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尾静脉注射ThP-1细胞构建急性髓系白血病NOD/SCID小鼠模型及其鉴定

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中国实验血液学杂志 2020年第2期28卷 424-429页

作者：廖晓敏陈琦封忠昕杨雪敏朱承谕遵义医科大学附属医院血液科贵州遵义563000

目的:应用ThP-1细胞构建NOD/SCID小鼠白血病模型。方法:将18只3-4周龄的雌性NOD/SCID小鼠,随机分为对照、模型A和模型B 3组(每组6只)。接种前连续2 d每只小鼠给予腹腔注射环磷酰胺2 mg/(kg·d),预处理后于24 h内接种细胞。模型组分别经... 详细信息

目的:应用ThP-1细胞构建NOD/SCID小鼠白血病模型。方法:将18只3-4周龄的雌性NOD/SCID小鼠,随机分为对照、模型A和模型B 3组(每组6只)。接种前连续2 d每只小鼠给予腹腔注射环磷酰胺2 mg/(kg·d),预处理后于24 h内接种细胞。模型组分别经尾静脉接种对数生长期ThP-1细胞悬液1×10^7/只(A组)、5×106/只(B组),对照组鼠尾静脉注射等剂量生理盐水。观察一般情况,预处理前、接种细胞后7、14、21和28 d及处死时进行血常规检测、外周血白细胞分类,濒死前处死取材,组织切片病理检查。结果:模型组小鼠分别于接种细胞d 7和d 10开始出现竖毛、萎靡少动等现象,与对照组比较,模型A和B 2组小鼠体重于接种细胞21 d后明显下降(P1),建模28 d后模型组白细胞数明显升高,差异有统计学意义(P1),其中以接种1×10^7/只的模型A组最为显著。病理组织切片结果提示,模型组小鼠脾脏均可见白血病细胞弥漫性浸润。免疫组织化学结果提示,白血病细胞抗人CD13结果阳性,证实模型建立成功。结论:NOD/SCID小鼠经腹腔注射CTX预处理后,每只小鼠尾静脉注射ThP-1细胞1×10^7或5×10^6个均可成功构建急性髓系白血病动物模型,符合急性髓系白血病的生物学特点,高浓度成瘤更快。

关键词：急性髓系白血病 NOD/SCID小鼠动物模型 ThP-1

In vitro immunomodulation of magnesium on monocytic cell toward anti-inflammatory macrophages

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Regenerative Biomaterials 2020年第4期7卷 391-401页

作者： Lei Sun Xiaoyu Li Menghan Xu Fenghe Yang Wei Wang Xufeng Niu Key Laboratory for Biomechanics and Mechanobiology of Ministry of Education School of Biological Science and Medical EngineeringBeihang UniversityNo.37 XueYuan RoadHaidian DistrictBeijing 100083China Beijing Advanced Innovation Center for Biomedical Engineering Beihang UniversityNo.37 XueYuan RoadHaidian DistrictBeijing 100083China Department of Immunology School of Basic Medical SciencesNHC Key Laboratory of Medical ImmunologyPeking UniversityNo.38 XueYuan RoadHaidian DistrictBeijing 100191China

Biodegradable magnesium(Mg)has shown great potential advantages over current bone fixation devices and vascular scaffold technologies;however,there are few reports on the immunomodulation of corrosive Mg products,the micron-sized Mg particles(MgMPs).Human monocytic leukemia cell line ThP-1 was set as the in vitro cell model to estimate the immunomodulation of MgMPs on cell proliferation,apoptosis,polarization and inflammatory reaction.Our results indicated highconcentration of Mg^2+ demoted the proliferation of the ThP-1 cells and,especially,ThP-1-derived macrophages,which was a potential factor that could affect cell function,but meanwhile,cell apoptosis was almost not affected by Mg^2+.In particular,the inflammation regulatory effects of MgMPs were investigated.Macrophages exposed to Mg^2+ exhibited down-regulated expressions of M1 subtype markers and secretions of pro-inflammatory cytokines,up-regulated expression of M2 subtype marker and secretion of anti-inflammatory cytokine.These results indicated Mg^2+ could convert macrophages from M0 to M2 phenotype,and the bioeffects of MgMPs on human inflammatory cells were most likely due to the Mg^2+-induced NF-jB activation reduction.Together,our results proved Mg^2+ could be used as a new anti-inflammatory agent to suppress inflammation in clinical applications,which may provide new ideas for studying the immunomodulation of Mg-based implants on human immune system.

关键词： immunomodulation magnesium ThP-1 macrophage polarization

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制ThP-1源性巨噬细胞向M1型极化

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南方医科大学学报 2021年第3期41卷 344-351页

作者：邱峰张琳郑介婷操龙斌张子康邓屹琪南方医科大学南海医院医学检验科广东佛山528244 南方医科大学中医药学院广东广州510515 广州中医药大学第二附属医院急诊科广东广州510120

目的探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组:不同浓度的(5、10μmol/L)穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组:溶媒3‰DMSO... 详细信息

目的探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组:不同浓度的(5、10μmol/L)穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组:溶媒3‰DMSO;无药对照组:不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的ThP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达(P1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达(P1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。

关键词：穗花杉双黄酮巨噬细胞极化动脉粥样硬化 PPAR-α/γ ThP-1

Pre-incubated with BSA-complexed free fatty acids alters ER stress/autophagic gene expression by carboxylated multi-walled carbon nanotube exposure in ThP-1 macrophages

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Chinese Chemical Letters 2019年第6期30卷 1224-1228页

作者： Qianyu Yang Maolin Wang Yongbing Sun Shengming Peng Yanhuai Ding Yi Cao Key Laboratory of Environment-Friendly Chemistry and Application of Ministry of Education Lab of Biochemistry College of Chemistry Xiangtan University Xiangtan 411105 China National Engineering Research Center for Solid Preparation Technology of Chinese Medicines Jiangxi University of Traditional Chinese Medicines Nanchang 330006 China

Recently we found that multi-walled carbon nanotube (MWCNT) exposure alters the mRNA levels of endoplasmic reticulum (ER) stress/autophagic genes, but the impact of biological molecules on this response is unclear. Herein, we compared the different actions of carboxylated MWCNTs (c-MWCNTs) pre-incubated with bovine serum albumin (BSA) or BSA-complexed free fatty acid (denoted as FFA) on macrophages derived from ThP-1 monocytes (denoted as ThP-1 macrophages). C-MWCNTs exhibited increased diameter and hydrodynamic size as well as decreased absolute zeta potential value after pre-incubation with BSA or FFA, which suggested a coating effect. Cytotoxicity or oxidative stress were not significantly induced after exposure to BSA-or FFA-coated c-MWCNTs. BSA-pre-incubated c-MWCNTs significantly enhanced the expression of the ER stress gene, DDIT3 and the autophagic genes, ATG5, BECN1, and PLIN2, but the mRNA levels of these genes was significantly decreased by FFA-pre-incubated c-MWCNTs. FFA-pre-incubated c-MWCNTs induced significantly higher lipid accumulation and interleukin-6 (IL-6) protein level compared with BSA-pre-incubated c-MWCNTs, which suggested that FFA-pre-incubated c-MWCNTs may more effectively induce the formation of macrophage foam cells. Collectively, our data indicated that pre-incubation with FFA may influence c-MWCNT-induced ER stress/autophagic gene expression and foam cell formation in ThP-1 macrophages.

关键词： Multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) ThP-1 macrophages Endoplasmic reticulum (ER) stress Autophagy Foam cells

LNK基因沉默对ThP-1细胞EPO、EPOR表达影响的研究

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中国实验血液学杂志 2019年第4期27卷 1013-1019页

作者：田润梅罗茜谭梅史良黄成双苏琼陈艳遵义医学院附属医院小儿内二科

目的:探讨LNK基因沉默对人单核细胞白血病细胞(ThP-1)EPO、EPOR表达的影响。方法:培养ThP-1细胞,以慢病毒为载体介导SiRNA稳定沉默LNK基因,感染72h后在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率,RT-PCR验证LN... 详细信息

目的:探讨LNK基因沉默对人单核细胞白血病细胞(ThP-1)EPO、EPOR表达的影响。方法:培养ThP-1细胞,以慢病毒为载体介导SiRNA稳定沉默LNK基因,感染72h后在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率,RT-PCR验证LNK沉默效应,并检测EPO及EPOR mRNA表达水平;应用Western blot检测LNK、EPO及EPOR蛋白水平。结果:慢病毒感染72h在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平达85%以上,流式细胞术检测感染效率均在99%以上;LNK沉默组LNK、EPO及EPORmRNA表述水平明显低于对照组(PThP-1细胞株。沉默LNK基因,则EPO及EPOR表达下调,提示LNK可能参与了EPO及EPOR的调控。

关键词： ThP-1 淋巴细胞特异性连接蛋白促红细胞生成素促红细胞生成素受体

LNK基因沉默和过表达对ThP-1细胞STAT3表达影响的研究

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中国实验血液学杂志 2019年第5期27卷 1469-1475页

作者：田润梅史良容颖谭梅罗茜苏琼黄成双陈艳遵义医学院附属医院小儿内二科

目的:探讨LNK基因沉默和过表达对人单核细胞白血病细胞(ThP-1)STAT3基因表达的影响。方法:培养ThP-1细胞;以慢病毒为载体介导SiRNA、LNK(SH2B3)稳定沉默及过表达LNK基因;转染72h后于倒置荧光显微镜下观察细胞的GFP表达量;应用流式细胞... 详细信息

目的:探讨LNK基因沉默和过表达对人单核细胞白血病细胞(ThP-1)STAT3基因表达的影响。方法:培养ThP-1细胞;以慢病毒为载体介导SiRNA、LNK(SH2B3)稳定沉默及过表达LNK基因;转染72h后于倒置荧光显微镜下观察细胞的GFP表达量;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率;RT-PCR验证LNK沉默及过表达效应,检测STAT3 mRNA表达量;Western blot检测LNK、STAT3蛋白水平。结果:慢病毒感染72 h ThP-1细胞GFP表达量达85%以上,细胞感染效率在99%以上。LNK沉默组LNK及STAT3 mRNA表达量明显低于对照组,而LNK过表达组的LNK和STAT3 mRNA表达水平明显高于对照组(PThP-1细胞株。沉默LNK基因导致STAT3表达下调;过表达LNK基因,使STAT3表达上调;此结果提示LNK可能参与了STAT3的调控。

关键词： ThP-1 淋巴细胞特异性连接蛋白信号转导转录活化因子3

N-cadherin表达下调对ThP-1细胞增殖、凋亡和药物敏感性的影响及机制研究

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中华血液学杂志 2018年第6期39卷 514-517页

作者：马杰刘亚杰刘晓艳汤平马平余庆峰张占芳李宁甘思林孙慧郑州大学第一附属医院血液科 450000

神经钙黏蛋白（N-cadherin）是经典的钙黏蛋白超家族成员之一，表达于神经细胞、内皮细胞、肌肉细胞和造血干细胞在内的多种正常组织中。它不仅是胚胎发育过程中原肠胚形成和神经嵴发育的重要分子，而且在结直肠癌、前列腺癌、胃癌、乳... 详细信息

神经钙黏蛋白（N-cadherin）是经典的钙黏蛋白超家族成员之一，表达于神经细胞、内皮细胞、肌肉细胞和造血干细胞在内的多种正常组织中。它不仅是胚胎发育过程中原肠胚形成和神经嵴发育的重要分子，而且在结直肠癌、前列腺癌、胃癌、乳腺癌等实体肿瘤中参与调控肿瘤的浸润和转移、细胞周期和凋亡等病理过程，并与肿瘤的恶性程度和侵袭性呈正相关。

关键词： N-cadherin ThP-1 药物敏感性细胞增殖表达下调凋亡胚胎发育过程实体肿瘤

选择性siRNA干扰FCGRⅡA影响ThP-1吞噬调理红细胞

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现代免疫学 2020年第2期40卷 107-114页

作者：杨颖李勤张嘉敏赵俸涌杨启修叶璐夷朱自严上海市血液中心输血研究所上海200051

为探讨能否通过小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰影响巨噬细胞Fcγ受体介导的吞噬作用,采用FCGRⅡA siRNA转染佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)活化人单核细胞ThP-1,并设NO-TARGET、GAPDH、no-siRNA(1640)为对照。培养48~72h后,用FCM分析CD14+细胞的CD32、CD32b分布,用CD14的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)值作为内参,得到CD32、CD32b相对MFI值;用Western blotting观察CD32a、CD32b的蛋白表达水平;进行单核细胞单层实验(monocyte monolayer assay,MMA),结合流式细胞术分析ThP-1中能吞噬调理红细胞的吞噬百分比。采用配对t检验分析FCGRⅡA组与各对照组间的分布差异。Western blotting结果证实,FCGRⅡA组CD32a量明显减少(分别为NO-TARGET组、GAPDH组、1640组的22%、42%、31%),而CD32b不降低;FCM分析显示,FCGRⅡA组MFI CD32/CD14较NO-TARGET组、1640组、GAPDH组下降(P1640组减少9.6%、9.2%和4.4%。提示siRNA选择性干扰可有效降低Fcγ受体CD32a表达,并降低PMA活化的ThP-1吞噬能力,可作为潜在手段干扰输血反应所涉及的巨噬细胞吞噬作用。

关键词： ThP-1 FCGRⅡA 小干扰RNA 单核细胞单层实验吞噬

GLP-1R基因敲除的ThP-1细胞系建立及其功能研究

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GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系建立及其功能研究

作者：王文文湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:巨噬细胞具有高度异质性和可塑性。在不同系统中不同的疾病或同一疾病的不同阶段,巨噬细胞可以发生表型变化,从而履行不同的功能。随着研究的深入,胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)在调控巨噬细胞迁移及表型分化... 详细信息

背景:巨噬细胞具有高度异质性和可塑性。在不同系统中不同的疾病或同一疾病的不同阶段,巨噬细胞可以发生表型变化,从而履行不同的功能。随着研究的深入,胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)在调控巨噬细胞迁移及表型分化等方面发挥着一定作用。目的:通过Cas9慢病毒介导的方法构建GLP-1R基因稳定敲除ThP-1细胞系,探究GLP-1R表达对巨噬细胞迁移、极化的影响。方法:通过构建对GLP-1R基因的特异性打靶慢病毒载体,建立GLP-1R-/-ThP-1细胞系,使用嘌呤霉素进行筛选,克隆后通过基因测序和蛋白印迹实验(Westem blot,WB)进行鉴定。根据构建结果对不同细胞分类:野生型组(WT组):ThP-1细胞;GLP-1R-/-组(KO组):GLP-1R-/-ThP-1细胞。分别用佛波酯(PMA)、干扰素γ(INF-γ)+脂多糖(LPS)、白介素4(IL-4)刺激WT组、KO组,进一步构建WT组、KO组MO、M1、M2型巨噬细胞模型。流式检测细胞表面分子CD14、CD80、CD206 的表达;qRT-PCR检测 CD68、IL-6、TNF-α、iNOS、IFN-γ、IL-10、CD206、CD163、Arg-1 mRNA的表达。Transwenll和划痕实验检测GLP-1R对巨噬细胞的迁移情况;结果:(1)基因测序及WB结果证实,GLP-1R-/--ThP-1细胞系构建成功:(2)流式细胞术结果显示:M0型巨噬细胞高表达CD14+,M1型高表达CD14+CD80+;M2型高表达CD14+CD206+;(3)qRT-PCR结果显示:与WT组相比,用PMA诱导得到WT M0的CD68 m RNA表达显著上调(P1)。与KO组相比,用PMA诱导得到KO M0的CD68 mRNA表达显著上调(P1型巨噬细胞标志物mRNA表达明显升高,M2型巨噬细胞标志物mRNA表达显著降低。(4)GLP-1R能够影响巨噬细胞的迁移;结论:本研究通过Cas9慢病毒成功构建了一株GLP-1R基因敲除的ThP-1细胞系,并通过对不同细胞系的诱导分化研究得出GLP-1R基因缺乏可诱导巨噬细胞分泌促炎因子,向M1型巨噬细胞极化。GLP-1R可促使巨噬细胞分泌抗炎因子,向M2型巨噬细胞极化。

关键词： CRISPR/Cas9 GLP-1R ThP-1 基因敲除极化