梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47通过RhoA／ROCK信号通路调控血管内皮细胞通透性

作     者：张瑞丽 王千秋 Zhang Ruili;Wang Qianqiu

作者机构：南京医科大学附属无锡市第二人民医院皮肤科无锡214002 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所临床性病防治室 

出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)

年 卷 期：2016年第49卷第1期

页      面：21-25页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金(BK2010136) 江苏省临床医学科技专项(BL2012003) 

主　　题：苍白密螺旋体 内皮,血管 通透性 脐静脉 肌动蛋白 Tpp47 RhoA/ROCK信号通路 

摘      要：目的 探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。 方法 用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）构建细胞单层模型，重组蛋白Tpp47（rTpp47）直接与HUVEC单层模型混合培养，或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处理后再用rTpp47刺激HUVEC单层模型，以煮沸灭活的rTpp47处理HUVEC单层模型为阴性对照组，采用ELISA检测各组培养1、4 h时辣根过氧化物酶（HRP）流量，培养12 h用荧光染料罗丹明-鬼笔环肽染色细胞骨架系统，共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F肌动蛋白排列变化。用Western 印迹检测rTpp47与煮沸灭活的rTpp47分别处理HUVEC单层模型后细胞RhoA的表达水平。 结果 rTpp47刺激HUVEC单层模型1 h时HRP流量（0.81 ± 0.10）高于阴性对照组（0.39 ± 0.09），差异有统计学意义（P 〈 0.05），而此时Y-27632预处理组HRP流量（0.51 ± 0.10）与单用rTpp47刺激组及阴性对照组相比，差异无统计学意义（均P 〉 0.05）。培养4 h时，单用rTpp47刺激组HRP流量显著增加（2.31 ± 0.14），且高于Y-27632预处理组（1.21 ± 0.12）及阴性对照组（0.73 ± 0.12），差异有统计学意义（均P 〈 0.05），而Y-27632预处理组与阴性对照组之间差异无统计学意义。rTpp47刺激HUVEC后，与煮沸灭活的rTpp47作用HUVEC相比，细胞中RhoA表达增加。同时，rTpp47刺激细胞中骨架蛋白F肌动蛋白重排，在胞质中形成应力纤维，抑制剂Y-27632可部分抑制F肌动蛋白重排。 结论 梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47可通过RhoA/ROCK信号转导通路调控血管内皮细胞通透性。