山羊地方性鼻内肿瘤病毒gag蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

作     者：何亚鹏 张琪 王景 周曼 付明哲 许信刚 HE Ya-peng;ZHANG Qi;WANG Jing;ZHOU Man;FU Ming-zhe;XU Xin-gang

作者机构：西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第37卷第12期

页      面：2300-2303页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：陕西省农业科技创新与攻关资助项目(2016NY-092) 陕西省重点产业创新链计划资助项目(2016KTZDNY02-06) 西北农林科技大学大学生创新创业训练计划资助项目(201610712019) 

主　　题：山羊地方性鼻内肿瘤病毒 gag蛋白 原核表达 多克隆抗体 

摘      要：为获得纯化的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV)gag蛋白和抗gag蛋白的多克隆抗体,根据GenBank已登录的ENTVgag基因序列,设计合成1对特异性引物,应用PCP扩增gag基因并连接于原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-gag,经鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。重组菌经IPTG诱导后成功表达相对分子质量约为69 000的重组蛋白,重组蛋白经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后免疫小鼠制备多克隆抗体。Western blot试验表明,重组蛋白能与制得的多克隆抗体反应,而与正常小鼠血清和山羊地方性鼻内肿瘤患羊血清不反应。本试验成功获得了纯化的ENTV gag蛋白和小鼠抗gag蛋白的多克隆抗体,为进一步研究gag蛋白在ENTV致病过程中的作用提供了材料。