尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化

作     者：牛继敏 牛金中 黄瑜 刘鑫潮 简纪常 鲁义善 Niu Jimin

作者机构：广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 

出 版 物：《安徽农学通报》 (Anhui Agricultural Science Bulletin)

年 卷 期：2020年第26卷第5期

页      面：6-9页

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

主　　题：尼罗罗非鱼 Galectin-8 原核表达 Western blotting 条件优化 

摘      要：Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用primer5.0设计1对引物,构建尼罗罗非鱼Galectin-8基因的原核表达载体,将重组后的质粒pGEX-4T-1-Galectin-8导入大肠杆菌中,通过PCR、连接、转化等,进行原核表达。对影响因素进行条件优化,使用优化后的浓度、时间、温度条件表达Galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。Western blot检测纯化后的重组蛋白,结果显示,重组蛋白可以很好地结合GST-Tag标签的单克隆抗体,实验进一步证明罗非鱼Galectin-8的重组蛋白被成功表达,为罗非鱼Galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。