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THBS1 regulates trophoblast fusion through a CD36-dependent inhibition of cAMP,and its upregulation participates in preeclampsia

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Genes & Diseases 2021年第3期8卷 353-363页

作者： Fu-Mei Duan Li-Juan Fu Yong-Heng Wang Enoch Appiah Adu-Gyamfi Ling-Ling Ruan Zeng-Wei Xu Shi-Quan Xiao Xue-Mei Chen Ying-Xiong Wang Tai-Hang Liu Yu-Bin Ding School of Public Health and Management Chongqing Medical UniversityChongqing400016PR China Department of Bioinformatics The School of Basic MedicineChongqing Medical UniversityChongqing400016PR China The Joint International Research Laboratory of Reproduction and Development Ministry of EducationChongqing400016PR China Department of Herbal Medicine School of Traditional Chinese MedicineChongqing Medical UniversityChongqing400016PR China Department of Reproductive Medicine The Third Affiliated HospitalChongqing Medical UniversityChongqing401120PR China

Preeclampsia is a pregnancy complication which threatens the survival of mothers and fetuses.It originates from abnormal placentation,especially insufficient fusion of the cytotrophoblast cells to form the syncytiotrophoblast.In this study,we found that THBS1,a matricellular protein that mediates cell-to-cell and cell-to-matrix interactions,is downregulated during the fusion of primary cytotrophoblast and BeWo cells,but upregulated in the placenta of pregnancies complicated by preeclampsia.Also,THBS1 was observed to interact with CD36,a membrane signal receptor and activator of the cAMP signaling pathway,to regulate the fusion of cytotrophoblast cells.Overexpression of THBS1 inhibited the cAMP signaling pathway and reduced the BeWo cells fusion ratio,while the effects of THBS1 were abolished by a CD36-blocking antibody.Our results suggest that THBS1 signals through a CD36-mediated cAMP pathway to regulate syncytialization of the cytotrophoblast cells,and that its upregulation impairs placental formation to cause preeclampsia.Thus,THBS1 can serve as a therapeutic target regarding the mitigation of abnormal syncytialization and preeclampsia.

关键词： cAMP Cell fusion Preeclampsia THBS1 Trophoblast

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ADAMDEC1通过降解THBS1促进胎盘滋养细胞合体化的机制研究

ADAMDEC1通过降解THBS1促进胎盘滋养细胞合体化的机制研究

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作者：李卓航重庆医科大学

学位级别：硕士

研究目的:胎盘是连接母体及半异源性胎儿的重要纽带,其在整个妊娠期间保持高度动态变化以平衡母-胎免疫耐受和满足胎儿不同发育阶段营养物质的转运需求。滋养细胞作为胎盘的主要构成细胞,其中由细胞滋养细胞（Cytotrophoblast,CTB）不... 详细信息

研究目的:胎盘是连接母体及半异源性胎儿的重要纽带,其在整个妊娠期间保持高度动态变化以平衡母-胎免疫耐受和满足胎儿不同发育阶段营养物质的转运需求。滋养细胞作为胎盘的主要构成细胞,其中由细胞滋养细胞（Cytotrophoblast,CTB）不断增殖和分化为合体滋养层细胞（Syncytiotrophoblast,STB）以及绒毛外滋养细胞（Extravillous trophoblast,EVT）是实现胎盘动态变化的关键,但调控机制仍不甚明了。已有研究发现,细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）在滋养细胞分化及胎盘形成过程中广泛进行重塑,并参与母-胎信号转导、胎盘屏障构建及器官形态发生等,其异常将介导子痫前期（Preeclampsia,PE）、胎儿生长受限（Fetal growth restriction,FGR）和自然流产（Spontaneous abortion,SA）等胎盘源性妊娠疾病的发生与发展。因此,本研究从细胞外基质重塑调控细胞分化角度着手,拟阐明基质金属蛋白酶ADAMDEC1通过降解细胞外基质调控滋养细胞合体化的分子机制,及其异常与子痫前期发生的相关性,为揭示滋养细胞分化的调控机制提供理论依据,为子痫前期防治策略及药物研发提供潜在靶点。研究方法:本研究综合生物信息学分析、多种体外合体化模型、慢病毒转染系统、3D培养系统、蛋白质组学技术、临床关联性分析等研究手段,多方面探究ADAMDEC1对滋养细胞融合、细胞间边界重塑、信号转导的影响及其表达异常与子痫前期发生的相关性。首先,利用生物信息学方法从5个已发表的公共数据集中筛选出唯一共同上调基因ADAMDEC1,通过分离原代滋养细胞及收集正常早孕绒毛组织,采用实时荧光定量 PCR（Quantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR）、免疫荧光（Immunofluorescence,IF）、蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）验证ADAMDEC1在CTB及STB中的表达模式;其次,通过慢病毒转染系统建立稳定敲低的BeWo细胞系、稳定过表达的BeWo细胞系和3DJEG-3细胞,联合福斯克林（Forskolin,FSK）诱导细胞融合构建合体化模型,采用 qRT-PCR、IF、WB、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）等实验技术探究ADAMDEC1降解THBS1介导滋养细胞融合的分子机制;再者,利用蛋白质组学技术挖掘ADAMDEC1在滋养细胞融合过程中其他潜在的底物,为进一步解析其参与ECM重塑提供研究靶标;最后,收集临床胎盘组织样本,采用IF、WB分析ADAMDEC1异常表达与PE发生的相关性。研究结果:一、滋养细胞融合差异表达基因筛选及分析通过对GEO数据库以及BioProject数据库中的5组滋养细胞合体化转录组数据集进行重分析,共获得6282个差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs）,进一步维恩（Venn）分析发现ADAMDEC1是所有数据集中唯一共同上调表达的基因;通过“clusterProfiler”软件分析包对DEGs进行基因本体（Gene ontology,GO）和KEGG信号通路富集分析,结果显示DEGs主要富集于细胞周期,参与类固醇合成、TNF介导的炎症信号通路、PI3K-Akt信号通路和Jak-STAT信号通路。二、原代滋养细胞验证DEGs及ADAMDEC1在胎盘组织的表达模式至少存在于2个数据集中的DEGs被认为是高度可信的基因,以此为标准共筛选出190个上调表达基因和406个下调表达基因。基于原代滋养细胞体外自发合体化模型对其中20个DEGs进行表达差异验证,实验统计结果与生物信息学分析结果一致,并且ADAMDEC1表达差异倍数高达23倍;进一步蛋白水平检测证实了原代滋养细胞体外培养48h后ADAMDEC1表达显著升高,且在早孕绒毛组织中显示相对高表达于外层STB。三、干扰ADAMDEC1表达抑制BeWo细胞合体化进程为了探究ADAMDEC1对滋养细胞合体化的影响,在BeWo细胞合体化模型上进行干扰ADAMDEC1表达实验,结果显示干扰抑制FSK诱导合体化标志物Syncytin1、β-hCG的上调表达以及降低BeWo细胞的融合效率。四、过表达ADAMDEC1促进BeWo细胞及3D JEG-3细胞融合基于经典的BeWo细胞合体化模型以及成功构建的3D合体化模型,发现单纯过表达ADAMDEC1在一定程度上促进了 BeWo细胞和3D JEG-3细胞核聚集,联合FSK处理显著上调合体化标志Syncytin1、β-hCG的表达并且更大程度地促进滋养细胞融合;同时发现在此过程中伴随着重要的细胞外基质蛋白表达降低,如钙粘附蛋白（Epithelial cadherin,E-cadherin）和血小板反应蛋白（Thr

关键词：胎盘滋养细胞合体化 ADAMDEC1 THBS1 子痫前期

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THBS1及KCNT2在高盐环境下引起的大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖改变中的作用

THBS1及KCNT2在高盐环境下引起的大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖改变...

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作者：詹涛安徽医科大学

学位级别：硕士

背景高盐饮食已经成为三大饮食风险因素之一。有大量的研究表明高盐摄入会导致血压升高、血管内皮功能受损和靶器官损害,从而导致心血管和其他慢性疾病的风险性增大。血管内皮细胞是维持血管稳态的主要细胞之一,内皮细胞功能障碍会导致... 详细信息

背景高盐饮食已经成为三大饮食风险因素之一。有大量的研究表明高盐摄入会导致血压升高、血管内皮功能受损和靶器官损害,从而导致心血管和其他慢性疾病的风险性增大。血管内皮细胞是维持血管稳态的主要细胞之一,内皮细胞功能障碍会导致严重的心血管功能失调。THBS1（Thrombospondin-1）是一种有效的内源性生理和病理血管生成抑制剂,有研究表明它作用于血管内皮细胞,对心血管疾病有着重要意义。我们前期的研究发现高盐环境下,THBS1在大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖中起关键作用,然后通过转录组测序技术发现高盐作用于内皮细胞增殖的靶基因KCNT2（Potassium sodium-activated channel subfamily t member 2）,最后通过RT-q PCR和CCK-8增殖实验探究高盐环境下THBS1和KCNT2在大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖中所起的调节作用,从而为心血管疾病的治疗和预后判断提供一些新的思路。目的（1）探究THBS1在高盐环境下对肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响及机制。（2）探究KCNT2对于肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响。（3）探究高盐环境下THBS1是否与KCNT2共同调节肠系膜动脉内皮细胞的增殖。方法1.免疫荧光实验鉴定原代培养的大鼠肠系膜细胞为内皮细胞;2.CCK-8实验检测高盐环境下THBS1对肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响;3.转录组测序技术发现THBS1引起肠系膜动脉内皮细胞增殖改变相关的靶基因;4.RT-q PCR实验验证测序发现的靶基因:KCNT2;5.CCK-8实验检测KCNT2对肠系膜动脉内皮细胞增殖的影响;6.CCK-8实验检测THBS1和KCNT2是否在高盐环境下共同作用于大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖;结果本研究首先发现高盐环境下THBS1的敲低会抑制大鼠肠系膜动脉内皮细胞的增殖,转录组测序结果表明KCNT2可能是作用于大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖的靶基因,并且通过RT-q PCR实验确定KCNT2在高盐培养的内皮细胞中的表达与测序结果一致,最后通过CCK-8实验进一步发现:KCNT2能够影响内皮细胞的增殖,高盐环境下THBS1和KCNT2共同调节内皮细胞增殖。结论高盐环境下大鼠肠系膜动脉内皮细胞中THBS1的敲低能够明显抑制内皮细胞增殖,KCNT2是高盐环境下THBS1调节内皮细胞增殖的重要靶点,KCNT2在高盐下能调节大鼠肠系膜动脉内皮细胞增殖。该研究为THBS1和KCNT2在高盐引起的心血管疾病,提供一些新的治疗思路。

关键词：高盐 THBS1 KCNT2 内皮细胞

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miR-105-5p靶向THBS1调节神经炎症和神经元凋亡参与阿尔茨海默病进展

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中国老年学杂志 2021年第21期41卷 4823-4827页

作者：郑佳林郭丽璇金惠英吴静成都中医药大学附属医院检验科四川成都610075

目的探讨微小RNA-105-5p(miR-105-5p)在阿尔茨海默病(AD)中的作用和机制。方法使用β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)处理PC12细胞,构建AD体外模型。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-105-5p、THBS1 mRNA的表达。酶联免疫吸附试验(ELI... 详细信息

目的探讨微小RNA-105-5p(miR-105-5p)在阿尔茨海默病(AD)中的作用和机制。方法使用β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)处理PC12细胞,构建AD体外模型。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-105-5p、THBS1 mRNA的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β水平。CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,观察敲低miR-105-5p或THBS1对细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响。StarBase在线数据库和双荧光素酶报告基因实验验证miR-105-5p与THBS1之间靶向关系。Western印迹检测敲低miR-105-5p对THBS1蛋白表达量的影响。结果与对照组miR-105-5p的表达水平(1.011±0.127)相比,模型组(1.731±0.070)显著上调(PTHBS1的表达水平(1.000±0.081)相比,模型组(0.470±0.161)显著下调(P1β水平均显著升高;与NC inhibitor组相比,miR-105-5p inhibitor组TNF-α和IL-1β水平均显著下降(均P105-5p inhibitor组显著下降(P105-5p inhibitor组显著升高(P105-5p与THBS13′UTR之间存在结合位点。THBS1-WT+NC mimic组与THBS1-WT+miR-105-5p mimic组的荧光素酶活性分别为(1.02±0.11)与(0.72±0.07),两组差异有统计学意义(PTHBS1-MUT+NC mimic组与THBS1-MUT+miR-105-5p组荧光素酶活性分别为(1.03±0.10)与(0.91±0.09),组间差异无统计学意义(P>0.05);与NC mimic组相比,miR-105-5p的过表达可显著降低THBS1在AD细胞模型中的蛋白水平(P105-5p inhibitor+si-THBS1组TNF-α及IL-1β水平显著高于miR-105-5p inhibitor+si-NC组(P105-5p inhibitor+si-NC组相比,miR-105-5p inhibitor+si-THBS1组细胞凋亡率显著升高(P105-5p inhibitor+si-THBS1组细胞活力显著降低(均P105-5p通过靶向THBS1调控AD体外模型中细胞增殖、凋亡及炎症反应。

关键词： miR-105-5p THBS1 神经炎症凋亡阿尔茨海默病

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THBS1基因沉默对乳腺癌细胞生物学功能的影响

THBS1基因沉默对乳腺癌细胞生物学功能的影响

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作者：包楠丁内蒙古医科大学

学位级别：硕士

研究背景:乳腺癌是危害女性健康最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全球范围呈逐年上升趋势。临床治疗乳腺癌主要采取手术切除及术后化疗,但由于侵袭性强、复发率高的特点,乳腺癌的病死率位居女性恶性肿瘤之首。血小板凝血酶蛋白-1(thromb... 详细信息

研究背景:乳腺癌是危害女性健康最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全球范围呈逐年上升趋势。临床治疗乳腺癌主要采取手术切除及术后化疗,但由于侵袭性强、复发率高的特点,乳腺癌的病死率位居女性恶性肿瘤之首。血小板凝血酶蛋白-1(thrombospondin-1,THBS1)是由多种细胞合成分泌的一种多功能糖蛋白,在肿瘤中的异常表达有致癌或抑癌功能,在肿瘤的发展过程中起到较为复杂的调控作用,其对乳腺癌进展过程起到的调控作用尚不明确。目的:1.分析THBS1m RNA在乳腺癌中的表达水平及其与年龄、性别、TNM分期、病理分期、预后等临床病理特征的相关性。2.探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)介导的THBS1基因沉默对人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:1.生物信息学分析:利用TCGA数据库及GEPIA数据库分析THBS1m RNA在乳腺癌中的表达情况,分析THBS1的表达与年龄、性别、TNM分期等临床病理特征是否存在相关性。2.研究利用si RNA介导的THBS1基因沉默对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞生物学行为的影响:(1)通过脂质体转染法,将三条不同序列的特异性针对THBS1基因的si RNA(简称si RNA-THBS1)转染至MCF-7及MDA-MB-231细胞中。(2)通过实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测三个不同序列的si RNA-THBS1对THBS1的沉默效果,并筛选出沉默效果最佳的序列,后续实验均采用转染该序列si RNA进行THBS1基因沉默。(3)Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖实验检测THBS1基因沉默对乳腺癌细胞增殖能力的影响。(4)Transwell小室基质侵袭实验检测THBS1基因沉默对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。(5)流式细胞学技术Annexin V-FITC/PI双染法检测THBS1基因沉默对乳腺癌细胞凋亡的影响。所有实验均重复三次,实验结果使用SPSS23.0统计软件进行统计学分析,P1.生物信息学分析:THBS1在乳腺癌组织中的表达高于正常组织(PTHBS1的表达与年龄、性别、病理分期、T(肿瘤大小)、M(远处转移)均无关,(P>0.05);与N(淋巴结转移)有关,(P1)q RT-PCR:三种序列的si RNA-THBS1均可沉默THBS1,其中序列-1(si RNA-THBS1-1)的沉默效率最高,该序列si RNA对MDA-MB-231细胞的沉默效率达到(62.9±2.9)%,对MCF-7细胞的沉默效率达到(94.98±0.37)%。(2)CCK-8细胞增殖实验:沉默THBS1基因后,MCF-7细胞的增殖能力较空白对照组、si RNA-NC组均明显降低(P1细胞的增殖能力较其他对照组无明差异(P>0.05)。(3)Transwell小室基质侵袭实验:经苏木素染色计数后发现,两种细胞的si RNA-THBS1组侵袭细胞数均少于si RNA-NC组(PTHBS1组凋亡率均高于si RNA-NC组,P1.THBS1在乳腺癌中表达高于正常组织,且THBS1的表达与淋巴结转移相关;2.THBS1基因促进乳腺癌细胞MCF-7细胞的增殖,促进MDA-MB-231及MCF-7细胞的侵袭,并抑制两种细胞凋亡。

关键词： THBS1 乳腺癌增殖凋亡侵袭

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沉默ECEL1对肝癌细胞DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响

沉默ECEL1对肝癌细胞DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响

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作者：彭柳南华大学

学位级别：硕士

目的:研究沉默ECEL1对人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响。方法:（1）利用ECEL1基因RNA干扰慢病毒感染人肝癌细胞（BEL-7404）,与此同时设立对照组,在荧光显微镜下来观察肝癌细胞的慢病毒感染效率;（2）使用qPC... 详细信息

目的:研究沉默ECEL1对人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响。方法:（1）利用ECEL1基因RNA干扰慢病毒感染人肝癌细胞（BEL-7404）,与此同时设立对照组,在荧光显微镜下来观察肝癌细胞的慢病毒感染效率;（2）使用qPCR技术来检测沉默ECEL1后人肝癌细胞（BEL-7404）ECEL1,DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1 mRNA的表达水平。（3）使用WB技术检测沉默ECEL1后人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1蛋白质的表达水平。结果:（1）慢病毒感染人肝癌细胞（BEL-7404）72h后,荧光显微镜下显示肝癌细胞状态良好,感染效率达到80%以上;qPCR技术检测结果显示ECEL1基因的沉默率高达84.1%,shECEL1组ECEL1基因的mRNA表达受到显著抑制（p＜0.05）。（2）qPCR技术检测肝癌细胞相关基因mRNA的表达,结果显示:沉默ECEL1后,DUSP1、THBS1、PTEN mRNA表达上调,EGR1 mRNA表达下调。（3）WB技术检测肝癌细胞相关基因蛋白质的表达,结果显示:沉默ECEL1后,DUSP1、THBS1、PTEN蛋白质表达上调,EGR1蛋白质表达下调。结论:沉默ECEL1基因,可以导致人肝癌细胞（BEL-7404）DUSP1、THBS1、PTEN基因表达上调,EGR1基因表达下调。

关键词： ECEL1 shRNA 肝癌细胞 DUSP1 THBS1 PTEN EGR1

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阿帕替尼通过调控THBS1基因抑制高级别胶质瘤细胞生物学行为的机制研究

阿帕替尼通过调控THBS1基因抑制高级别胶质瘤细胞生物学行为的机...

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作者：姚辉苏州大学

学位级别：硕士

目的胶质瘤是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其治疗方案仍主要是手术切除,并结合术后放疗联合替莫唑胺的同步加辅助治疗。但是大部分胶质瘤仍然不可避免的发生复发,尽管国内国际几十种药物通过复发胶质瘤临床试验,但是尚未找到同时提高生... 详细信息

目的胶质瘤是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其治疗方案仍主要是手术切除,并结合术后放疗联合替莫唑胺的同步加辅助治疗。但是大部分胶质瘤仍然不可避免的发生复发,尽管国内国际几十种药物通过复发胶质瘤临床试验,但是尚未找到同时提高生存时间和无症状生存期的药物。阿帕替尼作为小分子抗血管生成靶向药物,高度选择性竞争细胞内VEGFR-2的ATP结合位点,阻断下游信号转导。首先在胃癌中获得批准三线用药,效果得到临床认可。在胶质瘤复发患者的临床试验中,阿帕替尼也初见成效。但是阿帕替尼的抗胶质瘤的作用机制尚未完全明了。目前尚未见阿帕替尼对胶质瘤细胞增殖,迁移侵袭能力抑制作用及相关机制的研究报道。本研究旨在探讨阿帕替尼对高级别胶质瘤细胞增殖,迁移侵袭能力的抑制作用及相关机制。方法1.通过MTT法检测了阿帕替尼对患者来源N14069细胞、N14042细胞、细胞增殖的影响,并明确阿帕替尼抑制胶质瘤细胞增殖的半数抑制浓度（IC-50）。2.通过PI-FACS实验探讨250umol/l浓度的阿帕替尼对N14042细胞及N14069细胞细胞周期的作用。3.通过Matrigel小室试验探讨250umol/浓度的阿帕替尼对N14042细胞及N14069细胞迁移侵袭能力的抑制作用。4.给药72小时,通过Trizol法提取给药组及对照组总RNA,通过全转录组芯片生物信息分析法,寻找给药组及对照组中的差异基因。给药组及对照组细胞,通过裂解法提取蛋白,通过等重同位素多标签相对定量蛋白质组学法,寻找两组的差异蛋白。通过联合生信聚合分析,明确RNA和蛋白同时明显下调基因,该阳性基因-THBS1很可能就是促进胶质瘤细胞增殖的驱动基因。5.运用Western-Blot和RT-PCR检测验证THBS1基因在给药组与对照组的蛋白和mRNA的表达差异性。6.设计3种特异性结合THBS1基因片段的基因序列,通过PCR鉴定和测序,合成RNA干扰慢病毒载体。将病毒滴度测定后,分别将三种慢病毒转染至N14069和N14042细胞中及对照组,通过RT-PCR和荧光显微镜检测THBS1的表达情况及敲减效率。选择敲减效率最高的慢病毒,通过细胞周期实验、MTT检测实验、以及侵袭实验探讨下调THBS1后对胶质瘤细胞在增殖及侵袭功能的影响。7.用病毒增强液将载有THBS1基因片段的慢病毒转染至N14042细胞中,同时设立空白及阴性对照组,通过荧光显微镜检测转染前后胶质瘤细胞N14042转染效率。分别加入250umol/l的阿帕替尼培养36小时后,通过细胞周期实验、MTT检测实验、以及侵袭实验探讨上调THBS1后对阿帕替尼对胶质瘤细胞增殖及侵袭功能的影响。结果1.MTT法证明在体外阿帕替尼对N14069及N14042细胞具有抑制其增殖的作用,IC-50 分别为:239.4umol/l,442.1ummol/l。给药后:在第 96h,120h 时间点上,阿帕替尼对于N14042及N14069细胞生长抑制明显大于对照组,差别具有统计学意义（P＜0.01）。细胞周期实验结果显示:在N14069细胞中G1期细胞百分比由61.66%增加至68.32%（P＜0.01）;N14042细胞中G1期细胞百分比由76.45%增加至85.48%（P＜0.01）。然而在N14069细胞中S期细胞百分比由15.22%下降至8.45%（P＜0.01）;N14042细胞中S期细胞百分比由8.51%下降至5.4%（P＜0.01）。侵袭实验结果显示:与对照组N14069及N14042细胞相比,给药组N14069及N14042细胞侵袭穿过侵袭小室底膜的数量显著减少（P＜0.01）。2.全转录组芯片生物信息分析法显示阿帕替尼下调了N14069细胞的380个基因,下调了 14042细胞的649个基因,这些基因中重叠的基因有155个。等重同位素多标签相对定量蛋白质组学显示给药组与对照组相比下调的蛋白有559个。选择基因芯片下调最高10个基因,与蛋白质组学下调的蛋白的上游基因联合,发现共有9个基因重复,其中THBS1由于下调最高,推测THBS1基因为阿帕替尼作用于胶质瘤细胞的驱动基因。3.Western-blot结果显示:给药组N14069细胞及N14042细胞中THBS1蛋白水平的表达显著低于对照组N14069及N14042细胞（P＜0.01）。4.RT-PCR显示在N14069细胞中的表达丰度,对照组与给药组比值为1.004:0.187（P＜0.01）,在 N14042 细胞中为 1.003:0.060（P＜0.01）。5.将载有shRNA-THBS1基因片段的3种慢病毒转染至N14069和N14042细胞中,通过RT-PCR和荧光显微镜检测发现转染第3种病毒后的胶质瘤细胞中THBS1的表达水平较对照组增高,并且在N14069细胞中THBS1基因敲减效率达到60.2%（P＜0.05）。在N14042细胞中THBS1基因敲减效率达到48.2%（

关键词：胶质瘤阿帕替尼 THBS1 细胞增殖细胞周期侵袭

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THBS1基因甲基化与AML发病关系的研究及去甲基化药物在Allo-HSCT中的作用

THBS1基因甲基化与AML发病关系的研究及去甲基化药物在Allo-HSCT...

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作者：王晓果第三军医大学

学位级别：硕士

目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)对人类的健康产生严重的威胁,其发病因素各不相同。目前,基因启动子区域甲基化与急性髓系白血病发生、发展及预后的关系日益受到关注,去甲基化药物在血液系统恶性肿瘤中的应用越来越受... 详细信息

目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)对人类的健康产生严重的威胁,其发病因素各不相同。目前,基因启动子区域甲基化与急性髓系白血病发生、发展及预后的关系日益受到关注,去甲基化药物在血液系统恶性肿瘤中的应用越来越受到重视。我们前期蛋白芯片研究发现凝血酶敏感蛋白-1在急性髓系白血病患者血清中表达较对照组下调[1]。凝血酶敏感蛋白-1(Thrombospondin-1,TSP-1,THBS1)是一种多功能的细胞外基质糖蛋白[2],其编码基因THBS1,位于人类染色体15q15,是潜在的抑癌基因[3]。部分研究表明THBS1基因启动子区域高甲基化抑制基因转录,与胃癌、结肠癌等肿瘤的发生密切相关[4,5],THBS1基因甲基化是否与急性髓系白血病的发病也有一定的关系仍不确定。异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,alloHSCT)为目前唯一可能治愈急性髓系白血病的方法[6],但是移植后复发及移植物抗宿主病一直是影响AML患者预后的主要原因。去甲基化药物在异基因造血干细胞移植前后的使用对急性髓系白血病及骨髓增生异常综合症的预后影响国内外学者做了大量的研究,但结论仍存在一些争议。因此,我们针对去甲基化药物桥接异基因造血干细胞移植对急性髓系白血病及骨髓增生异常综合症预后的影响进行meta分析,并针对小剂量地西他滨对移植后早期复发的AML和MDS患者的疗效进行观察,以期找到提高移植后AML和MDS患者预后、改善其生存质量的有效方法。方法:1.检测初诊急性髓系白血病患者及健康成年人外周血血清THBS1蛋白水平,并检测初诊的急性髓系白血病患者外周血、健康成年人外周血以及白血病细胞株中THBS1基因甲基化发生频率,并比较两者之间差异;2.收集国内外期刊及会议已发表临床病例数据资料进行Meta分析,来评价去甲基化药物桥接异基因造血干细胞移植对AML和MDS患者预后的影响;3.观察我院6例异基因造血干细胞移植后早期复发并接受小剂量地西他滨治疗的AML和MDS患者,总结这6例患者的临床特点、治疗前后骨髓中原始细胞比例、植入指标、移植物抗宿主病的转归及对预后的影响。主要结果:1.与健康成年人相比,急性髓系白血病患者外周血血清中THBS1蛋白水平明显下降,且THBS1基因启动子区域甲基化发生率高(36.7%和0%,p=0.002),在四种白血病细胞株中均检测到THBS1基因甲基化。2.Meta分析结果显示,与诱导化疗和最佳支持治疗相比,异基因造血干细胞前接受去甲基化药物桥接治疗可显著提高AML和MDS患者总生存率(P=0.03),并降低cGVHD发生率(P=0.03),改善患者生存质量;同时并不增加NRM、CIR、II-III a GVHD和III-IV aGVHD,且对EFS和DFS没有影响。3.6例接受小剂量地西他滨治疗后患者的c GVHD症状均有好转。其中病例1患者复查骨髓细胞学提示原始单核细胞5.5%,流式细胞学检测MRD阳性;小剂量地西他滨治疗1疗程后复查骨髓细胞学提示完全缓解,MRD阴性。病例3患者复查骨髓植入指标XX7%,XY93%,小剂量地西他滨治疗1疗程后植入指标XX2%,XY98%;患者移植后早期复发倾向得到控制。截至目前,病例3患者因严重肺部感染放弃治疗,其余5例患者病情平稳。主要结论:1.THBS1基因甲基化与急性髓系白血病的发病有一定的相关性。2.去甲基化药物桥接异基因造血干细胞移植治疗AML和MDS,可有效提高患者OS,减轻c GVHD,提高患者生存质量。3.小剂量地西他滨治疗异基因造血干细胞移植后早期复发患者安全有效,可一定程度改善移植后c GVHD症状。

关键词：急性髓系白血病 THBS1 去甲基化药物复发移植物抗宿主病

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FGFR2、THBS1和thbs4在胃癌组织中的表达及临床意义

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中国癌症防治杂志 2017年第5期9卷 368-372页

作者：周潇黄婷婷邱红华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科武汉430030

目的探讨成纤维细胞生长因子2型受体(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)、凝血酶敏感蛋白家族(thrombospondins,thbs)成员THBS1和thbs4在胃癌组织中的表达及临床意义,并分析FGFR2与THBS1、thbs4的相关性。方法采用免疫组化SABC法检测胃癌组织中FGFR2、THBS1和thbs4的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 FGFR2、THBS1和thbs4在胃癌组织中的高表达率分别为68.67%、57.83%和62.65%,三者在胃癌组织中的表达均高于癌旁正常组织(P0.05);THBS1表达与患者的临床病理特征均无相关性(P>0.05);thbs4表达与患者肿瘤分化程度相关,高或中分化肿瘤组织thbs4的表达明显高于低分化肿瘤组织(P=0.001)。相关性分析显示FGFR2与THBS1表达呈正相关(r=0.229,P=0.037),与thbs4表达呈负相关(r=-0.213,P=0.045)。结论 FGFR2、THBS1与thbs4在胃癌组织中高表达,FGFR2可能正向调控THBS1表达,而负向调控thbs4表达,其作用可能是FGFR2信号通路参与胃癌侵袭转移的分子机制之一。

关键词：胃肿瘤成纤维细胞生长因子2型受体 THBS1 thbs4

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THBS1、SDC2和CYR61在食管鳞癌中的异常表达及其预后意义

THBS1、SDC2和CYR61在食管鳞癌中的异常表达及其预后意义

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作者：黄鑫汕头大学

学位级别：硕士

目的:转化生长因子β（transforming growth factor beta,TGF-β）信号通路在生长和发育过程中发挥着重要作用,与肿瘤的发生发展密切相关。凝血酶敏感素1（Thrombospondin-1, THBS1）、硫酸类肝素蛋白多糖（syndecan-2,SDC2）和富含半... 详细信息

目的:转化生长因子β（transforming growth factor beta,TGF-β）信号通路在生长和发育过程中发挥着重要作用,与肿瘤的发生发展密切相关。凝血酶敏感素1（Thrombospondin-1, THBS1）、硫酸类肝素蛋白多糖（syndecan-2,SDC2）和富含半胱氨酸61（cysteine-rich 61, CYR61）是TGF-β信号通路相关基因。研究显示,THBS1能明显地活化TGF-β1因子并且激活TGF-β信号途径;SDC2即能通过硫酸肝素蛋白聚糖链与TGF-β1因子相互作用,把TGF-β1因子运输到TGF受体（TGFR）上,又可以直接与TGFR形成三元复合物共同影响TGF-β信号通路,是TGF-β信号通路的重要上游调节基因;而CYR61是TGF-β信号通路直接激活的下游靶基因。但是目前对THBS1、SDC2和CYR61等TGF-β信号通路相关基因在食管鳞癌发生发展中的作用知之甚少。本研究的目的就是探讨THBS1、SDC2和CYR61在食管鳞癌中的表达特点,并评价三者的表达与食管鳞癌各临床病理指标及其预后的关系。方法:收集2004年9月-2007年8月汕头大学第一附属医院胸外科手术切除的食管鳞癌标本77例,包括鳞癌组织及其配对切缘相对正常食管粘膜组织;TRIzol试剂提取总RNA,反转录后,以β-actin为内参照,荧光定量RT-PCR检测上述配对组织中THBS1、SDC2和CYR61基因的mRNA水平;采用配对t检验分析食管鳞癌组织与配对相对正常食管粘膜组织中THBS1、SDC2和CYR61的mRNA表达水平的异常性;采用卡方检验评价THBS1、SDC2和CYR61基因在食管鳞癌组织中的异常表达与临床病理特征之间的相关性,而与食管癌患者生存率与预后的关系则采用Kaplan-Meier检验与Cox回归模型进行统计分析。结果:荧光定量RT-PCR结果显示THBS1（P＜0.001）、SDC2（P=0.009）和CYR61（P=0.023）基因在食管鳞癌组织中的mRNA水平均存在异常表达,其中SDC2的异常表达与瘤块的大小（P=0.024）相关;而CYR61的异常表达不仅与瘤块的大小相关（P=0.03）,而且与淋巴结转移也相关（P =0.034）。相关性分析结果显示,SDC2和CYR61（r=0.770;P＜0.001）,THBS1和CYR61（r=0.975;P＜0.001）呈正相关;并且SDC2/CYR61的共同异常表达与淋巴结转移（P=0.009）和病理分期（P=0.033）相关;THBS1（P=0.007）、CYR61（P=0.005）异常表达以及SDC2/CYR61（P=0.026）,THBS1/CYR61（P=0.006）共同异常表达均与患者的生存率密切相关。Cox回归模型显示,THBS1的异常表达与食管鳞癌的不良预后密切相关（危险度=0.391;P=0.005）,同样SDC2（危险度=0.489;P=0.013）和CYR61（危险度=0.539;P=0.031）的异常表达与食管鳞癌的不良预后也有密切相关且具有独立的预警意义。结论:,THBS1、SDC2和CYR61基因在食管鳞癌组织中的mRNA水平均呈异常表达并且THBS1、SDC2与CYR61表达与食管鳞癌的不良预后密切相关,是重要的食管鳞癌独立预后因子。

关键词： THBS1 SDC2 CYR61 TGF-β信号通路食管鳞癌荧光定量RT-PCR

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