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mir-214激活铁死亡驱动基因促进酒精肝铁死亡敏感性的机制研究

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miR-214激活铁死亡驱动基因促进酒精肝铁死亡敏感性的机制研究

作者：谢梦玥青岛大学

学位级别：硕士

目的:mir-214在酒精性肝炎患者肝脏中高表达,通过研究mir-214对铁死亡驱动基因的正向调控作用,解析mir-214影响酒精损伤肝细胞的毒作用机制,为筛选酒精肝发病过程中表观遗传因子提供新的理论依据和实验支撑。方法:从GEO数据库中提取mir-... 详细信息

目的:mir-214在酒精性肝炎患者肝脏中高表达,通过研究mir-214对铁死亡驱动基因的正向调控作用,解析mir-214影响酒精损伤肝细胞的毒作用机制,为筛选酒精肝发病过程中表观遗传因子提供新的理论依据和实验支撑。方法:从GEO数据库中提取mir-214在酒精性肝炎患者和健康人群肝脏组织中的表达数据;采用CCK8和LDH检测实验来研究mir-214影响酒精暴露对肝细胞的毒性效应;通过mir-214模拟物转染联合GPX4抑制剂RSL3或者GPX4 si RNA处理肝细胞,探究mir-214对肝细胞铁死亡敏感性的作用机制;整合Target Scan数据库、mir DIP数据库、RNAhybrid算法以及表达相关性分析,预测mir-214对铁死亡驱动基因和抑制基因的靶向性;通过实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验验证mir-214对铁死亡基因表达的调控作用;通过核质分离实验明确mir-214在肝细胞中的分布位置;通过放线菌素D实验研究mir-214对靶基因成熟转录本和前体转录本稳定性的影响。采用染色质免疫共沉淀实验解析mir-214对靶基因启动子区染色质的活化作用以及RNA聚合酶II的富集。最后通过RNA免疫共沉淀实验和共转染实验明确参与mir-214靶向调控的AGO蛋白。结果:与健康人群相比,mir-214在酒精性肝炎患者肝脏中的表达显著升高;mir-214可以进一步抑制酒精暴露肝细胞的活力并显著提高LDH的释放水平;此外,我们还发现mir-214能显著提高肝细胞对铁死亡的敏感性。后续的生物信息学分析和细胞实验结果表明mir-214靶向铁死亡驱动基因ACSL4、SLC38A1和PRKAA2,并提高这些基因m RNA和蛋白水平的表达,但mir-214对铁死亡抑制基因无靶向调控作用。核质分离实验表明mir-214主要分布在肝细胞的细胞核中,mir-214能显著提高靶基因前体转录本的表达,且对靶基因成熟转录本和前体转录本的稳定性没有影响。染色质免疫共沉淀实验结果显示,mir-214可以显著增加靶基因启动子区H3K27ac和H3K4me1修饰水平以及RNA聚合酶II的富集。RNA免疫沉淀实验表明mir-214在细胞核中结合AGO2蛋白而不是AGO1蛋白,并且mir-214对细胞质中的AGO1和AGO2蛋白均无结合作用;随后通过AGO2 si RNA和mir-214模拟物的共转染实验进一步证明AGO2蛋白参与mir-214对铁死亡驱动基因的正向调控。结论:酒精肝中mir-214以AGO2依赖的方式在转录水平正向调控铁死亡驱动基因ACSL4、SLC38A1和PRKAA2的表达,进而增加了肝细胞对铁死亡的敏感性。

关键词：酒精肝 mir-214 铁死亡正向调控铁死亡驱动基因

紫草素通过调控mir-214表达抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭

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中国老年学杂志 2023年第18期43卷 4573-4577页

作者：吴明媛赵伟赵远毋亚坤张瀚文焦作市人民医院河南焦作454000

目的探究紫草素对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭及其mir-214表达的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,用不同浓度(4、8、16、32、64μmol/L)的紫草素处理Hela细胞;将mir-NC、mir-214转染至Hela细胞;将anti-mir-NC、anti-mir-214转染至Hel... 详细信息

目的探究紫草素对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭及其mir-214表达的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,用不同浓度(4、8、16、32、64μmol/L)的紫草素处理Hela细胞;将mir-NC、mir-214转染至Hela细胞;将anti-mir-NC、anti-mir-214转染至Hela细胞,再用64μmol/L紫草素处理。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和平板克隆实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR(qPCR)检测mir-214表达;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;建立异种移植肿瘤模型以确认肿瘤在体内的进展。结果紫草素可以显著降低细胞OD值和克隆形成数,且呈剂量依赖性。紫草素可以显著降低细胞迁移、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达,显著减小肿瘤体积(Pmir-214表达水平(Pmir-214过表达后,细胞OD值和克隆形成数显著降低,细胞迁移、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(Pmir-214表达水平,从而显著升高细胞OD值和克隆形成数,显著升高细胞迁移、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达,显著增大肿瘤体积(Pmir-214表达有关。

关键词：紫草素宫颈癌增殖迁移和侵袭 mir-214

mir-214介导慢性淋巴细胞白血病对氟达拉滨耐药的作用研究

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中国实验血液学杂志 2019年第5期27卷 1395-1401页

作者：邹志建孙鸿丽沈云峰周新南京医科大学附属无锡人民医院血液科

目的:探讨mir-214在慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞对氟达拉滨耐药中的作用及机制。方法:选择2014年08月-2018年07月P本院血液科收治对氟达拉滨(Flu)耐药的CLL患者和健康受试者各10例,采用RTPCR法测定单个核细胞中mir-214表达水平。将CLL... 详细信息

目的:探讨mir-214在慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞对氟达拉滨耐药中的作用及机制。方法:选择2014年08月-2018年07月P本院血液科收治对氟达拉滨(Flu)耐药的CLL患者和健康受试者各10例,采用RTPCR法测定单个核细胞中mir-214表达水平。将CLL患者原代细胞分为空白对照组(control group)、阴性对照组(mir-214-NC group)和mir-214转染组(mir-214-ASO group)。转染病毒24 h后与Flu共同培养48 h,测定细胞增殖和凋亡情况,以及PTEN和PI3K/AKT信号通路下游相关基因和蛋白表达水平。结果:CLL患者单个核细胞mir-214的表达水平较健康受试者显著升高(Pmir-214转染组细胞mir-214表达水平显著降低(Pmir-214转染组细胞在Flu浓度为3、10和30μmol/L时的吸光度显著降低(Pmir-214转染组细胞的凋亡率显著增高(Pmir-214可以提高耐药的CLL细胞对氟达拉滨的敏感性,这种作用可能与其促进细胞凋亡有关,并且与其调节PTEN/AKT信号通路下游分子表达有关。

关键词：慢性淋巴细胞白血病 mir-214 氟达拉滨耐药 PTEN/AKT信号通路

虎杖苷对ApoE^(-/-)小鼠肝脏mir-214表达水平及肝功能的影响

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南方医科大学学报 2016年第6期36卷 763-767页

作者：周凤华温子云何泽淮李梅尹琼丽石成钢成彩联南方医科大学中医药学院广东广州510515 中山大学附属第三医院特诊医疗中心广东广州510630 中山大学附属第三医院肾脏内科广东广州510630

目的研究虎杖苷(PD)对Apo E-/-小鼠肝脏mi R-214及肝功能的影响。方法采用高脂饲料喂养雄性Apo E-/-小鼠,建立小鼠AS模型。将Apo E-/-小鼠随机分为4组(n=10),即模型组(Model)、辛伐他汀组(Simvastatin)、PD低剂量组(PDL)、PD高剂量组(PD... 详细信息

目的研究虎杖苷(PD)对Apo E-/-小鼠肝脏mi R-214及肝功能的影响。方法采用高脂饲料喂养雄性Apo E-/-小鼠,建立小鼠AS模型。将Apo E-/-小鼠随机分为4组(n=10),即模型组(Model)、辛伐他汀组(Simvastatin)、PD低剂量组(PDL)、PD高剂量组(PDH),另设10只同龄C57BL/6J小鼠为正常对照组。连续给药12周后取血,检测小鼠血糖、血脂、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肝脏T-SOD及MDA等指标,HE染色观察肝组织病理切片,实时荧光定量PCR检测mi R-214水平。结果模型组小鼠血糖和血清中TC、TG、LDL-C、ALT和AST,以及肝脏中MDA较正常对照组显著增高(P214则显著降低(P214及T-SOD(P214水平,调节T-SOD与MDA等氧化应激指标有关。

关键词：虎杖苷动脉粥样硬化 mir-214 肝功能氧化应激

血管内皮细胞来源外泌体mir-214对H_(2)O_(2)诱导血管内皮细胞损伤的影响

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西部医学 2023年第3期35卷 323-330页

作者：史斌浩王建飞汪贵忠李陈璇曹洁高林欧阳星文安徽省第二人民医院心内科安徽合肥230041

目的探讨血管内皮细胞来源外泌体mir-214对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),并转染mir-214抑制物(in-mir-214)及其阴性对照(in-mir-NC),分离并鉴定外泌体,同时检测mir-214... 详细信息

目的探讨血管内皮细胞来源外泌体mir-214对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),并转染mir-214抑制物(in-mir-214)及其阴性对照(in-mir-NC),分离并鉴定外泌体,同时检测mir-214表达。再次培养HUVEC,分为正常对照组(Control组)、氧化损伤组(H_(2)O_(2)组)、空白外泌体+氧化损伤组(exo NC+H_(2)O_(2)组)、in-mir-NC外泌体+氧化损伤组(exo in-mir-NC+H_(2)O_(2)组)和in-mir-214外泌体+氧化损伤组(exo in-mir-214+H_(2)O_(2)组)。qRT-PCR检测细胞中mir-214表达水平;MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白水平。结果成功从HUVEC细胞中分离出外泌体,且转染in-mir-214可抑制外泌体中mir-214表达(Pmir-214表达水平增高,Cyclin D1、PCNA、Bcl2、MMP2和MMP9蛋白水平降低,Bax蛋白水平增高(Pmir-214可部分削弱H_(2)O_(2)对HUVEC细胞的损伤,且后者的效果要明显优于前者(Pmir-214保护HUVEC免受H_(2)O_(2)诱导的细胞损伤。

关键词：外泌体 mir-214 过氧化氢血管内皮细胞损伤高血压

宫腔粘连患者血清mir-214、CTGF表达及预测术后复发价值

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中国计划生育学杂志 2022年第10期30卷 2238-2242,2247页

作者：马飞雯沙红兰马宗丽李寅红仇菊江苏省如皋市人民医院 226500

目的:探讨血清mir-214和结缔组织生长因子(CTGF)表达情况与宫腔粘连(IUA)临床病理因素以及术后复发的关系.方法:收集本院2019年9月-2020年9月收治的IUA患者80例为IUA组,均行宫腔粘连分离术;健康体检者60例为对照组.应用qRT-PCR检测两组... 详细信息

目的:探讨血清mir-214和结缔组织生长因子(CTGF)表达情况与宫腔粘连(IUA)临床病理因素以及术后复发的关系.方法:收集本院2019年9月-2020年9月收治的IUA患者80例为IUA组,均行宫腔粘连分离术;健康体检者60例为对照组.应用qRT-PCR检测两组血清mir-214表达,酶联免疫吸附法检测血清CTGF水平;pearson法分析血清mir-214与CTGF水平的相关性;分析IUA患者术前与术后血清mir-214、CTGF表达变化;受试者工作特征(ROC)曲线分析mir-214、CTGF表达水平对IUA术后复(12例)发的预测价值;多因素logistic回归分析IUA患者术后复发的危险因素.结果:IUA组血清mir-214水平(0.46±0.08)低于对照组(1.24±0.16),CTGF水平(141.35±34.18ng/ml)高于对照组(66.75±17.48ng/ml)(均Pmir-214与CTGF表达呈负相关(r=-0.538,Pmir-214、CTGF表达水平差异显著(Pmir-214、CTGF预测IUA患者术后复发的曲线下面积分别为0.787、0.823,敏感性分别为75.0%、66.7%,特异性分别为91.2%、91.2%.多因素分析显示,人工流产>3次、宫腔粘连性质为肌性、宫腔粘连范围>2/3、mir-214低表达、CTGF高表达是IUA患者术后复发的独立危险因素(Pmir-214、CTGF表达异常,且对术后复发有一定诊断价值,有望成为预测IUA患者不良预后的生物学指标.

关键词：宫腔粘连宫腔粘连分离术 mir-214 结缔组织生长因子术后复发预测

mir-214和mir-29a与高血压患者左心室肥厚及心功能的关系

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中国分子心脏病学杂志 2022年第6期22卷 5034-5039页

作者：刘燕霞邵志远田宝金耿周北京市西城区广外医院肾内科北京市100055 通辽市医院心脏血管外科通辽市028007 北京市西城区德胜社区卫生服务中心北京市100120 清河县人民医院邢台市054800

目的探究mir-214和mir-29a与高血压患者左心室肥厚(LVH)及心功能的关系。方法选取2020年2月至2021年6月诊治的高血压患者96例,根据超声检查结果分为高血压LVH组(34例)和单纯高血压组(62例)。收集两组患者的一般临床资料并进行比较;患者... 详细信息

目的探究mir-214和mir-29a与高血压患者左心室肥厚(LVH)及心功能的关系。方法选取2020年2月至2021年6月诊治的高血压患者96例,根据超声检查结果分为高血压LVH组(34例)和单纯高血压组(62例)。收集两组患者的一般临床资料并进行比较;患者血浆mir-214和mir-29a水平通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,并分析不同程度高血压LVH患者血浆mir-214、mir-29a水平的变化;利用彩色超声仪分析患者的左心室心功能指标;采用Pearson相关性分析高血压患者血浆mir-214与mir-29a水平相关性,及二者与E/A值的相关性;利用多因素logistic回归分析影响高血压患者发生LVH的危险因素;ROC曲线分析mir-214、mir-29a对高血压患者发生LVH的诊断价值。结果与单纯高血压组相比,高血压LVH组患者血浆mir-214、mir-29a表达水平明显升高,且mir-214及mir-29a水平随着LVH程度加重而不断上升(Pmir-214与mir-29a水平呈显著正相关(P214、mir-29a水平与E/A值呈显著负相关(Pmir-214及mir-29a为影响高血压患者发生LVH的独立危险因素(Pmir-214、mir-29a及二者联合诊断高血压患者发生LVH的曲线下面积(AUC)分别为0.907、0.801、0.941;血浆mir-214水平、血浆mir-214联合mir-29a诊断高血压患者发生LVH的AUC均高于血浆mir-29a水平(Pmir-214、mir-29a呈高表达,其水平与患者心功能有密切联系,二者均可作为高血压LVH早期诊断的辅助生物标志物。

关键词： mir-214 mir-29a 高血压左心室肥厚心功能

葛根素通过调控mir-214抑制脊髓损伤后神经元炎症反应及凋亡的实验研究

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颈腰痛杂志 2023年第4期44卷 508-512,516页

作者：王光健王德华谭响谢继勇重庆市荣昌区人民医院骨科重庆402460

目的探讨葛根素是否通过介导mir-214抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的脊髓神经元炎症反应及凋亡。方法体外培养大鼠脊髓神经元细胞,以H_(2)O_(2)刺激构建脊髓神经元损伤模型,实验分为:Con组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)... 详细信息

目的探讨葛根素是否通过介导mir-214抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的脊髓神经元炎症反应及凋亡。方法体外培养大鼠脊髓神经元细胞,以H_(2)O_(2)刺激构建脊髓神经元损伤模型,实验分为:Con组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+Pue组、H_(2)O_(2)+Pue+anti-mir-NC组和H_(2)O_(2)+Pue+anti-mir-214组。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测各组mir-214的表达,CCK-8法检测细胞活性,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,酶联免疫吸附测定法分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法(Western blot)检测裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)表达水平。结果与Con组相比,H_(2)O_(2)组细胞活性、SOD活性和mir-214的表达显著降低,细胞内ROS水平、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量、凋亡率、Cleaved caspase-3的表达水平显著升高,差异均有统计学意义(Pmir-214的表达明显升高,细胞内ROS水平、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量、凋亡率、Cleaved caspase-3的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(Pmir-214能够逆转葛根素对H_(2)O_(2)诱导的脊髓神经元细胞的损伤保护作用。结论葛根素能够通过上调mir-214的表达抑制H_(2)O_(2)诱导的脊髓神经元细胞凋亡和炎症反应,对脊髓神经元细胞损伤起保护作用。

关键词：葛根素 mir-214 脊髓神经元细胞凋亡炎症反应

血清mir-132、mir-214、HMGB1表达与急性心肌梗死患者经皮冠脉介入术后MACE发生的关系研究

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中国分子心脏病学杂志 2023年第5期23卷 5657-5662页

作者：刘曙杰孙立娜韩丹丹陈儒韩晓庆王均志王杰青岛市城阳区人民医院心血管内科青岛市266109 湖南中医药大学第一附属医院心内科长沙市410021

目的分析血清mir-132、mir-214、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达与急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠脉介入术(PCI)后心血管不良事件(MACE)发生的关系。方法选取2021年1月至2022年1月收治的106例AMI患者作为AMI组,行PCI,均随访6个月,统计患者M... 详细信息

目的分析血清mir-132、mir-214、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达与急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠脉介入术(PCI)后心血管不良事件(MACE)发生的关系。方法选取2021年1月至2022年1月收治的106例AMI患者作为AMI组,行PCI,均随访6个月,统计患者MACE发生情况,将发生MACE的患者纳入MACE组,反之纳入非MACE组。采用实时荧光定量检测血清中mir-132、mir-214水平,酶联免疫吸附法检测血清中HMGB1水平,化学发光法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI),免疫透射比浊法测定血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,采用超声心动图检测心功能。绘制受试者操作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估术前血清mir-132、mir-214和HMGB1对AMI患者MACE的预测价值。结果AMI患者PCI术后血清中mir-132、mir-214、左心室射血分数(LVEF)水平明显高于术前(Pmir-132、mir-214 mRNA水平明显低于非MACE组(Pmir-132、mir-214、HMGB1及联合检测预测AMI患者预后的AUC分别为0.713、0.724、0.713、0.787(Pmir-132、mir-214水平下降,HMGB1水平上升,上述指标联合检测能预测AMI患者PCI治疗后的MACE发生情况。

关键词：急性心肌梗死经皮冠脉介入术 mir-132 mir-214 高迁移率族蛋白B1 心血管不良事件