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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2002年第4期22卷 276-278页

作者：叶嗣颖敖杰男彭颖岳海峰廖芳胡国平徐杨张正茂 DepartmentofPathogenicOrganisms MedicalCollegeofJinanUniversity CenterofCellularandMolecularBiology DepartmentofMicrobiology&InfectiousDiseases

To setup a method of amplification for the whole cag a gene of H elicobacter pylori and its fingerprinting by restriction fragm entlength polym orphism(RFL P) ,nested PCR was employed in com bination with TD- PCR to am plify the gene and Eco RΙ and Hind were used to generate the RFL P *** DNA fragm ents from 13of2 0 samples were successfully amplified and the relevant RFL P fingerprintings were *** is concluded thatthe m ethod can be used to amplify the whole cag a gene and cag a gene has apparent diversity of RFL P profile.

关键词： H elicobacter pylori cag a PCR RFL P

cag a阳性的H pylori菌株与过早发生MI有明显关联

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天津医药 2001年第5期29卷 261-261页

M Gunn等对342例急性心肌梗死患者和214例临床无冠心病的人群对照者测定血清cag a与幽门螺旋杆菌(H pylori)情况,进行对照研究。结果:38.0％病例与30.8％对照者cag a血清阳性(优势比1.38,95％置信区间(CI 0.94～2.01,P=0.08)。<65岁者(... 详细信息

M Gunn等对342例急性心肌梗死患者和214例临床无冠心病的人群对照者测定血清cag a与幽门螺旋杆菌(H pylori)情况,进行对照研究。结果:38.0％病例与30.8％对照者cag a血清阳性(优势比1.38,95％置信区间(CI 0.94～2.01,P=0.08)。cag a血清阳性有心肌梗死(MI)危险性增加1.80倍(95％ CI 1.07～3.03,P=0.02),

关键词：阳性急性心肌梗死患者 H pylori cag a MI 冠心病冠状动脉病置信区间置信距

辅助T细胞因子和cagA在幽门螺杆菌致病与免疫中的作用

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辅助T细胞因子和CagA在幽门螺杆菌致病与免疫中的作用

作者：林焕建第一军医大学

学位级别：硕士

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染了世界上超过50％的成年人，在亚太等发展中地区，感染率更高。但仅有一少部分发展成为消化性溃疡或胃癌等严重病变。出现这种后果是由细菌和宿主两方面原因决定的。细菌方面，cagA致病岛等毒... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染了世界上超过50％的成年人，在亚太等发展中地区，感染率更高。但仅有一少部分发展成为消化性溃疡或胃癌等严重病变。出现这种后果是由细菌和宿主两方面原因决定的。细菌方面，cagA致病岛等毒素因子的作用研究较多，而宿主因素中免疫反应的作用日益引起重视。现有的研究证实细胞免疫尤其是CD4T(辅助T细胞)细胞免疫在幽门螺杆菌的免疫致病与防治方面扮演了重要角色。有促进胃粘膜局部炎症，加剧胃上皮细胞受损的可能，而其中的某些亚型则在免疫动物模型中具备保护作用。本研究调查了Hp在体内及体外胃粘膜局部的T细胞亚群与功能亚型的选择作用，并在体外验证了Th1／Th2细胞因子对胃上皮细胞代谢与生物学活性的调节作用。细菌方面，Hp细胞毒素相关基因蛋白(Cytotoxin associated gene A，cagA)是较早被确定的细菌毒性蛋白之一，与一组结构和功能密切相关的基因簇—cag致病岛(Pathogenicity Island，PAI)关系密切。为确切认识cagPAI在Hp致病与中的作用，本研究应用三对cagPAI阳性野生菌株与其各自cagPAI基因“敲除”(Knockout)的同源突变株(Isogenic mutant)，比较了其在粘附、致胃上皮细胞凋亡及免疫保护等诸方面的功能差异。研究发现： 1．幽门螺杆菌对T细胞亚群选择作用通过流式细胞术比较Hp阳性与阴性者患者胃粘膜T细胞表面与细胞内分子，发现该菌感染可特异诱导CD4T细胞亚群。体外研究则发现，活菌、超声粉碎物及重组尿素酶均具有类似作用。 2．幽门螺杆菌对T细胞表型的选择作用体内与体外研究均发现Hp活菌、超声粉碎物及重组尿素酶均可诱导胃T细胞分泌IL斗(ThZ)及IFN＊仰lX但相对而畜，对I州十的刺激作用更强。 ***细胞因子对幽门螺杆菌致病的影响 hl细胞因子 IFNq可诱导胃上皮细胞表达 MHC 11类分于，并进而增加Hp对胃上皮细胞的粘附。IFN＊本身即可诱导胃上皮细胞凋亡，并可促进Hp诱导的胃上皮凋亡。 ***细胞因子对幽门螺杆菌致病的影响流式细胞术发现胃上皮细胞表面存在＊细胞因子 ILIO的受体，因而可能接受该因子调节。体外研究发现与 I则1相反，IL＋可抑制胃上皮细胞的 MHC 11类分子表达，并进而抑制Hp对胃上皮细胞的粘附，并可部分抬抗 I卯－Y和 Hp的诱导胃上皮凋亡能力。 i cagPAI对 HP粘附的作用通过流式细胞术比较发现，三对cagPAI阳性与突变株对胃上皮细胞的粘附能力无显著差异。 6·cagPAI对HP致凋亡作用的影响通过ELISA和凝胶电泳两种方法证实，cagPAI阳性与突变株致胃上皮细胞凋亡的能力无无显著差异。 7·CapPAI在Hp免疫防治中的作用与粘膜佐剂霍乱毒素oT)共同兔疫小鼠后接受Hp悉尼株攻击，评价了cagPAI阳性株26695及其同源突变株8J对小鼠感染的预防作用，发现两者均可不同程度地预防Hp感染，但两组之间无明显差异。小鼠脾细胞增殖试验证实，与CT对照组相比，两种抗原均可特异诱导T细胞增殖，而突变株的作用甚至强于野生株。上述研究表明，Thl细胞介导了幽门螺杆菌致病的胃粘膜炎症过程，而ThZ细胞与之作用相反。cagA致病岛可能不宜作为Hp的致病标志， 2 其编码基因产物用于Hp疫苗保护性抗原的前景也不乐观。

关键词： T细胞因子 cag a 幽门螺杆菌

幽门螺杆菌感染对胃黏膜NADPH氧化酶DUOX2和NOX2表达的影响

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幽门螺杆菌感染对胃黏膜NADPH氧化酶DUOX2和NOX2表达的影响

作者：李宏谦河南科技大学

学位级别：硕士

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃黏膜DUOX2和NOX2基因和蛋白表达的影响,进一步揭示胃疾病的发病机理。方法:收集2013年8月至2014年2月有上消化道症状到河南科技大学第一附属医院做胃镜检查的患者胃黏膜组织标本200... 详细信息

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃黏膜DUOX2和NOX2基因和蛋白表达的影响,进一步揭示胃疾病的发病机理。方法:收集2013年8月至2014年2月有上消化道症状到河南科技大学第一附属医院做胃镜检查的患者胃黏膜组织标本200例,其中男性113例,女性87例,年龄16-86岁,平均52.3岁。采用快速尿素酶试验检测Hp感染情况;酶联免疫吸附实验检测Hp阳性患者血清中cag a和Vac A抗体的表达情况;RT-PCR检测胃黏膜DUOX2和NOX2 m RNA的表达情况;免疫组化和Western Blot检测胃黏膜DUOX2和NOX2蛋白的表达情况。结果:1.快速尿素酶试验结果显示Hp阳性者111例(男69例,女42例),Hp阴性者89例(男44例,女45例)。***-PCR结果显示DUOX2 m RNA在Hp阳性患者胃黏膜组织中的表达明显低于Hp阴性患者(P=0.02);Hp毒力强(cag a+/Vac A+)的菌株胃黏膜DUOX2 m RNA表达量低,Hp毒力弱(cag a-/Vac A-)的菌株胃黏膜DUOX2m RNA表达量高(均Pcag a-/Vac A-组相比,cag a+或Vac A+组DUOX2蛋白表达降低,cag a+/Vac A+组DUOX2蛋白表达最低(均P<0.05)。NOX2表达于胃黏膜炎性细胞内,Hp(+)组NOX2蛋白的表达较Hp(-)组升高(P<0.05);在感染不同毒力的Hp的组别之间NOX2蛋白表达无差别。*** Blot结果显示胃黏膜组织DUOX2蛋白在Hp(+)组的表达量低于Hp(-)组,后者是前者的2.2倍。结论:***感染后胃黏膜DUOX2表达降低,NOX2表达升高,提示Hp感染对胃黏膜DUOX2和NOX2的表达均具有一定的影响作用。***感染后抑制了DUOX2的表达,且毒力越强的菌株对DUOX2表达的抑制作用越强;相反,Hp的感染促进了胃黏膜NOX2的表达,但NOX2表达量的多少与Hp的毒力无关。3.胃黏膜DUOX2和NOX2在Hp感染所致胃疾病的发生发展中起到一定的作用。

关键词：幽门螺杆菌 DUOX2 NOX2 胃黏膜 cag a Vac A

FTO促进幽门螺杆菌感染胃上皮细胞恶性转化的作用及机制

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FTO促进幽门螺杆菌感染胃上皮细胞恶性转化的作用及机制

作者：成莎中南大学

学位级别：硕士

背景和目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)持续性刺激诱导的人正常胃黏膜上皮恶性转化是胃癌发生发展的重要始动环节。然而,***在胃黏膜炎症反应至肿瘤发生这一持续发展过程中的发病机制尚不明确。6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosi... 详细信息

背景和目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)持续性刺激诱导的人正常胃黏膜上皮恶性转化是胃癌发生发展的重要始动环节。然而,***在胃黏膜炎症反应至肿瘤发生这一持续发展过程中的发病机制尚不明确。6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰是真核生物细胞中最常见、最丰富、具有动态可逆特性的RNA修饰,在调节前体m RNA成熟、翻译和降解中起着关键作用。脂肪和肥胖相关蛋白(The fat mass and obesity-associated protein,FTO),是已知的去甲基化酶之一,参与了胃癌的发生发展。但FTO在***慢性感染导致胃黏膜上皮恶性转化过程中的具体机制尚不明确。本研究旨在探索细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxin-associated gene A,cag a)阳性***(cag ***)慢性感染后FTO介导的m6A修饰对人胃上皮细胞(GES-1)的作用及机制,为胃黏膜上皮恶性转化的发病机制和胃癌防治提供新的思路和靶点。方法:(1)分别用cag a和cag ***与GES-1细胞共培养,构建***急性和慢性感染细胞模型,通过CCK-8、Western Blot、流式分析、细胞集落形成实验、Ed U实验、活/死细胞双重染色实验、Transwell实验和划痕实验,观察GES-1细胞活力、凋亡、增殖和迁移能力;(2)采用Western Blot和q RT-PCR检测对照组、cag a和cag ***慢性感染的GES-1细胞中FTO和胃癌干细胞分子标记物CD44的表达水平;通过慢病毒和质粒转染构建FTO敲低和过表达的GES-1细胞株进一步验证;结合生物信息学分析预测CD44RNA m6A修饰位点,通过甲基化RNA免疫共沉淀实验(Me-RIP)及q RT-PCR检测***慢性感染组和FTO沉默后CD44 RNA m6A水平;(3)使用BALB/cnude裸鼠进行皮下成瘤实验,通过观察肿瘤体积和裸鼠重量比较不同***慢性感染的GES-1细胞在裸鼠体内的成瘤能力;(4)生物信息学分析FTO在胃癌中的表达和预后价值;收集胃癌组织和癌旁组织验证FTO和CD44的表达。结果:(1)cag ***急性感染时,随着***感染浓度的升高,GES-1细胞凋亡增加,活力下降,但在cag ***慢性感染时GES-1细胞出现恶性转化,表现为细胞蜂鸟表型、凋亡减少、增殖、迁移能力增强,CD44表达增加;(2)cag ***慢性感染后GES-1细胞FTO表达增高,抑制FTO表达可以逆转GES-1细胞的恶性转化;Western Blot和q RT-PCR结果提示CD44的表达水平与FTO的表达呈正相关;当FTO表达升高时,CD44 RNA的m6A修饰减少,而沉默FTO后,CD44 RNA的m6A修饰增加;(3)对照组和cag ***慢性感染组的GES-1细胞不易成瘤,而cag ***感染组的GES-1细胞成瘤性高,瘤体积大,当沉默FTO后GES-1成瘤能力明显下降。(4)FTO和CD44在胃癌组织中高表达,FTO与胃癌不良预后相关。结论:(1)cag ***慢性感染上调FTO的表达参与胃黏膜上皮恶性转化;(2)FTO可以调控CD44 m6A修饰水平。图14幅,表14个,参考文献73篇

关键词：幽门螺杆菌 cag a m6A FTO CD44 恶性转化

洛阳地区不同基因型HP感染的临床流行特征及与胃肠疾病关系

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洛阳地区不同基因型HP感染的临床流行特征及与胃肠疾病关系

作者：戚艳丽河南科技大学

学位级别：硕士

目的:1.探讨洛阳地区幽门螺杆菌（***）的临床感染率。2.探讨洛阳地区***感染的优势基因型。3.探讨洛阳地区不同地域、不同年龄、不同性别***感染的优势基因型的差别。4.探讨洛阳地区***感染的基因型与胃肠疾病的关系。方法:收集于2013... 详细信息

目的:1.探讨洛阳地区幽门螺杆菌（***）的临床感染率。2.探讨洛阳地区***感染的优势基因型。3.探讨洛阳地区不同地域、不同年龄、不同性别***感染的优势基因型的差别。4.探讨洛阳地区***感染的基因型与胃肠疾病的关系。方法:收集于2013年9月至2014年4月到河南科技大学第一附属医院就诊洛阳地区胃肠病患者3495例,用14C尿素呼气试验检测***,将14C尿素呼气试验检测阳性,胃镜及病理诊断为慢性胃炎、消化性溃疡、十二指肠球炎、胃癌、胃息肉、反流性食管炎等546例患者（男性294例,女性252例,年龄范围10—79岁）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）,检测细胞毒素相关基因A蛋白（Cytotoxin-associated gene A,cag a）和空泡毒素相关蛋白A（vacuolating cytotoxin Vac A）。再将Vac A检测阳性者进一步检测Vac A亚型:Vac A-s1a、Vac A-s1b、Vac A-s2、Vac A-m1、Vac A-m2。然后进行统计学处理。结果:1.洛阳地区3495例胃肠病患者***的感染率为47.01%（1643/3495）;市区41.66%（352/780）和县区48.54%（1318/2715）,市区略低于县区,P=0.04;各县区之间***感染率两两相比P值均大于0.05,无显著性差异。2.洛阳地区546例***阳性胃肠病患者中,cag a阳性率35.16%（192/546）;Vac A阳性率48.35%（264/546）,两者都阳性27.83%（152/546）,单纯cag a阳性7.32%（40/546）,单纯Vac A阳性20.51%（112/546）。264例Vac A阳性的胃肠病患者中Vac A亚型的阳性率分别为sla:76.51%（202/264）、slb:20.45%（54/264）、s2:0.75%（2/264）、ml:21.96%（58/264）、m2:72.24%（196/264）,s区未分型6例,m区未分型10例,s区以sla:76.51%为最高;m区以m2:72.24%为最高;Vac A基因亚型嵌合体的阳性率分别为s1a/m1:15.9%（42/264）、s1a/m2:50.00%（132/264）、s1b/m1:3.03%（8/264）、s1b/m2:13.63%（36/264）,以sla/m2占优势50.00%（132/264）未发现s2嵌合体。3.洛阳地区不同地域之间相比:市区与县区、各县区之间的cag a阳性率、Vac A阳性率、Vac A亚型sla、slb、s2、ml、m2阳性率、Vac A基因亚型嵌合体的阳性率均无显著性差异,P值均大于0.05。不同年龄段之间相比:cag a阳性率、Vac A阳性率、Vac A亚型sla、slb、s2、ml、m2阳性率、Vac A基因亚型嵌合体的阳性率均无显著性差异,P值均大于0.05。不同性别之间相比:cag a阳性率、Vac A阳性率、Vac A亚型sla、slb、s2、ml、m2阳性率、Vac A基因亚型嵌合体的阳性率均无显著性差异,P值均大于0.05。4.洛阳地区不同胃肠疾病之间相比:cag a阳性率、Vac A阳性率、Vac A亚型sla、slb、s2、ml、m2阳性率、Vac A基因亚型嵌合体的阳性率亦均无显著性差异。结论:1.洛阳地区***的临床感染率为47.01%;市区略低于县区,不同县区之间差异无显著性。2.洛阳地区胃肠病患者感染的***中,Vac A阳性者为48.35%、cag a阳性者为35.16%;两者均阳性者为27.83%。Vac A亚型中s区以sla为最高,m区以m2为最高;亚型嵌合体以s1a/m2为最高。提示洛阳地区胃肠病患者感染的***,以Vac A sla/m2阳性为主要基因型,且多数以Vac A、cag a同阳性和Vac A sla/m2嵌合体的形式存在。3.洛阳地区感染的***,其cag a、Vac A及Vac A各基因亚型的阳性率,在洛阳不同地区、不同年龄段、不同性别之间分布无显著性差异。4.洛阳地区感染的***,其cag a、Vac A及Vac A各基因亚型的阳性率,在不同胃肠疾病之间分布无显著性差异。5.洛阳地区感染的***基因型,多数致病性较弱。

关键词：幽门螺杆菌 cag a Vac A 临床流行特征胃肠疾病