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梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性

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江苏农业学报 2020年第4期36卷 978-983页

作者：古努尔·吐尔逊王登峰杨学云魏玉荣李建军孟肖潇洪都孜·波拉提吴建勇新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830013

为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节... 详细信息

为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)分离株gag蛋白氨基酸序列和抗原表位相似性,构建gag基因重组表达载体并转入BL21(DE3)宿主菌进行诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting确定其大小、分布和反应原性。结果显示,MVV gag蛋白氨基酸序列与中国CAEV分离株的相似性为74.7%~74.9%,它的11个抗原表位与CAEV gag蛋白的12个抗原表位存在较高的序列相似性,推测其可作为中国SRLVs血清学诊断的通用蛋白质标记物;SDS-PAGE检测结果显示,重组gag蛋白大小约为55000,主要以包涵体形式存在,Western blotting显示该蛋白可与MVV和CAEV感染动物血清发生免疫反应,证实了蛋白序列分析结果。该研究结果可为研制中国SRLVs通用血清学检测技术方法奠定基础。

关键词：梅迪-维斯纳病毒 gag蛋白原核表达交叉反应原性抗原表位

重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒中国株B’亚型gag蛋白及免疫效果观察

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病毒学报 2002年第1期18卷 9-14页

作者：刘锦彦陶欣洪坤学吴岚刘颖朱家鸿邵一鸣武汉生物制品研究所湖北430060 国家艾滋病参比实验室北京100050

为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因 ,利用痘苗病毒载体构建表达HIV - 1B′亚型中国流行株RL4 2 的gag蛋白的重组病毒rVV -RL4 2 gag ,并免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体 ,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B... 详细信息

为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因 ,利用痘苗病毒载体构建表达HIV - 1B′亚型中国流行株RL4 2 的gag蛋白的重组病毒rVV -RL4 2 gag ,并免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体 ,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。结果显示 :重组病毒能很好地表达gag蛋白 ,它具有与 7株单克隆抗体结合的抗体表位 ;电镜下可观察到gag蛋白形成的颗粒。rVV -RL4 2 gag免疫小鼠后能诱导产生高滴度的特异性抗体和CTL ,抗体具一定的中和活性 ,且检测到与C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。这些结果表明 ,rVV -RL4 2 gag具有良好的免疫原性 ,可进一步构建表达HIVB′亚型中国流行株RL4 2 的gag蛋白的重组痘苗病毒作为候选疫苗。

关键词：人免疫缺陷病毒I型 HIV-1 重组痘苗病毒 gag蛋白细胞毒性T淋巴细胞抗性中和抗性免疫效果

我国HIV-1B'亚型毒株gag蛋白抗原表位变异研究

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中华传染病杂志 2005年第6期23卷 380-381页

作者：关琪邢辉黄海龙洪坤学张卓然邵一鸣沈阳医学院奉天医院检验科 110021 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒免疫室大连医科大学基础医学院微生物学教研室

在HIV-1感染者体内针对病毒病原体产生特异性免疫应答的过程中,病毒自身所携带的抗原表位是机体免疫系统直接作用的靶点,对激活机体免疫应答起着至关重要的作用.但HIV的抗原表位不是一成不变的,而是在宿主免疫压力下不断地发生着各种各... 详细信息

在HIV-1感染者体内针对病毒病原体产生特异性免疫应答的过程中,病毒自身所携带的抗原表位是机体免疫系统直接作用的靶点,对激活机体免疫应答起着至关重要的作用.但HIV的抗原表位不是一成不变的,而是在宿主免疫压力下不断地发生着各种各样的变化,这种变化正是HIV-1病毒逃避机体免疫监视的重要机制之一.我们试从抗原表位的角度对我国HIV-1 B'亚型毒株gag基因的变异进行分析,以期获得的抗原表位变化的数据资料可以为我国HIV-1 B'亚型疫苗的研制提供指导.

关键词： HIV-1感染者抗原表位亚型毒株变异研究 gag蛋白 HIV-1病毒机体免疫系统特异性免疫应答机体免疫应答 gag基因

绵羊肺腺瘤病毒gag蛋白的生物信息学分析及抗原表位预测

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中国病原生物学杂志 2021年第5期16卷 502-506页

作者：王宇李建云武健刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农业基因组大数据工程研究中心内蒙古自治区综合疾病预防控制中心

目的探讨绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)gag蛋白的组成结构及生物学功能。方法从NCBI数据库中获取JSRV的gag基因序列及其编码蛋白的氨基酸序列,利用ExPASy,ProtScale,Signal 5.0,TMHMM Server,NetPhos Server,NetNGlyc,SOPMA,Prediction,Swiss-Model和DNAStar等生物信息学软件分析gag的氨基酸序列组成、理化性质、亲疏水性、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、糖基化位点、蛋白功能区域、二、三级结构和B、T细胞抗原表位等。结果gag蛋白是由611个氨基酸构成富含脯氨酸的亲水蛋白,分子式为C3024H4708N834O898S27,相对分子质量为67.981×103,理论等电点为7.14;二级结构以无规则卷曲居多,占48.77%;无信号肽且无跨膜区,存在33个磷酸化位点,1个糖基化位点,含有2个超级家族保守结构域和1个锌指结构。预测该蛋白含有17个B细胞优势抗原表位和25个优势CTL表位。结论生物信息学分析JSRV gag蛋白属于亲水蛋白,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性,可作为潜在抗原用于诊断方法的建立与疫苗的研制。

关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒 gag蛋白抗原表位生物信息学

中国人类免疫缺陷病毒-1B亚型gag蛋白特异性T淋巴细胞的免疫应答

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中华传染病杂志 2011年第9期39卷 558-561页

作者：李伟华闫惠平杨虹冰张海萍周冬燕孔祥莎张欣首都医科大学附属北京佑安医院感染与免疫研究中心 100069 英国牛津大学分子医学研究所人类免疫研究中心

大量研究证明，细胞免疫特别是HIV特异性CTL在控制HIV感染中发挥关键作用。HIV-1特异性CTL应答不仅由HIV-1特异性抗原蛋白结构决定，同时也受到特异性人类白细胞抗原（HLA）I类抗原的限制。不同人群HLA—I类基因型分布频率不同，决定了... 详细信息

大量研究证明，细胞免疫特别是HIV特异性CTL在控制HIV感染中发挥关键作用。HIV-1特异性CTL应答不仅由HIV-1特异性抗原蛋白结构决定，同时也受到特异性人类白细胞抗原（HLA）I类抗原的限制。不同人群HLA—I类基因型分布频率不同，决定了不同人群HIV-1特异性CTL应答模式的不同。

关键词：特异性T淋巴细胞人类免疫缺陷病毒-1 gag蛋白免疫应答 B亚型特异性CTL HIV-1 人类白细胞抗原

HIV-1长末端重复序列对重组痘苗病毒表达gag蛋白的影响

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中国病毒学 1998年第3期13卷 199-207页

作者：毛春生金宁一佟明华郭军庆王秀清郭志儒殷震解放军农牧大学研究所解放军基因工程实验室

将系列缺失的ＨＩＶ１长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘苗病毒载体中，经同源重组和血球吸附试验，成功地构建了６株重组痘苗病毒。免疫印迹和免疫酶试验检测均表明，６株重组病毒的Ｇａｇ蛋白表达量因ＬＴＲ不同... 详细信息

将系列缺失的ＨＩＶ１长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘苗病毒载体中，经同源重组和血球吸附试验，成功地构建了６株重组痘苗病毒。免疫印迹和免疫酶试验检测均表明，６株重组病毒的Ｇａｇ蛋白表达量因ＬＴＲ不同而有明显差异，表明ＨＩＶ１的ＬＴＲ及其下游基因置于痘病毒启动子控制下，在痘苗病毒中表达时有下述特点：（１）不同的痘苗病毒启动子与全长ＬＴＲ相互作用，对ｇａｇ基因表达有显著不同的调控效果；（２）ＮＲ序列对Ｇａｇ蛋白表达没有明显影响；（３）ＥＮ序列不能被重组痘苗病毒表达系统识别；（４）ＴＡＲ序列可提高Ｇａｇ蛋白的表达量；（５）Ｕ５区及下游非翻译序列不影响Ｇａｇ蛋白的表达。

关键词： HIV-1 LTR gag蛋白表达调控痘苗病毒

梅迪-维斯纳病毒gag蛋白原核表达与间接ELISA检测方法的建立

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动物医学进展 2020年第5期41卷 25-28页

作者：张彦红肖盛中李岩杨艳姜蒙蒙蒙亚琦盛金良石河子大学新疆石河子832000

gag蛋白是梅迪-维斯纳病毒(MVV)的主要结构蛋白,也是诊断梅迪-维斯纳病的主要靶蛋白。为建立MVV抗体间接ELISA检测方法,利用大肠埃希菌将含gag基因的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,最终获得高效表达的gag蛋白,进一步进行ELISA条件的... 详细信息

gag蛋白是梅迪-维斯纳病毒(MVV)的主要结构蛋白,也是诊断梅迪-维斯纳病的主要靶蛋白。为建立MVV抗体间接ELISA检测方法,利用大肠埃希菌将含gag基因的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,最终获得高效表达的gag蛋白,进一步进行ELISA条件的优化。所建立的方法敏感性试验显示在阳性血清1∶3 200倍稀释时仍能检出,其组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对162份临床血清样品进行检测,同时用购自法国IDVET公司的间接ELISA进行比较,符合率达到89.65%。应用该方法对新疆地区1个种羊场和1个育肥羊场的294份羊血清样品进行了检测,结果显示MVV抗体阳性率分别为10.5%和1.77%,表明种羊场中MVV感染率高于育肥羊场,该研究结果可为MVV抗体检测试剂盒的开发提供支持。

关键词：梅迪-维斯纳病毒 gag蛋白间接酶联免疫吸附试验

山羊地方性鼻内肿瘤病毒gag蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

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中国兽医学报 2017年第12期37卷 2300-2303页

作者：何亚鹏张琪王景周曼付明哲许信刚西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为获得纯化的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV)gag蛋白和抗gag蛋白的多克隆抗体,根据GenBank已登录的ENTVgag基因序列,设计合成1对特异性引物,应用PCP扩增gag基因并连接于原核表达载体pET-28a(+)中,... 详细信息

为获得纯化的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV)gag蛋白和抗gag蛋白的多克隆抗体,根据GenBank已登录的ENTVgag基因序列,设计合成1对特异性引物,应用PCP扩增gag基因并连接于原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-gag,经鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。重组菌经IPTG诱导后成功表达相对分子质量约为69 000的重组蛋白,重组蛋白经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后免疫小鼠制备多克隆抗体。Western blot试验表明,重组蛋白能与制得的多克隆抗体反应,而与正常小鼠血清和山羊地方性鼻内肿瘤患羊血清不反应。本试验成功获得了纯化的ENTV gag蛋白和小鼠抗gag蛋白的多克隆抗体,为进一步研究gag蛋白在ENTV致病过程中的作用提供了材料。

关键词：山羊地方性鼻内肿瘤病毒 gag蛋白原核表达多克隆抗体

HIV-1 gag蛋白在重组痘苗病毒中的高效表达及其特性分析

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中国生物制品学杂志 1998年第2期11卷 72-75页

作者：毛春生金宁一佟明华常国权郭军庆杨盛华邹啸环殷震军事医学科学院微生物流行病学研究所北京100071 解放军农牧大学研究所解放军基因工程实验室长春130062

在构建3株人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV－1）gag基因重组痘苗病毒的基础上，实现了gag蛋白的高效表达，3株重组病毒在感染细胞中表达量分别为14．7、6．0和4.5μg／106细胞／20h，接近杆状病毒的表达水平。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子（... 详细信息

在构建3株人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV－1）gag基因重组痘苗病毒的基础上，实现了gag蛋白的高效表达，3株重组病毒在感染细胞中表达量分别为14．7、6．0和4.5μg／106细胞／20h，接近杆状病毒的表达水平。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子（VLP），并可诱导小鼠产生抗HIV抗体。

关键词： HIV-1 gag蛋白重组痘苗病毒生物学特性