miR-502-5p在膀胱癌中的抑癌作用及其分子机制研究

作     者：应宇凡 

作者单位：浙江大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谢立平

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：miR-502-5p 膀胱癌 上皮间质转化 CCND1 DNMT3B NOP14 

摘      要：背景:膀胱癌在泌尿系统的恶性肿瘤疾病发病率中高居第二,每年在全世界范围内有两百万人罹患此病,近年来随着治疗技术的进步死亡率逐渐降低,但膀胱癌的进展与转移仍然危害着众多的患者。约1/4的患者在初次诊断时已发现肿瘤侵犯肌层甚至远处转移,虽然近年来针对膀胱癌的诊疗策略不断更新,但是未发生远处转移的肌层浸润型膀胱癌的治疗策略仍以根治性手术为主,然后患者术后的5年生存率仅为62%。因此,发现膀胱癌新型生物标记物,对于膀胱癌的早期诊断以及改善患者的生存预后都有着重要意义。越来越多的研究显示micro RNA在多种肿瘤中扮演着重要的调控因子。然而miR-502-5p作为一种micro RNA在膀胱癌中的作用机制尚无研究阐明。方法:1)通过RT-qPCR检测分析miR-502-5p在膀胱癌中的表达模式,并且通过甲基化测序分析miR-502-5p的表达是否与启动子区的差异甲基化相关。2)通过CCK-8,平板克隆,流式细胞学分析等一系列功能实验评估miR-502-5p在膀胱癌中的生物学功能。3)通过生物信息学数据库筛选备选基因,双荧光素酶报告基因实验进一步验证备选基因与miR-502-5p的靶向关系。然后利用一系列功能实验评估靶基因在膀胱癌中的生物学功能。通过裸鼠皮下成瘤实验进一步评估miR-502-5p在体内对膀胱肿瘤增殖能力的影响。结果:1)我们发现miR-502-5p在膀胱肿瘤中低表达,且与其启动子区的异常高甲基化状态相关。2)我们发现miR-502-5p高表达之后,膀胱癌的体外迁移和增殖能力均受到抑制。3)我们发现miR-502-5p可以直接靶向CCND1,DNMT3B和NOP14,并且敲低DNMT3B和NOP14的表达水平可以抑制膀胱癌的体外迁移和增殖能力。并且miR-502-5p与DNMT3B形成了一条正反馈的调节环路。4)我们发现过表达miR-502-5p在体内也可以显著抑制膀胱癌的增殖能力。结论:我们发现miR-502-5p对膀胱癌细胞的增殖迁移有抑制作用,并验证了其可能通过靶点CCND1/DNMT3B/NOP14介导的通路发挥作用,这些结果为未来提供更可靠的膀胱癌治疗方法提供了思路。