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山奈酚通过上调miR-340-5p减轻脊神经结扎大鼠的神经性疼痛

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沈阳药科大学学报 2023年第1期40卷 75-82页

作者：赵峰樊少卿程晓燕李小娜李长生马浩杰河南省中医院麻醉科河南郑州450002 河南省肿瘤医院麻醉与围术期医学科河南郑州450008

目的探讨山奈酚(kaempferol,KAE)对脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)大鼠神经性疼痛的作用机制。方法采用脂多糖(lipopolysaccharide,LpS)诱导大鼠星形胶质细胞建立炎症模型,用山奈酚单独或与miR-340-5p抑制剂共同处理细胞,RT-qpC... 详细信息

目的探讨山奈酚(kaempferol,KAE)对脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)大鼠神经性疼痛的作用机制。方法采用脂多糖(lipopolysaccharide,LpS)诱导大鼠星形胶质细胞建立炎症模型,用山奈酚单独或与miR-340-5p抑制剂共同处理细胞,RT-qpCR检测miR-340-5p表达,ELISA检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;荧光素酶报告基因实验验证AKT3与miR-340-5p的靶向关系;Western blotting检测自噬标志蛋白的表达。此外,建立SNL大鼠模型,山奈酚口服给药后,检测miR-340-5p表达,炎症因子以及自噬标志蛋白水平,并测定大鼠机械缩爪阈值和缩爪潜伏期。结果在LpS诱导的星形胶质细胞中,山奈酚上调miR-340-5p表达,抑制IL-1β和TNF-α分泌,转染miR-340-5p抑制剂则逆转山奈酚对miR-340-5p表达的促进作用以及对炎症因子分泌的抑制作用。AKT3被确定是miR-340-5p的靶基因。山奈酚上调miR-340-5p表达,进而阻断AKT3/mTOR信号通路,增强星形胶质细胞自噬。山奈酚给药的SNL大鼠表现出miR-340-5p表达上调,炎症因子分泌减少,自噬相关蛋白表达增加,机械缩爪阈值增加,缩爪潜伏期延长。结论山奈酚通过上调miR-340-5p靶向抑制AKT3/mTOR信号通路,抑制星形胶质细胞炎症反应,增强自噬,减轻SNL大鼠神经性疼痛。

关键词：神经性疼痛山奈酚 miR-340-5p 自噬 AKT3/mTOR信号通路

miR-340-5p调控乙型肝炎病毒复制的机制

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第4期36卷 378-384页

作者：熊秋爽关昊桐华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科武汉430022 武汉大学中南医院妇产科武汉430072

目的阐释miR-340-5p对HBV复制的影响及其调控机制,并为HBV感染后的生物标志物和治疗用药提供新的策略。方法在肝癌细胞HepG2.2.15中转染miR-340-5p的模拟物(340-mimic)和抑制剂(340-inhibitor)及其对应的阴性对照。通过ELISA检测上清中H... 详细信息

目的阐释miR-340-5p对HBV复制的影响及其调控机制,并为HBV感染后的生物标志物和治疗用药提供新的策略。方法在肝癌细胞HepG2.2.15中转染miR-340-5p的模拟物(340-mimic)和抑制剂(340-inhibitor)及其对应的阴性对照。通过ELISA检测上清中HBeAg和HBsAg的水平变化。同时收取细胞,提取RNA和壳体化DNA,并采用qRT-pCR分别检测HBV总RNA和pgRNA的水平及HBV DNA拷贝数的变化;分子克隆构建STAT3的过表达质粒pEF-flag-stat3,通过qRT-pCR和western blot对STAT3的mRNA和蛋白表达加以验证;此外,共转染miR-340-5p的模拟物和pEF-flag-stat3后通过northern blot,qpCR和ELISA对HBV的复制情况进行检测。结果miR-340-5p过表达后,HBV转录生成总RNA和逆转录模板pgRNA的水平明显下降至对照组的45.89%、61.46%(p=0.001、p=0.003);壳体化DNA的合成及HBeAg和HBsAg的分泌水平分别受到72.46%、18.27%、14.42%的抑制(ppp=0.005);干扰内源性miR-340-5p则与对照组相比分别增加44.02%、45.56%、22.66%、11.85%、14.04%(p=0.009、p=0.01、p=0.011、p=0.013、p=0.027)。相比之下在此基础上过表达信号转导和转录激活因子(STAT)3能够减弱被miR-340-5p抑制的HBV复制。进一步的实验结果也表明STAT3对HBV的复制有促进作用。结论miR-340-5p能够通过靶向作用于STAT3抑制其转录和翻译进而抑制HBV的复制。

关键词：乙型肝炎病毒 miR-340-5p STAT3 复制

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

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实用医学杂志 2023年第1期39卷 41-47页

作者：姜平郭哲梁殿迅杨喜科付小玲李和丽河南省南阳市中心医院河南南阳473000

目的探讨长链非编码RNA X失活特异转录物(lncRNA XIST)通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA X失活特异转录物(lncRNA XIST)通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系;划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力;RT-qpCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA和蛋白表达。结果在卵巢癌组织和细胞系中,lncRNA XIST高表达,miR-340-5p低表达(p5)。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达(p5)。转染si-lncRNA XIST后,lncRNA XIST水平、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高(p5);共转染si-lncRNA XIST和miR-340-5p inhibitor后上述指标均得到逆转(p5)。结论lncRNA XIST通过下调miR-340-5p促进卵巢癌细胞EMT。

关键词：长链非编码RNA X失活特异转录物 miR-340-5p 卵巢癌上皮间质转化

长链非编码RNA SNHG1靶向miR-340-5p/CCND1轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

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现代肿瘤医学 2023年第12期31卷 2209-2215页

作者：黄建伟李玉凤张权王璐刘晓宇曾海牡丹江医学院附属红旗医院胸外科黑龙江牡丹江157011 牡丹江医学院附属红旗医院普外科黑龙江牡丹江157011

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-pCR法测定细胞中LncRNA SN... 详细信息

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-pCR法测定细胞中LncRNA SNHG1、miR-340-5p、CCND1 mRNA水平。将对数期NEC细胞分为对照组、sh NC1组、sh LncRNA SNHG1组、sh NC2组、sh CCND1组、sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组、sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组。CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室法测定细胞侵袭、迁移能力,Western blot法检测CCND1、Ki-67、MMp-2蛋白表达,双荧光素酶验证miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1的靶向关系,通过裸鼠瘤内注射转染试剂进行体内试验。结果:与人食管上皮细胞相比,食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109中LncRNA SNHG1、CCND1 mRNA表达升高,miR-340-5p表达降低(p5),其中NEC细胞变化最显著,所以使用NEC作为下续研究菌株。与对照组、sh NC组相比,sh LncRNA SNHG1组NEC细胞LncRNA SNHG1、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMp-2降低(p5);与对照组、sh NC组相比,sh CCND1组CCND1 mRNA与蛋白表达、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMp-2表达降低(p5)。miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1均靶向结合,与sh LncRNA SNHG1组相比,sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMp-2蛋白表达升高(p5);与sh CCND1组相比,sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMp-2蛋白表达升高(p5);裸鼠移植瘤实验进行了体内验证。结论:LncRNA SNHG1沉默可能通过调控miR-340-5p/CCND1表达抑制食管癌NEC细胞增殖、侵袭与迁移,裸鼠体内也验证了这一结果。

关键词：食管癌长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1 miR-340-5p 细胞周期蛋白1 增殖迁移侵袭

槲皮素通过调控miR-340-5p影响子宫内膜异位症细胞的增殖和凋亡

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中国优生与遗传杂志 2023年第7期31卷 1360-1365页

作者：邹清靖甘露吴小玲居文惠荆州市中心医院妇科湖北荆州434000

目的探讨槲皮素对子宫内膜异位症(EM)细胞End1/E6E7增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法选取荆州市中心医院2017年3月至2019年3月的30例EM组织和非EM组织;体外培养EM细胞End1/E6E7,将其分为对照组、槲皮素组、NC组、mir-NC组、mir... 详细信息

目的探讨槲皮素对子宫内膜异位症(EM)细胞End1/E6E7增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法选取荆州市中心医院2017年3月至2019年3月的30例EM组织和非EM组织;体外培养EM细胞End1/E6E7,将其分为对照组、槲皮素组、NC组、mir-NC组、miR-340-5p组、槲皮素+anti-mir-NC组、槲皮素+anti-miR-340-5p组;RT-qpCR检测EM组织和细胞中miR-340-5p的表达水平;MTT检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测pCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与非EM组织比较,EM组织中miR-340-5p表达水平显著降低(p5);槲皮素处理或过表达miR-340-5p显著降低End1/E6E7细胞OD值和pCNA、Bcl-2蛋白水平,提高细胞凋亡率和Bax蛋白水平(p5);槲皮素处理可显著升高miR-340-5p表达水平(p5),且下调miR-340-5p逆转了槲皮素对End1/E6E7细胞增殖和凋亡的影响(p5)。结论槲皮素可能通过上调miR-340-5p抑制End1/E6E7细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词：槲皮素 miR-340-5p 子宫内膜异位症增殖凋亡

干扰lncRNA HOXA-AS3负调控miR-340-5p对小细胞肺癌细胞DMS114/DDp顺铂耐药性的影响

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中国比较医学杂志 2021年第11期31卷 96-101页

作者：张昆孙洋翟所锴杨光淄博市第一医院呼吸内科山东淄博255200

目的探讨长链非编码RNA HOXA-AS3(lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞DMS114/DDp的影响及其对微小RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用。方法采用qRT-pCR法检测肺癌组织及癌旁组织中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;体外培养小细胞肺... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA HOXA-AS3(lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞DMS114/DDp的影响及其对微小RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用。方法采用qRT-pCR法检测肺癌组织及癌旁组织中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;体外培养小细胞肺癌细胞DMS114,采用顺铂浓度递增法建立耐药细胞DMS114/DDp,分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3与anti-mir-NC、si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p转染至DMS114/DDp细胞;采用qRT-pCR法检测细胞中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;采用CCK-8法检测细胞存活率及计算顺铂IC_(50)值;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测HOXA-AS3、miR-340-5p的靶向关系。结果肺癌组织中HOXA-AS3的表达水平升高(p5),miR-340-5p的表达水平降低(p5);不同浓度的顺铂处理后DMS114细胞、DMS114/DDp细胞存活率逐渐降低(p5),且DMS114/DDp细胞IC_(50)值高于DMS114细胞(p5);与DMS114细胞比较,DMS114/DDp细胞中HOXA-AS3的表达水平升高(p5);转染si-HOXA-AS3可明显降低细胞活力(p5),提高凋亡率(p5);双荧光素酶报告实验证实HOXA-AS3可靶向结合miR-340-5p;共转染si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p可明显提高细胞活力(p5),降低凋亡率(p5)。结论干扰HOXA-AS3表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡进而增强DMS114/DDp细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与上调miR-340-5p的表达有关。

关键词： lncRNA HOXA-AS3 miR-340-5p 小细胞肺癌顺铂增殖凋亡

MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

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东南大学学报（医学版） 2023年第2期42卷 227-233页

作者：段战锋张巍巍申晓燕河南省许昌市中心医院鹿鸣湖院区肿瘤内科二病区河南许昌461000 河南省许昌市中心医院鹿鸣湖院区胃肠外科河南许昌461000

目的:探讨MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取2017年1月至2018年6月在我院进行胃癌根治术的96例胃癌患者为研究对象,收集患者的胃癌组织及离肿瘤边缘5 cm处的癌旁组织。采用免疫组织化学染色法观察胃癌组织... 详细信息

目的:探讨MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取2017年1月至2018年6月在我院进行胃癌根治术的96例胃癌患者为研究对象,收集患者的胃癌组织及离肿瘤边缘5 cm处的癌旁组织。采用免疫组织化学染色法观察胃癌组织及癌旁组织中MICAL2的表达情况;Western Blot法检测胃癌组织中MICAL2蛋白水平,实时荧光定量pCR(qRT-pCR)法检测胃癌组织中miR-340-5p表达水平。分析MICAL2、miR-340-5p表达水平与患者临床病理参数的关系;pearson法分析MICAL2与miR-340-5p表达的相关性;对患者随访3年,利用Kaplan-Meier法分析不同MICAL2、miR-340-5p水平与患者3年累积生存率的关系;采用多因素Cox回归风险模型分析胃癌患者的预后影响因素。结果:胃癌患者癌组织中MICAL2、miR-340-5p表达水平均明显高于癌旁组织(p5);胃癌组织中MICAL2蛋白阳性表达率为71.88%(69/96),癌旁组织中MICAL2蛋白阳性表达率为11.46%(11/96)(p5);胃癌组织中MICAL2蛋白和miR-340-5p表达与淋巴结转移、TNM分期有关(p5);胃癌组织中MICAL2与miR-340-5p的表达水平呈正相关(r=0.313,p5);Kaplan-Meier分析结果显示,miR-340-5p高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=9.096,p=0.003),MICAL2蛋白高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=4.329,p=0.037);Cox回归分析结果显示,MICAL2、miR-340-5p、淋巴结转移、TNM分期均是影响患者预后的危险因素(p5)。结论:MICAL2、miR-340-5p在胃癌组织中明显高表达,二者与胃癌患者病情发展和预后密切相关,可能成为胃癌基因治疗的新靶点。

关键词：胃癌 MICAL2 miR-340-5p 相关性预后

miR-340-5p靶向ATF7基因调节绵羊肌内前体脂肪细胞分化的研究

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miR-340-5p靶向ATF7基因调节绵羊肌内前体脂肪细胞分化的研究

作者：刘昊东山西农业大学

学位级别：硕士

MicroRNAs(mirNAs)是短链非编码RNA,可以通过碱基互补配对的方式结合到靶基因m RNA的3’UTR、5’UTR和CDS区,促进靶基因m RNA降解或抑制其蛋白翻译。mirNA在许多生命过程中发挥重要的调节作用,如前体脂肪细胞的分化、脂质代谢和脂质积... 详细信息

MicroRNAs(mirNAs)是短链非编码RNA,可以通过碱基互补配对的方式结合到靶基因m RNA的3’UTR、5’UTR和CDS区,促进靶基因m RNA降解或抑制其蛋白翻译。mirNA在许多生命过程中发挥重要的调节作用,如前体脂肪细胞的分化、脂质代谢和脂质积累等生理过程。但目前的研究主要集中于mirNA对模式动物脂肪细胞分化的调控,关于它们参与绵羊肌内前体脂肪细胞分化的研究较少。ATF7(activating transcription factor 7)是ATF转录因子家族的成员之一,通过结合到靶基因增强子区,抑制转录的起始过程。目前已知ATF7可以促进脂肪细胞分化,但具体机制尚不清楚。研究mirNA和ATF7在绵羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的功能和分子机制,对提高绵羊胴体的肉质品质、改善脂肪细胞分布奠定理论基础。本试验旨在研究miR-340-5p和靶基因ATF7对绵羊肌内前体脂肪细胞分化的影响机制。用胶原酶消化法,在体外得到绵羊肌内前体脂肪细胞,并用油红O染色、q RT-pCR和Western Blotting在细胞分化不同时段检测细胞的成脂分化能力。分析实验室前期mirNA组测序数据,得到表达量较高且差异的miR-340-5p。用双荧光素酶报告检测系统,检测miR-340-5p与ATF7之间是否具有靶标关系。用转染miR-340-5p mimics和inhibitors的方法,过表达和抑制miR-340-5p,在细胞水平研究miR-340-5p对绵羊肌内前体脂肪细胞的影响。将构建好的ATF7慢病毒过表达载体与慢病毒抑制载体,用慢病毒包装的方法在293T细胞中得到具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染绵羊肌内前体脂肪细胞,过表达或抑制ATF7的表达。用油红O染色、q RT-pCR和Western Blotting方法检测试验中空白对照组与试验组脂滴积累量、成脂相关标志基因的m RNA和蛋白表达量,以研究ATF7转录因子在绵羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的作用机制。本研究的主要结果如下:(1)在体外成功分离培养绵羊肌内前体脂肪细胞。培养3 d的前体脂肪细胞展现出梭形和不规则三角型,没有脂滴出现。在分化培养过程中,分化的脂肪细胞从少变多,脂滴由小变大,成脂标志基因ppARγ(peroxisome proliferator activated receptorγ)、C/EBpα(CCAAT enhancer binding proteinα)和FABp4(fatty acid binding protein 4)的m RNA和蛋白表达量,在0、6和12 d呈现逐步上升趋势,表明体外分离培养的细胞可用于后续试验。(2)验证miR-340-5p与ATF7之间的靶标关系。在实验室前期mirNA测序数据中找到差异表达的miR-340-5p,通过生物信息学预测软件发现,miR-340-5p在ATF73’UTR有潜在的结合位点。双荧光素酶报告系统结果显示,miR-340-5p可显著降低含有3’UTR的双荧光报告载体的荧光强度(pmiR-340-5p与ATF7之间存在靶标关系。(3)miR-340-5p抑制绵羊肌内前体脂肪细胞的分化。在体外培养的绵羊肌内前体脂肪细胞中过表达miR-340-5p,分化培养12 d,ATF7 m RNA和蛋白表达量与对照组相比显著下降,成脂标志基因的m RNA和蛋白表达量与对照组相比也显著降低。当抑制miR-340-5p表达时,呈现出相反的结果。说明miR-340-5p靶向ATF7抑制绵羊肌内前体脂肪细胞的分化。(4)ATF7促进绵羊肌内前体脂肪细胞分化。通过构建ATF7慢病毒过表达和抑制表达系统,在绵羊肌内前体脂肪细胞中过表达或抑制ATF7的表达。发现,在过表达ATF7后,STAT1(signal transducer and activator of transcription 1)表达量显著下降(pppARγ的表达量显著上升(pppARγ的表达,进而促进绵羊肌内前体脂肪细胞的成脂分化。以上结果表明,miR-340-5p靶向ATF7,抑制绵羊肌内前体脂肪细胞的成脂分化。为增加绵羊肌内脂肪含量,提高胴体质量提供科学依据。

关键词：绵羊 miR-340-5p ATF7 肌内脂肪细胞分化

靶向骨形态发生蛋白4的miR-340-5p对大鼠神经干细胞分化的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2017年第5期26卷 395-399页

作者：黄学平吴文友郑捍东叶维霞罗丹泸州市人民医院神经外科泸州646000 泸州市人民医院消化内科泸州646000 泸州市人民医院妇产科泸州646000

目的探讨miR-340-5p对靶点骨形态发生蛋白4（bonemorphogeneticprotein4，BMp4）的调控作用及对大鼠神经干细胞（NSCs）分化的影响。方法传至第3代的SD大鼠NSCs随机为空白对照组（Mock）、无义寡核苷酸组（Anti—Con）和miR-340-5p反义... 详细信息

目的探讨miR-340-5p对靶点骨形态发生蛋白4（bonemorphogeneticprotein4，BMp4）的调控作用及对大鼠神经干细胞（NSCs）分化的影响。方法传至第3代的SD大鼠NSCs随机为空白对照组（Mock）、无义寡核苷酸组（Anti—Con）和miR-340-5p反义寡核苷酸组（Anti-miR-340-5p），采用荧光定量pCR（qRT-pCR）检测mir-340—5p的表达，应用免疫细胞化学和免疫荧光方法分别观察NF200和MAp2表达，运用Westernblot法检测BMp4蛋白表达情况。结果Anti-mir．340-5p组miR-340-5p的相对表达量为（0．14±0．01），较Mock组（1．01±0．17）和Anti—Con组（1．07±0．13）显著降低（p〈0．01）；Anti—mir-340—5p组细胞NF200呈强阳性表达；mir-340—5p反义寡核苷酸转染组MAp2阳性细胞百分比显著高于Anti—Con组（p〈0．05）；与Mock组（0．53±0．04）和Anti·Con组（0．63±0．09）相比，An-ti—miR-340-5p组BMp4蛋白相对表达量显著升高（0．84±0．09）（p〈0．05）。结论miR-340-5p可能通过负性调控BMp4表达，发挥潜在的调控离体培养的大鼠NSCs向神经元分化功能。

关键词： miR-340-5p 骨形态发生蛋白4 神经干细胞分化