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梅毒螺旋体膜蛋白tpp47通过RhoA／ROCK信号通路调控血管内皮细胞通透性

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中华皮肤科杂志 2016年第1期49卷 21-25页

作者：张瑞丽王千秋南京医科大学附属无锡市第二人民医院皮肤科无锡214002 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所临床性病防治室

目的探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。方法用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）构建细胞单层模型，重组蛋白tpp47（rtpp47）直接与HUVEC单层模型混合培养，或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处... 详细信息

目的探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。方法用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）构建细胞单层模型，重组蛋白tpp47（rtpp47）直接与HUVEC单层模型混合培养，或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处理后再用rtpp47刺激HUVEC单层模型，以煮沸灭活的rtpp47处理HUVEC单层模型为阴性对照组，采用ELISA检测各组培养1、4 h时辣根过氧化物酶（HRP）流量，培养12 h用荧光染料罗丹明-鬼笔环肽染色细胞骨架系统，共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F肌动蛋白排列变化。用Western 印迹检测rtpp47与煮沸灭活的rtpp47分别处理HUVEC单层模型后细胞RhoA的表达水平。结果 rtpp47刺激HUVEC单层模型1 h时HRP流量（0.81 ± 0.10）高于阴性对照组（0.39 ± 0.09），差异有统计学意义（P 〈 0.05），而此时Y-27632预处理组HRP流量（0.51 ± 0.10）与单用rtpp47刺激组及阴性对照组相比，差异无统计学意义（均P 〉 0.05）。培养4 h时，单用rtpp47刺激组HRP流量显著增加（2.31 ± 0.14），且高于Y-27632预处理组（1.21 ± 0.12）及阴性对照组（0.73 ± 0.12），差异有统计学意义（均P 〈 0.05），而Y-27632预处理组与阴性对照组之间差异无统计学意义。rtpp47刺激HUVEC后，与煮沸灭活的rtpp47作用HUVEC相比，细胞中RhoA表达增加。同时，rtpp47刺激细胞中骨架蛋白F肌动蛋白重排，在胞质中形成应力纤维，抑制剂Y-27632可部分抑制F肌动蛋白重排。结论梅毒螺旋体膜重组蛋白tpp47可通过RhoA/ROCK信号转导通路调控血管内皮细胞通透性。

关键词：苍白密螺旋体内皮,血管通透性脐静脉肌动蛋白 tpp47 RhoA/ROCK信号通路

梅毒螺旋体膜蛋白tpp47对血管内皮细胞黏附功能影响的实验研究

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中华皮肤科杂志 2014年第5期47卷 328-332页

作者：张瑞丽王千秋中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042

目的探讨梅毒螺旋体膜蛋白tpp47对血管内皮细胞的作用。方法利用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白rrpp47及脂多糖分别刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC），ELISA检测上清中细胞间黏附分子1（ICAM-1）及E选择素的水平；荧光定量PCR检... 详细信息

目的探讨梅毒螺旋体膜蛋白tpp47对血管内皮细胞的作用。方法利用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白rrpp47及脂多糖分别刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC），ELISA检测上清中细胞间黏附分子1（ICAM-1）及E选择素的水平；荧光定量PCR检测HUVEC中ICAM-1及E选择素mRNA的转录水平；M1Tr法检测HUVEC增殖水平；将重组蛋白tpp47及脂多糖预处理的HUVEC与钙黄绿素AM标记的THP-1细胞共培养，荧光倒置显微镜下观察HUVEC与THP-1细胞的黏附情况。结果梅毒螺旋体膜重组蛋白tpp47刺激HUVEC后，其分泌的黏附分子ICAM-1（1．28±0．03）及E选择素（0．51±0．01）水平显著提高，与空白对照组（0．90±0．01与0．13±0．03）比较，差异均有统计学意义（t值分别为18．28和18．19，均P〈0．05）；将重组蛋白tpp47刺激24h后的HUVEC与THP-1细胞共培养，HUVEC与THP-1细胞的黏附率为56．1％±1．9％，较空白对照组（16．3％±2．1％）明显提高，差异有统计学意义（r=12．65，P〈0．05）。M1Tr试验结果显示，重组蛋白tpp47刺激HUVEC后，其增殖率（19．5％±1．7％）高于空白对照组（10．0％±3．1％），差异有统计学意义（X^2=3．92，P〈0．05）；较脂多糖低（41．2％±3．7％），差异有统计学意义（X^2=10．42，P〈0．05）。结论梅毒螺旋体膜重组蛋白tpp47可体外上调HUVEC与THP-1的黏附能力及促进HUVEC增殖，可能在梅毒的发病中起一定作用。

关键词：密螺旋体苍白细胞黏附分子 E选择素 tpp47 人脐静脉内皮细胞 THP-1细胞

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巢式PCR法在早期梅毒诊断中的应用评价

现代生物医学进展 2013年第23期13卷 4529-4531,4590页

作者：雷震山杜剑强吴少琴张勤国尹云华深圳市保健办广东深圳518020

目的:评价巢式PCR(nPCR)法在早期梅毒诊断中的临床应用价值,以提高早期梅毒诊断的灵敏度和特异性。方法:选择2010年10月至2011年11月来我院就诊,经临床综合分析为一期梅毒的患者195例和同期就诊的120例非梅毒患者为研究对象,采用nPCR法... 详细信息

目的:评价巢式PCR(nPCR)法在早期梅毒诊断中的临床应用价值,以提高早期梅毒诊断的灵敏度和特异性。方法:选择2010年10月至2011年11月来我院就诊,经临床综合分析为一期梅毒的患者195例和同期就诊的120例非梅毒患者为研究对象,采用nPCR法对棉拭子标本和血液标本中梅毒螺旋体特异性基因tpp47进行扩增检测,所有标本同时做暗视野镜检和Tp-ELISA血清学检测。结果:nPCR法共检测出阳性标本176例,其灵敏度和特异性分别为90.3%和100%,明显高于暗视野镜检和Tp-ELISA法,差异有统计学意义。结论:nPCR法在早期梅毒诊断中具有较高灵敏度和特异性,可以作为暗视野镜检和血清学检测的补充试验。

关键词：梅毒螺旋体巢式PCR 早期梅毒 tpp47

两种巢氏PCR方法检测二期梅毒血液标本的比较

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实用预防医学 2016年第8期23卷 904-907页

作者：肖勇健刘卓然李蓓刘斌彭菁南华大学第二附属医院检验科湖南衡阳421001

目的比较两种巢氏PCR方法在检测二期梅毒患者血液标本中的价值。方法针对tpp47和pol A,分别建立两个巢氏PCR扩增全血中的梅毒螺旋体DNA。结果在353例梅毒阳性全血中,n PCR-tpp47和n PCR-pol A分别检出142例(40.2%)和132例(37.4%),结果... 详细信息

目的比较两种巢氏PCR方法在检测二期梅毒患者血液标本中的价值。方法针对tpp47和pol A,分别建立两个巢氏PCR扩增全血中的梅毒螺旋体DNA。结果在353例梅毒阳性全血中,n PCR-tpp47和n PCR-pol A分别检出142例(40.2%)和132例(37.4%),结果差异有统计学意义(χ2=5.79,PtppA≥1:2 560)组的检出率明显高于低滴度组(RPRtppAtpp47优于n PCR-pol A;巢氏PCR方法可作为梅毒血清学试验的补充试验。

关键词：巢氏PCR 二期梅毒全血 tpp47 pol A