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Protein & Cell 2020年第11期11卷 825-845页

作者： Weiwei Jiang Fangfang Cai Huangru Xu Yanyan Lu Jia Chen Jia Liu Nini Cao Xiangyu Zhang Xiao Chen Qitai Huang Hongqin Zhuang Zi-Chun Hua The State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology College of Life SciencesNanjing UniversityNanjing 210023China Changzhou High-Tech Research Institute of Nanjing University and Jiangsu TargetPharma Laboratories Inc. Changzhou 213164China

This study was designed to evaluate ERK5 expression in lung cancer and malignant melanoma progression and to ascertain the involvement of ERK5 signaling in lung cancer and melanoma.We show that ERK5 expression is abundant in human lung cancer samples,and elevated ERK5 expression in lung cancer was linked to the acquisition of increased metastatic and invasive potential.Importantly,we observed a significant correlation between ERK5 activity and FAK expression and its phosphorylation at the Ser910 site.Mechanistically,ERK5 increased the expression of the transcription factor usf1,which could transcriptionally upregulate FAK expression,resulting in FAK signaling activation to promote cell migration.We also provided evidence that the phosphorylation of FAK at Ser910 was due to ERK5 but not ERK1/2,and we then suggested a role for Ser910 in the control of cell motility.In addition,ERK5 had targets in addition to FAK that regulate epithelial-to-mesenchymal transition and cell motility in cancer cells.Taken together,our findings uncover a cancer metastasis-promoting role for ERK5 and provide the rationale for targeting ERK5 as a potential therapeutic approach.

关键词： ERK5 lung cancer melanoma metastasis FAK usf1 EMT

HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关联

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HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关联

作者：董雪蓉内蒙古大学

学位级别：硕士

细胞系传代次数是设计实验时的一个重要因素。即使是永生化的细胞系,每次细胞群分裂时也会经历老化。细胞凋亡是一种非常严格的程序性细胞死亡,凋亡信号有助于保护基因组完整性,而失调的细胞凋亡可能促进癌变。肿瘤发展与抑制细胞凋亡... 详细信息

细胞系传代次数是设计实验时的一个重要因素。即使是永生化的细胞系,每次细胞群分裂时也会经历老化。细胞凋亡是一种非常严格的程序性细胞死亡,凋亡信号有助于保护基因组完整性,而失调的细胞凋亡可能促进癌变。肿瘤发展与抑制细胞凋亡或程序性细胞死亡之间存在密切关联,癌细胞通过逃避凋亡实现细胞永生。尽管HeLa细胞作为永生化的细胞系在肿瘤生物学研究中具有广泛应用,但细胞传代次数对HeLa细胞的影响及背后的机制尚不清楚。在本研究中,应用转录组分析和基因组学方法来分析传代次数对HeLa细胞的影响。结果表明,细胞传代次数的增加影响了HeLa细胞在基因组水平和转录组水平上的变化:(1)基因组学统计分析显示,发生基因组突变的基因总数随着传代次数的增加而增加。其中涉及基因数目最多的突变类型为SNP和CNV。(2)转录组学分析结合主成分分析、相关性分析、热图及层次聚类分析显示,不同传代次数的细胞之间存在一定的转录组差异,这与差异表达基因的数目随传代次数增加有关。富集分析显示,大量与转录相关的基因发生差异表达变化,与细胞分裂、细胞代谢、细胞骨架相关的基因表达下调,与衰老凋亡相关的基因表达上调。(3)筛选出突变基因与差异表达基因中的共同基因,结果显示大部分基因组水平上发生了突变的基因在转录组水平上也发生了表达量变化。富集分析显示,共同基因功能上与DNA结合转录因子活性有关,与癌细胞转录失调有关。我们通过生信分析鉴定突变且差异表达的转录因子并结合实验进行验证。这些转录因子特别参与HeLa细胞在传代过程中的分子功能变化。其中转录因子usf1在宫颈癌中上调,是肿瘤促进因子,功能上与细胞凋亡相关。usf1在HeLa细胞中的敲低促进了细胞凋亡。我们构建了usf1的一种可能的转录调控网络,并对usf1敲低后靶基因的表达变化进行进一步验证。综上所述,本研究不仅揭示了传代次数对HeLa细胞的影响,而且为突变且差异表达的转录因子对肿瘤发展的潜在作用提供了重要参考。

关键词： HeLa细胞传代基因组突变转录组变化相关性 usf1

转录因子usf1调控鸡小肠上皮细胞中糖类转运蛋白表达

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畜牧兽医学报 2015年第10期46卷 1713-1720页

作者：张利环李玲香张瑜原一桐王文魁朱芷葳王钦德李慧锋山西农业大学生命科学学院太谷030801 山西农业大学动物科技学院太谷030801

为了研究转录因子usf1在鸡小肠上皮细胞中调控糖转运蛋白基因表达的机制,本试验在生物信息学分析的基础上通过构建真核表达载体pcDNA3.1-usf1,在鸡小肠上皮细胞中过表达转录因子usf1,用绝对荧光定量PCR的方法检测分析了usf1对SGLT1、GL... 详细信息

为了研究转录因子usf1在鸡小肠上皮细胞中调控糖转运蛋白基因表达的机制,本试验在生物信息学分析的基础上通过构建真核表达载体pcDNA3.1-usf1,在鸡小肠上皮细胞中过表达转录因子usf1,用绝对荧光定量PCR的方法检测分析了usf1对SGLT1、GLUT2和GLUT5基因表达的影响。结果表明,受到usf1基因过表达的影响,糖类转运蛋白GLUT2和SGLT1 mRNA在鸡小肠上皮细胞中的表达量极显著增高(P1);而GLUT5mRNA表达量没有显著变化(P>0.05)。结合本研究结果,经过对这3个糖类转运蛋白基因5′上游调控区usf1结合位点的深入分析,认为在鸡小肠上皮细胞中转录因子usf1对糖转运蛋白基因GLUT2和SGLT1的表达具有正向调控的作用。

关键词： usf1 糖类转运蛋白过表达小肠上皮细胞

usf1调控鸡小肠上皮细胞中GLUT5和SGLT1表达的研究

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USF1调控鸡小肠上皮细胞中GLUT5和SGLT1表达的研究

作者：李玲香山西农业大学

学位级别：硕士

本研究通过ModuleMaster1.4和TF bind等结合位点预测软件,分别在GLUT5、 SGLT1上游5’调控区1500bp范围内找到多个usf1结合位点,进一步研究转录因子usf1对GLUT5、SGLT1的调控作用;选择原代鸡肠上皮细胞为体外研究模型,优化鸡小肠上皮细... 详细信息

本研究通过ModuleMaster1.4和TF bind等结合位点预测软件,分别在GLUT5、 SGLT1上游5’调控区1500bp范围内找到多个usf1结合位点,进一步研究转录因子usf1对GLUT5、SGLT1的调控作用;选择原代鸡肠上皮细胞为体外研究模型,优化鸡小肠上皮细胞体外分离培养条件,为鸡小肠消化和吸收等作用机制的研究提供理想的试验模型;并将重组载体pcDNA3.1-usf1转染鸡IEC,使usf1过表达,通过实时荧光定量PCR检测比较转染后各试验组GLUT5、SGLT1基因表达量变化,为鸡肠道糖营养物质的分子调控机理提供重要的理论依据。(1)优化鸡IEC原代培养条件。结果显示：①消化酶的选择,经胰蛋白酶消化得到的IEC多为单个细胞,贴壁生长的细胞最少,并且随时间的推移,细胞逐渐死亡;经胶原酶Ⅰ消化液消化得到的IEC绝大部分是单个细胞,只有少数较小的细胞团,贴壁生长的细胞较多,培养至3d期间活细胞数也有所增加,但在3d之后,细胞开始逐渐死亡;经嗜热菌蛋白酶消化得到的细胞活力最大,当培养1d后细胞呈“岛屿状”分布,在7d时,IEC数量增多,并可稳定生长至11d左右。②DMEM培养液中葡萄糖添加水平,5.6、’10、20和25 mmol/L4种糖浓度水平条件下,培养1d时,IEC均呈“岛屿状”分布,随着时间的推移,糖浓度对IEC状态的影响越来越明显;第3d时,糖浓度为5.6、10mmol/L的低糖组IEC贴壁生长数较高糖组多,且细胞折光性大于高糖组;培养至第7d时,低糖组的IEC数量明显大于高糖组,细胞呈“蜂窝状”结构生长。(2)荧光定量PCR结果显示：①转录因子usf1过表达后,质粒转染组SGLT1 mRNA表达量极显著高于阴性对照组、空白对照组(P1);②转录因子usf1过表达后,质粒转染组GLUT5 mRNA表达量与空白对照组、阴性对照组之间差异不显著(P>0.05)。综上所述：(1)嗜热菌蛋白酶是鸡小肠的最适消化酶;(2)培养鸡IEC的最佳葡萄糖浓度水平是5.6 mmol/L;(3)转录因子usfl过表达对糖转运蛋白SGLT1基因起显著正调控作用。

关键词：鸡肠上皮细胞 usf1 GLUT5 SGLT1 过表达

转录因子usf1在糖转运蛋白基因上游结合位点的分析

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转录因子USF1在糖转运蛋白基因上游结合位点的分析

作者：芦海强山西农业大学

学位级别：硕士

单糖的摄取和运输的关键场所是小肠,这主要体现在小肠绒毛中的上皮细胞上,上皮细胞含有单糖转运载体。usf1是公认的具有调节葡萄糖和脂质的转录因子,并且在小肠组织中有发现。在鸡小肠中,一般通过SGLT1、GLUT2、GLUT5表达的三种载体转... 详细信息

单糖的摄取和运输的关键场所是小肠,这主要体现在小肠绒毛中的上皮细胞上,上皮细胞含有单糖转运载体。usf1是公认的具有调节葡萄糖和脂质的转录因子,并且在小肠组织中有发现。在鸡小肠中,一般通过SGLT1、GLUT2、GLUT5表达的三种载体转运小肠中的葡萄糖和果糖。如果可以找到usf1在SGLT1、GLUT2、GLUT5基因上游的结合位点,则可以给usf1调控糖转运基因方面提供有力依据。本研究通过原代培养鸡小肠上皮细胞,对培养完成的细胞进行形态学鉴定和免疫组化鉴定;抽提上皮细胞,得到细胞总蛋白与细胞核蛋白,对抽提得到的总蛋白进行蛋白Western-blot鉴定;通过ModuleMasterl.4和TF bind等预测软件预测到的转录因子结合位点的核酸序列,并对预测得到的核酸序列进行生物素标记;将提取到的细胞核蛋白与事先标记好的生物素核酸探针进行EMSA实验,分析曝光得到的检测结果,得出转录因子usf1在三个糖转运基因上是否有结合位点以及结合位点的序列。经过一系列的试验得到如下结果:(1)经过细胞形态学鉴定,所培养的细胞首先出现不规则多边形的“铺路石”结构,经过6～7d的培养,这种多边形变成类似蝌蚪型的爆发式增长;经过免疫组化鉴定细胞中特异性抗原角蛋白18,显示,试验组的孔中细胞的颜色变成棕黄色。(2)对抽提得到的细胞总蛋白进行Western-blot鉴定,得到的曝光结果中在43kD位置出现了特异性的条带,并且条带清晰。(3)对预测出的核酸序列进行生物标记后,检测其信号强度,均有信号。(4)对提取出的细胞核蛋白与生物素标记好的核酸探针进行EMSA试验,观察曝光结果,发现在细胞核蛋白与GLUT2基因上游的预测探针中2出现滞后条带,并且出现超迁移现象;在细胞核蛋白与SGLT1基因上游的预测探针中S5出现滞后和超迁移现象;其他均无滞后条带。通过以上试验得出以下结论:(1)利用组织块法培养出来的原代细胞为鸡小肠上皮细胞;(2)提取出的细胞总蛋白中确实含有转录因子usf1,且蛋白浓度较高;(3)usf1在GLUT2基因上游有结合位点,且其位点为5’-GCAGCAGCACCTGTTGGCATGTGGGGTTCC-3’;在 GZUT5 基因上游无结合位点;在 SGLT 上游有结合位点,为 5’-TACATCTCACCTGCCAGGAT-3’。

关键词： usf1 GLUT2 GLUT5 SGLT1 IEC原代培养 EMSA

胚肝细胞诱导肝癌细胞株HepG2再分化中调控环路的重建

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胚肝细胞诱导肝癌细胞株HepG2再分化中调控环路的重建

作者：刘德美河北医科大学

学位级别：硕士

目的:全球癌症数据显示,肝癌发病率是世界所有恶性肿瘤的第5位,每年约有70万人死于肝癌。我国是全球肝癌发病率最高的国家,肝癌发病人数超过全球发病人数的50%,其中90%以上为肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。然而,目前对于HC... 详细信息

目的:全球癌症数据显示,肝癌发病率是世界所有恶性肿瘤的第5位,每年约有70万人死于肝癌。我国是全球肝癌发病率最高的国家,肝癌发病人数超过全球发病人数的50%,其中90%以上为肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。然而,目前对于HCC的治疗存在着切除率低、肝源有限、毒副作用大、复发率高等问题,即使在发达国家,5年的相对生存率不到15%,严重威胁着人类生命健康。因此,阐明HCC的发病机制,寻求有效根除HCC的方法,成为生命科学界和医学界的重点和难点。早在20世纪70年代,Pierce等人提出了肿瘤是一个发育生物学问题的理论。更多的研究证实,早期胚胎发育和肿瘤发生在许多方面存在着惊人的相似性,如早期胚胎细胞的分化和增殖机制与肿瘤细胞的分化和增殖机制;早期胚胎植入与肿瘤的侵袭性转移;两者的免疫逃避机制等。Misirlioglu等证实肿瘤细胞有胚胎性基因的表达,如甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)和胰胚抗原(pancreatic oncotetal antigen,POA)等;继而,Dvorak等研究发现胚胎植入子宫内膜的过程也有大量肿瘤形成过程中癌基因的表达。Hochedlinger等也同样证实了胚胎微环境可能存在调控肿瘤细胞向特定细胞分化并改变其恶性表型的机制。据此,导师齐锦生教授提出,胚胎细胞诱导肿瘤细胞的再分化具有组织和时间特异性,用特定发育阶段的胚肝细胞与肝癌细胞Hep G2共培养,可诱导肝癌细胞Hep G2的再分化,且已经实验证实,本实验旨在此基础上进一步探讨诱导分化过程中的主要分子机制。Young等人发现肝细胞中,HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1之间通过相互调节及自我调节作用形成了高度关联的核心转录调控环路。相关研究也发现,肝富集转录因子(Liver enriched transcription factors,LETFs)包括C/EBP、DBP、HNF3、HNF1、HNF4、HNF6在胚肝的发育和分化过程中起着至关重要的作用。HNF4α是调节肝细胞分化和功能特异性的关键因子,其表达维持着肝正常的分化状态和功能,表达缺失则会刺激肝细胞增殖导致HCC。因此,HNF4α可看作HCC的抑癌基因,可能成为治疗HCC的一个新靶点。本实验小组前期试验证明,13.5天和14.5天的胚肝细胞与肝癌细胞Hep G2细胞共培养48h后,Hep G2细胞生长明显抑制,且部分细胞回缩、变圆,最终崩解;Hep G2细胞中分化标志HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1在转录水平和蛋白水平均上调,原癌基因c-Myc在转录水平和蛋白水平均下调;Hep G2细胞中AFP蛋白含量明显下降。说明胚肝细胞可诱导肝癌细胞的再分化,且具有组织和时间特异性。然而,肝癌细胞Hep G2再分化过程是否是重建了Hep G2细胞中HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1的核心调控环路;HNF4α是否是此调控环路的核心因子;仍需进一步的实验证明。本实验旨在在前期实验结果的基础上,进一步揭示胚肝细胞诱导肝癌细胞再分化的主要分子机制。首先用13.5d的胚肝细胞与肝癌细胞Hep G2共培养48h后,利用染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,Ch IP)技术,检测Hep G2细胞中HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1的核心调控环路的重新建立。在转染si RNA-HNF4α(si-HNF4α),敲低Hep G2细胞中HNF4α的表达,检测共培养后,Hep G2细胞中HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1转录水平和蛋白水平的变化,进一步证明HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1之间的相互调控作用;利用免疫荧光法检测Hep G2细胞中AFP的表达变化;探明了阻断HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1之间的调控环路后,对胚肝细胞诱导肝癌细胞的再分化过程的影响。据此,探讨胚肝细胞诱导肝癌细胞再分化的主要分子机制,为治疗HCC提供实验依据。方法:1细胞的培养Hep G2细胞:Hep G2细胞用含1%非必需氨基酸和10%新生牛血清的DMEM高糖培养基培养,0.25%的胰蛋白酶消化传代,接种于100ml培养瓶中,在37℃、5%CO2培养箱中培养。原代胚肝细胞分离及培养:采用Ⅳ胶原酶消化法,从孕鼠腹中取得胎鼠,分离出胚肝,将胚肝组织剪成组织块,Ⅳ胶原酶消化胚肝组织块,成功分离为单个胚肝细胞;多次重复差速贴壁法除去成纤维细胞,纯化胚肝细胞;高糖DMEM培养胚肝细胞。2实验设计与分组:(1)诱导Hep G2细胞再分化的过程中,检测HNF4α、HNF1α、HNF6和usf1之间的相互调节作用,实验分成2组:untreated组(单纯Hep G2细胞);co-culture组(Hep G2细胞与13.5d的胚肝

关键词：胚肝细胞肝癌细胞Hep G2 HNF4α HNF1α HNF6 usf1 LETFs si-HNF4α

Apicidin对ADAM10的调控及其对阿尔茨海默病治疗的机制研究

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Apicidin对ADAM10的调控及其对阿尔茨海默病治疗的机制研究

作者：胡小童重庆医科大学

学位级别：硕士

研究目的:中药单体小分子高通量药物筛选发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂apicidin可显著增高pGL4.17-ADAM10的荧光素酶活性表达。故本研究旨在(1)在离体细胞中验证apicidin促进ADAM10表达;(2)研究apicidin促进ADAM10表达的基因调控元件和信... 详细信息

研究目的:中药单体小分子高通量药物筛选发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂apicidin可显著增高pGL4.17-ADAM10的荧光素酶活性表达。故本研究旨在(1)在离体细胞中验证apicidin促进ADAM10表达;(2)研究apicidin促进ADAM10表达的基因调控元件和信号通路;(3)开发拥有我国自主产权的中药单体药物,进而为治疗AD提供新的实验依据。研究方法及结果:1.药物筛选及细胞水平研究发现apicidin对ADAM10有促进作用。通过分子克隆构建稳定表达pGL4.17-ADAM10荧光素酶报告基因的SH-SY5Y细胞系,并进行中药单体小分子高通量药物筛选发现,组蛋白去乙酰化酶抑制剂apicidin可显著增高pGL4.17-ADAM10的荧光素酶活性表达。在人胚胎肾细胞HEK293中,通过细胞活力测试、实时定量PCR及免疫印迹分析,研究apicidin的细胞毒性,及其对ADAM10的转录和翻译水平的影响。结果证实apicidin对ADAM10的转录和翻译具有促进作用。2.研究apicidin对ADAM10的作用调控元件。通过对ADAM10核心启动子区分析,用分子克隆的方法将其5个截短片段分别与pGL4.17连接,构建pGL4.17-ADAM10-C/D/E/E1/E2荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞24h后,加0.25uM的apicidin处理24h,用化学发光试剂检测转染不同截短片段的HEK293细胞中荧光素酶活性的表达。结果发现:转染了pGL4.17-ADAM10-E片段的细胞在apicidin处理后,与其他截短片段相比荧光素酶活性最强。查阅文献及对ADAM10-E片段的分析发现,此片段上主要存在有SP1及usf1两个结合位点。通过染色质免疫共沉淀(CHIP)验证了SP1、usf1与ADAM10启动子区的相互作用。再用RNA干扰技术下调神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中SP1与usf1的表达,在此基础上验证apicidin对ADAM10的促进作用是否存在,结果发现:usf1下调后,apicidin对ADAM10的促进作用基本消失,而下调SP1后,apicidin仍轻度的增加了ADAM10的表达,进一步验证了apicidin对ADAM10的促进作用主要通过影响usf1的活性产生。3.在SH-SY5Y细胞中研究apicidin对ADAM10调控的信号通路。通过免疫印迹分析,研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂Calphostin C、蛋白激酶A抑制剂(PKA)H89、ERK途径抑制剂U0126、PI3K抑制剂LY294002、SP1抑制剂Mithramycin A及胰岛素对apicidin促进ADAM10表达的影响。结果发现:当抑制了ERK及SP1后,apicidin对ADAM10的促进作用明显下调。4.apicidin对BACE1及APP降解途径的影响。通过荧光定量PCR及免疫印迹分析,加0.25uM的apicidin处理SH-SY5Y细胞48h后,检测BACE1在mRNA和蛋白水平的表达。结果发现:与对照组(等体积DMSO处理SH-SY5Y48h)相比,apicidin对BACE1的mRNA及蛋白水平均没有影响。将0.25uM的apicidin处理HEK-APP细胞48h后,用免疫印迹技术分析apicidin对APP降解途径的影响,结果发现:与对照组相比,apicidin处理后,APP表达未见明显变化,而α-CTF蛋白表达增多,β-CTF蛋白表达减少。研究结论:综上可知,组蛋白去乙酰化酶抑制剂apicidin可使ADAM10的表达上调,而此种作用可能主要通过ERK信号通路对usf1的活力进行调控产生的。同时,表达上调的ADAM10通过促进APP向非Aβ途径降解,减少了毒性Aβ的生成。因此,apicidin作为新的调控ADAM10表达的小分子药物,或有望成为治疗AD的有效策略。

关键词：阿尔茨海默 ADAM10 apicidin SP1 usf1

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奶山羊usf1基因的克隆与组织表达分析

中国草食动物科学 2018年第1期38卷 7-11页

作者：李君邓红雨张景锋侯霞飞罗军河南牧业经济学院动物科技学院郑州市反刍动物营养重点实验室郑州450046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为了获得奶山羊(Capra hircus)usf1基因序列并分析其在不同泌乳时期乳腺组织中的表达规律,从奶山羊乳腺组织中克隆得到usf1基因序列(Gen Bank登录号:MF953285),CDS区序列933 bp,编码310个氨基酸。通过序列比对发现,山羊与牛(Bos taurus... 详细信息

为了获得奶山羊(Capra hircus)usf1基因序列并分析其在不同泌乳时期乳腺组织中的表达规律,从奶山羊乳腺组织中克隆得到usf1基因序列(Gen Bank登录号:MF953285),CDS区序列933 bp,编码310个氨基酸。通过序列比对发现,山羊与牛(Bos taurus)、猪(Sus scrofa)和人(Homo sapiens)的usf1基因核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,为94%以上。蛋白质结构预测发现,usf1蛋白质结构为典型的螺旋-环-螺旋结构;其蛋白不含跨膜结构域,亚细胞定位在细胞核内。实时荧光定量PCR分析表明,usf1基因在奶山羊泌乳前期、盛期和中期的乳腺组织中m RNA表达量均显著高于干奶期(Pusf1可能参与奶山羊乳腺的泌乳过程。该研究可为进一步揭示usf1基因在奶山羊乳腺组织中的功能及对脂质代谢的调控作用提供基础资料。

关键词：奶山羊 usf1 克隆组织表达序列分析

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牙胚中上游刺激因子部分序列的cDNA克隆

牙体牙髓牙周病学杂志 2002年第11期12卷 588-590页

作者：吴礼安文玲英杨富生樊淑梅第四军医大学口腔医学院陕西西安710032

目的 :克隆牙胚中上游刺激因子 (upstreamstimulatoryfactor,usf)基因编码区特异片段。方法 :从生后 5dbalb/c鼠牙胚中抽提总RNA ,用随机引物逆转录合成cDNA ,然后用PCR方法借助特异性引物从cD NA中扩增小鼠usf1基因片段 (2 89bp) ,电... 详细信息

目的 :克隆牙胚中上游刺激因子 (upstreamstimulatoryfactor,usf)基因编码区特异片段。方法 :从生后 5dbalb/c鼠牙胚中抽提总RNA ,用随机引物逆转录合成cDNA ,然后用PCR方法借助特异性引物从cD NA中扩增小鼠usf1基因片段 (2 89bp) ,电泳检测、回收目的片段。将所得的基因片段连接至Teasy质粒载体 ,并转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,扩大培养 ,提取重组质粒DNA ,酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 :酶切图谱显示质粒重组、克隆成功 ,序列分析结果与国外报道一致。结论

关键词：牙胚上游刺激因子 cDNA克隆小鼠 usf1

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凝聚美国期待的usf1车队

汽车时代 2009年第3期 43-43页

作者：小仓茂德

去年12月，我去了美国北卡罗来纳州的夏洛特市。从机场乘车大约20分钟，一条气派的赛道呈现眼前，纳斯卡大部分车队的总部就在旁边。要说美国赛车产业的中心，以前在印地车队集中的印第安纳州，而现在则转移到了北卡罗来纳州的夏洛特市。

关键词：车队美国印第安纳州 usf1