Hsa＿circ＿0079557通过hsa＿circ＿0079557/miR-502-5p/CCND1轴促进结直肠癌增殖

作     者：余超 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：俞金龙

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：结直肠癌 hsa＿circ＿0079557 miR-502-5p CCND1 数据集 

摘      要：背景人类基因组除少部分被转录成编码RNA外,大部分都被转录为非编码RNA。这些非编码RNA被分为不同类别,微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)、与Piwi蛋白相作用的RNA(piRNA)是四种主要的非编码RNA,它们在癌症中发挥着重要功能。miRNA是一种长度约为22个核苷酸的非编码RNA。miRNA与靶向mRNA中的互补序列结合,并导致RNA诱导沉默复合物(RISC)降解靶向mRNA。piRNA长度为24-30核苷酸。主要存在于生殖系细胞中,参与染色质的表观遗传调控。lncRNA和circRNA的长度超过200核苷酸,lncRNA为线性,circRNA为环状。LncRNA和circRNA通过多种机制调节基因表达。它们可以吸附下游miRNA,进而防止miRNA靶向的mRNA降解。它们可以调节转录因子与启动子结合,从而调节靶向基因表达。它们还可以作为调节蛋白质-蛋白质相互作用和相关下游信号通路的支架。环状RNA(circRNA)是40多年前发现的一类独特的RNA分子,通过线性RNA的反向剪接通过共价连接产生。测序技术和生物信息学工具的最新进展促使我们发现环状RNA新的生物学功能。近年来的相关研究表明,circRNA在癌症的发生和发展中起着重要的调节作用。上调的circRNA与癌症的发展有关。然而还有许多关于circRNA的调控机制尚未完全了解,探索circRNA在肿瘤发生发展中的作用可能有助于发现新的诊断标志物和治疗靶点。结直肠癌是第三常见的恶性肿瘤,由于肿瘤确诊多为晚期、远处转移和化疗耐药,结直肠癌患者的预后仍然不佳,在此,我们研究了hsa＿circ＿0079557在结直肠癌(CRC)中的作用和调节机制。方法从基因表达综合数据库(GEO)下载了多个环状RNA基因表达谱的数据集,去除了数据集之间的批次效应并将其组合成一个新的数据集,从中发现多个环状RNA在结直肠癌中高表达,在这些环状RNA中,我们实验验证了 hsa＿circ＿0079557在结直肠癌组织和细胞中的表达相对较高。进行定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)、流式细胞术、细胞集落形成、细胞计数实验(CCK-8)、细胞迁移实验、细胞划痕试验、裸鼠皮下成瘤实验和免疫组织化学染色(IHC),以评估其在体外和体内的作用。进行荧光原位杂交(FISH)和双荧光素酶报告物测定,以确认hsa＿circ＿0079557与所识别的靶miRNA之间的位置和关联。使用网络工具“TargetScan用于预测下游靶蛋白,并使用蛋白质印迹(WB)测定其表达。结果发现hsa＿circ＿0079557在结直肠癌组织和细胞系中相对上调。表达下调的hsa＿circ＿0079557抑制了体外和体内结直肠癌细胞的增殖。此外,发现hsa＿circ＿0079557充当miR-502-5p的“分子海绵,并上调CCND1的表达。结论我们鉴定了一种在结直肠细胞中相对高表达的circRNA,并提出了在结直肠癌细胞中的一种新的hsa＿circ＿0079557/miR-502-5p/CCND1通路。