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脂多糖LPS对糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞RBD-2表达的影响

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西部医学 2011年第9期23卷 1629-1633页

作者：张伟义朱涛四川大学华西医院麻醉科四川成都610041

目的以肺泡巨噬细胞为研究对象,观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下RBD-2(大鼠β防御素-2,Rat-βdefensins-2)在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞表达的变化。方法以健康雄性SD大鼠制备糖尿病模型。32只大鼠随机分为四组:正常... 详细信息

目的以肺泡巨噬细胞为研究对象,观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下RBD-2(大鼠β防御素-2,Rat-βdefensins-2)在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞表达的变化。方法以健康雄性SD大鼠制备糖尿病模型。32只大鼠随机分为四组:正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、LPS组(C组)和糖尿病+LPS组(D组),每组均为8只。分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,通过RT-PCR以及Western blotting分别检测RBD-2的RNA及蛋白质表达水平,同时通过Real Time PCR检测大鼠肺泡巨噬细胞的TLR-2以及TLR-4的mRNA的表达。结果大鼠糖尿病模型构建成功。RT-PCR以及Western blotting结果显示,与正常组相比,糖尿病组、正常组+LPS组、糖尿病+脂多糖组的RBD-2 mRNA以及蛋白质表达水平依次增加,差异显著(P<0.05)。Real Time PCR结果显示,与正常组相比,糖尿病组、正常组+LPS组、糖尿病+脂多糖组的TLR-4 mRNA的表达水平依次增加,差异显著(P<0.05),而TLR-2差异则不明显。结论 LPS刺激后糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞RBD-2表达增加较糖尿病组更为显著,说明RBD-2变化对于增强糖尿病机体的非特异性免疫能力具有明显的帮助,同时糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞RBD-2表达较正常组增高,说明处于糖尿病时期的大鼠机体处于炎症状态,并且这一通路的表达受体主要是TLR-4受体。

关键词：大鼠糖尿病 RBD-2 RT-PCR Western blotting

shRNA干扰肝癌细胞Kir6.2基因表达对细胞内钙离子浓度的影响

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西部医学 2008年第3期20卷 488-490,498页

作者：苏晓通梁平丁生才李靖杨彤翰李洪艳第三军医大学新桥医院肝胆外科重庆400037

目的研究shRNA干扰肝癌SK-Hep1细胞Kir6.2基因表达及对细胞内钙离子浓度的影响。方法脂质体转染法将shRNA质粒载体pGenesil-3共转染SK-Hep1细胞,实验分为SK组(未转染)、HK组(阴性对照)、K1组(干扰序列1)和K2组(干扰序列2)。经G418筛选... 详细信息

目的研究shRNA干扰肝癌SK-Hep1细胞Kir6.2基因表达及对细胞内钙离子浓度的影响。方法脂质体转染法将shRNA质粒载体pGenesil-3共转染SK-Hep1细胞,实验分为SK组(未转染)、HK组(阴性对照)、K1组(干扰序列1)和K2组(干扰序列2)。经G418筛选出单克隆培养,RT-PCR和Western blotting分别检测Kir6.2 mRNA和蛋白的表达,筛选出抑制Kir6.2表达的有效序列。Fluo4-AM孵育各组细胞,流式细胞仪检测荧光强度。结果RT-PCR结果显示K1、K2组Kir6.2 mRNA的表达与HK、SK组比较均降低。K1、K2组Kir6.2蛋白的量与HK、SK组比较均降低。K1和K2组钙离子浓度远远低于SK和HK组。结论shRNA抑制了肝癌细胞Kir6.2基因的表达,钙离子浓度显著降低。

关键词： RNA干扰肝细胞癌 RT-PCR Western blotting 钙离子浓度

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72基因克隆、蛋白原核表达和抗体制备

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江苏农业科学 2019年第14期47卷 62-65页

作者：李双向涛周海峰吴霆顾伟王文孟庆国南京师范大学生命科学学院/江苏省水生甲壳动物病害重点实验室江苏南京210023 江苏省宝应县水生动物疫病预防控制中心江苏宝应225800

异育银鲫作为我国重要的淡水经济鱼类,其鳃出血病为主要病害,并造成重大经济损失,该病病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus Ⅱ,CyHV-2).目前,研究主要在该病的检测和病理方面,对于免疫学检测方面研究较少.本研究根据CyHV-2ORF72... 详细信息

异育银鲫作为我国重要的淡水经济鱼类,其鳃出血病为主要病害,并造成重大经济损失,该病病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus Ⅱ,CyHV-2).目前,研究主要在该病的检测和病理方面,对于免疫学检测方面研究较少.本研究根据CyHV-2ORF72基因序列设计了1对特异性引物,利用患病异育银鲫肾脏DNA作为模板,通过PCR扩增得到CyHV-2ORF72基因全长,该基因序列全长为1113bp,可编码370个氨基酸的蛋白.该基因与pET-28a表达载体连接构建重组原核表达载体pET-ORF72转入大肠杆菌中,经IPTG诱导表达得到了分子量约为45ku的重组蛋白,与预测的蛋白大小基本一致.将纯化的重组蛋白皮下多点注射免疫新西兰大耳兔制备了ORF72的多克隆抗体,经Western blotting检测抗体能与病毒粗提液有良好反应,特异性较好,本结果可为下一步建立疫苗和免疫检测方法奠定基础.

关键词：异育银鲫鲤疱疹病毒Ⅱ型 ORF72 多克隆抗体 Western blotting

套袋‘红富士’苹果果实山梨醇脱氢酶的活性变化及其表达

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中国农学通报 2012年第25期28卷 157-161页

作者：袁梅叶成荣刘更森刘成连原永兵王永章青岛农业大学园林园艺学院山东青岛266109

以‘红富士’苹果为试材,通过酶活性测定和Western印迹技术,研究了套袋‘红富士’苹果果实山梨醇脱氢酶(SDH)的活性及其表达变化。结果表明,在整个发育过程中,套袋‘红富士’苹果果实的山梨醇含量及SDH活性的变化动态与对照果实基本一... 详细信息

以‘红富士’苹果为试材,通过酶活性测定和Western印迹技术,研究了套袋‘红富士’苹果果实山梨醇脱氢酶(SDH)的活性及其表达变化。结果表明,在整个发育过程中,套袋‘红富士’苹果果实的山梨醇含量及SDH活性的变化动态与对照果实基本一致。与对照相比,套袋苹果果实的SDH活性较低,山梨醇含量较高,由此表明套袋影响苹果果实山梨醇代谢。Western blotting结果显示,苹果果实SDH的亚基构成为40kDa,随着苹果果实的发育,SDH的免疫信号强度逐渐增强。在同一取样时期,套袋苹果果实SDH的免疫信号强度与对照果实相比差异不显著,由此推断,SDH的活性变化可能存在翻译后水平上的调控。

关键词：苹果果实山梨醇脱氢酶酶活性 Western blotting

尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化

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安徽农学通报 2020年第5期26卷 6-9页

作者：牛继敏牛金中黄瑜刘鑫潮简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用p... 详细信息

Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用primer5.0设计1对引物,构建尼罗罗非鱼Galectin-8基因的原核表达载体,将重组后的质粒pGEX-4T-1-Galectin-8导入大肠杆菌中,通过PCR、连接、转化等,进行原核表达。对影响因素进行条件优化,使用优化后的浓度、时间、温度条件表达Galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。Western blot检测纯化后的重组蛋白,结果显示,重组蛋白可以很好地结合GST-Tag标签的单克隆抗体,实验进一步证明罗非鱼Galectin-8的重组蛋白被成功表达,为罗非鱼Galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。

关键词：尼罗罗非鱼 Galectin-8 原核表达 Western blotting 条件优化

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eNOS与蛛网膜下腔出血后血管痉挛的关系

eNOS与蛛网膜下腔出血后血管痉挛的关系

Wnt7a和孕酮受体在人工受精奶牛受孕前后表达规律研究

2011中华医学会神经外科学学术会议

作者：王灯亮康德智张元隆林章雅林元相游鸿海福建医科大学附属第一医院神经外科

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后不同时间点基底动脉表达情况及其与脑血管痉挛的关系。方法新西兰大白兔72只,随机分成2组:①对照组(12只);②SAH组,按时间随机分为术后第1;3;5;7;10天... 详细信息

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后不同时间点基底动脉表达情况及其与脑血管痉挛的关系。方法新西兰大白兔72只,随机分成2组:①对照组(12只);②SAH组,按时间随机分为术后第1;3;5;7;10天5个亚组,每组12只。采用枕大池二次注血法建立兔SAH模型。二次注血后在各个时间点采用灌流固定法处死动物,测定基底动脉横截面积判断有无脑血管痉挛。应用蛋白质印迹(Western blotting)分别观察eNOS在基底动脉中的表达情况。结果枕大池二次注血法成功制作SAH模型,基底动脉发生了不同程度的血管痉挛。

关键词：蛛网膜下腔出血 eNOS Westen blotting 血管痉挛

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国农学通报 2019年第24期35卷 138-143页

作者：谢云浩王彦平杨佐君郭勇王相国倪和民付博凡麻柱北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京奶牛中心北京100020

旨在筛选奶牛早期妊娠诊断标志因子,提高奶牛养殖经济效益。在北京某牛场选10头荷斯坦奶牛,在输精后第1、4、7、10、13、16、19天取血,通过荧光定量PCR和western blotting方法分析Wnt7a和PR的表达趋势和变化规律。通过直检对10头荷斯坦... 详细信息

旨在筛选奶牛早期妊娠诊断标志因子,提高奶牛养殖经济效益。在北京某牛场选10头荷斯坦奶牛,在输精后第1、4、7、10、13、16、19天取血,通过荧光定量PCR和western blotting方法分析Wnt7a和PR的表达趋势和变化规律。通过直检对10头荷斯坦奶牛进行怀孕检测,其中有7头受孕3头未受孕。通过检测受孕和未孕的奶牛血液中Wnt7a基因和PR基因的表达量,发现Wnt7a基因在受孕奶牛血液中的表达量均高于未孕奶牛,特别是输精后第7天受孕奶牛的表达量显著增高,Wnt7a的蛋白质水平表达呈现出类似趋势;PR基因在全部10头奶牛中呈现出从输精后第一天表达开始降低,并一直维持一个很低的表达状态。Wnt7a具有作为奶牛早期妊娠诊断标志因子的潜质,其优势在于将检测窗口提前到输精后的第7天;PR不具有作为标志因子的优势。通过探究影响早期妊娠的相关因子变化规律,可以为孕检的时间窗口提前到早期妊娠阶段提供理论依据。

关键词：荷斯坦奶牛 Wnt7a PR western blotting 受孕孕检

小鼠皮肤切创愈合过程中caspase-3的表达及其活性

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法医学杂志 2007年第3期23卷 161-163页

作者：路斌赵锐官大威王俭于先庆中国医科大学法医学院辽宁沈阳110001 沈阳市公安局沈河分局辽宁沈阳110011 营口市公安局辽宁营口115000

目的探讨皮肤切创愈合过程caspase-3的表达、激活情况及其活性的变化规律。方法建立小鼠皮肤切创模型后,应用比色法、Western blotting技术对小鼠皮肤切创愈合过程中不同时间段caspase-3的表达、激活情况及其活性进行研究。结果伤后不... 详细信息

目的探讨皮肤切创愈合过程caspase-3的表达、激活情况及其活性的变化规律。方法建立小鼠皮肤切创模型后,应用比色法、Western blotting技术对小鼠皮肤切创愈合过程中不同时间段caspase-3的表达、激活情况及其活性进行研究。结果伤后不同时间的caspase-3活性倍增值、caspase-3酶原表达呈现时间规律性变化,并可见caspase-3的激活片段。结论caspase-3可能在皮肤损伤愈合过程中细胞的凋亡中发挥作用,caspase-3可以成为用于皮肤损伤时间推断的指标。

关键词：皮肤损伤凋亡 caspase-3 损伤时间推断 Western blotting 比色法

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盘状结构域受体1在食管鳞癌组织中的表达

重庆医科大学学报 2008年第9期33卷 1115-1117页

作者：李超向小勇陈力沈学远洪斌重庆医科大学附属第一医院心胸外科重庆400016 重庆市第二人民医院心胸外科重庆400020

目的:研究食管鳞癌组织盘状结构域受体1蛋白表达情况。方法:采用Western blotting技术检测40例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、相应正常食管组织中DDR1蛋白的表达,并探讨与食管癌临床病理特征的关系。结果:DDR1蛋白在食管鳞癌组织... 详细信息

目的:研究食管鳞癌组织盘状结构域受体1蛋白表达情况。方法:采用Western blotting技术检测40例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、相应正常食管组织中DDR1蛋白的表达,并探讨与食管癌临床病理特征的关系。结果:DDR1蛋白在食管鳞癌组织中的表达水平(1.201±0.348)显著高于癌旁(0.640±0.323)及正常食管组织(0.551±0.413),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与分化程度和淋巴结转移、侵润深度密切相关(P<0.01)。结论:DDR1和食管癌的发生与发展可能相关,食管癌出现转移时DDR1蛋白表达升高。

关键词： DDR1蛋白食管鳞癌 Western blotting