而S期缩短(p5),细胞凋亡率和Bax蛋白表达升高(均p5),而Bcl-2蛋白表达降低(p5)。结论:毛蕊异黄酮可增强骨关节炎软骨细胞的增殖能力,并减少细胞凋亡,其作用机制可能与上调细胞中miR-502-5p表达有关。

关键词：毛蕊异黄酮骨关节炎软骨细胞 miR-502-5p 细胞增殖细胞凋亡