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Dynamics of sexual development in teleosts with a note on Mugil cephalus

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Aquaculture and Fisheries 2022年第5期7卷 507-518页

作者： J.Logamanya Tilak Angeline Samuel A.Kalarani R.Moses Inbaraj Endocrinology Unit Department of ZoologyMadras Christian CollegeTambaramChennai600059India

The process of sex determination(SD)and sex differentiation(Sd)with associated sex-specific behaviour in teleosts is brought about by genetic factors and environmental factors under the influence of chemical messengers.SD is initiated by inherited genes,which in turn influence Sd by the production of hormones.To understand the plasticity of SD in fishes,the functional role of genes must be clearly elucidated.During early development,the dimorphic expression of male and female are mediated by the differentially sexualized brain.In mammals,SD region(SDR)on the Y chromosome(Sry)can be considered as male-specific copy of SOX3 and in the absence of Sry in teleosts suggests SD might be regulated by alternate genes.DM(doublesex/mab)-related genes,AMH(anti-mullerian hormone),TGF-b(transforming growth factor beta),GSDF(gonadal soma derived growth factor)and other genes(around 18)located in chromosomes of teleosts are found to be responsible for SD.The SD gene,sdY(sexually dimorphic on the Y chromosome)has been detected in more than 15 salmonid species,and in medaka and tilapia SD system is governed by heterogametic mechanism.In mullet,Mugil cephalus Dor et al.identified 27 SDR genes and suggested to be potential candidate genes for SD.Recently whole-genome sequencing data were produced from mullet and assembled into a draft genome sequence in which>30 loci are potentially associated with SD.Further analysis is required to know the involvement of each sex-biased gene for its functional influence on sex.Investigators attempted to know the sex-linkage group in tilapia and found that 2 linkage group i.e.LG1 and LG22 show SD loci,whereas in mullet it was documented that LG8 is the SD loci.Rigorous study with all male population(YY)or knockout of male marker gene,might give conclusive understanding on SD in future.The review highlights the absence of genomic understanding of SD and SDR genes for futuristic direction of research.

关键词： Sex determination Sry sdY Sex differentiation Mugil cephalus

Protective effect of thodioloside and bone marrow mesenchymal stem cells infected with HIF-1-expressing adenovirus on acute spinal cord injury

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Neural Regeneration Research 2020年第4期15卷 690-696页

作者： Xiao-Qin Ha Bo Yang Huai-Jing Hou Xiao-Ling Cai Wan-Yuan Xiong Xu-Pan Wei Lanzhou University Second Hospital LanzhouGansu ProvinceChina Department of Clinical Laboratory Lanzhou General Hospital of Lanzhou Military Area CommandLanzhouGansu ProvinceChina School of Clinical Medicine Gansu University of Traditional Chinese MedicineLanzhouGansu ProvinceChina School of Life Science and Engineering Lanzhou University of TechnologyLanzhouGansu ProvinceChina

Rhodioloside has been shown to protect cells from hypoxia injury,and bone marrow mesenchymal stem cells have a good effect on tissue repair.To study the effects of rhodioloside and bone marrow mesenchymal stem cells on spinal cord injury,a rat model of spinal cord injury was established using the Infinite Horizons method.After establishing the model,the rats were randomly divided into five groups.Rats in the control group were intragastrically injected with phosphate buffered saline(PBS)(5μL).PBS was injected at 6 equidistant points around 5 mm from the injury site and at a depth of 5 mm.Rats in the rhodioloside group were intragastrically injected with rhodioloside(5 g/kg)and intramuscularly injected with PBS.Rats in the mesenchymal stem cell(MSC)group were intramuscularly injected with PBS and intramuscularly with MSCs(8×10^6/mL in a 50-μL cell suspension).Rats in the Ad-HIF-MSC group were intragastrically injected with PBS and intramuscularly injected with HIF-1 adenovirus-infected MSCs.Rats in the rhodioloside+Ad-HIF-MSC group were intramuscularly injected with MSCs infected with the HIF-1 adenovirus and intragastrically injected with rhodioloside.One week after treatment,exercise recovery was evaluated with a modified combined behavioral score scale.Hematoxylin-eosin staining and Pischingert’s methylene blue staining were used to detect any histological or pathological changes in spinal cord tissue.Levels of adenovirus IX and Sry mRNA were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction and used to determine the number of adenovirus and mesenchymal stem cells that were transfected into the spinal cord.Immunohistochemical staining was applied to detect HIF-1 protein levels in the spinal cord.The results showed that:(1)compared with the other groups,the rhodioloside+Ad-HIF-MSC group exhibited the highest combined behavioral score(P<0.05),the most recovered tissue,and the greatest number of neurons,as indicated by Pischingert’s methylene blue staining.(2)Compared with the PBS group,HIF-1 protein ex

关键词： acute spinal cord injury adenovirus adenovirus gene IX bone marrow mesenchymal stem cells combined behavioral score scale HIF-1α nerve regeneration nerve repair Rhodiola rosea Sry

LncRNA ANRIL通过Sry/miR-146a-5p介导内皮细胞衰老微环境形成及机制研究

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LncRNA ANRIL通过SRY/miR-146a-5p介导内皮细胞衰老微环境形成及...

作者：罗欣中南大学

学位级别：硕士

背景:外周动脉疾病(peripheral artery disease,PAD)以外科再血管化治疗为主,但部分老年PAD患者不能耐受手术,促血管新生是其潜在治疗方式。老年PAD患者缺血下肢具有毛细血管稀疏、血管新生受损及对VEGF治疗抵抗等病理特点。因此探明衰... 详细信息

背景:外周动脉疾病(peripheral artery disease,PAD)以外科再血管化治疗为主,但部分老年PAD患者不能耐受手术,促血管新生是其潜在治疗方式。老年PAD患者缺血下肢具有毛细血管稀疏、血管新生受损及对VEGF治疗抵抗等病理特点。因此探明衰老相关血管新生受损的机制,是亟待解决的关键科学问题。研究表明,长链非编码RNA ANRIL(antisense non-coding RNA in the INK4 locus,ANRIL)是INK4基因的反义序列,参与多种衰老相关疾病的病理生理过程,如介导平滑肌细胞衰老调控动脉粥样硬化;通过招募抑制性多梳蛋白复合物2(polycomb repression complex 2,PRC2)调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p15(cyclin dependent kinase inhibitor p15,p15)抑制肿瘤增殖。然而,ANRIL在内皮细胞衰老中的作用和机制尚不明确。目的:探索ANRIL在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)复制性衰老模型中的作用和机制。方法:1)构建HUVECs复制性衰老模型,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)和荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测ANRIL在年轻ECs和衰老ECs中的表达及细胞定位。2)细胞转染技术敲降衰老ECs ANRIL,采用β-半乳糖苷酶染色法(senescence associatedβ-galactosidase,SABG)检测衰老细胞比例;蛋白质印记法(western blot,WB)检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21(cyclin dependent kinase inhibitor p21,p21)蛋白表达;RTq PCR检测衰老分子标志物及衰老相关分泌表型(senescence associated secretory phenotype,SASP)m RNA表达;采用细胞计数实验(cell countiing kit-8,CCK-8)、ki67免疫荧光实验、划痕和成管实验检测敲降ANRIL后,观察ECs的增殖、迁移和血管新生能力。3)细胞转染技术过表达ANRIL,采用SABG检测衰老细胞比例;RT-q PCR检测衰老分子标志物及SASP m RNA表达;免疫荧光检测磷酸化的组蛋白H2AX(H2A histone family member X,γ-H2AX)表达;细胞成管实验检测过表达ANRIL对ECs血管新生的影响。4)敲降ECs ANRIL后进行转录组差异基因富集分析并采用RTq PCR对相关通路进行验证。5)ECs敲降ANRIL后过表达miR-146a-5p,采用免疫荧光检测γ-H2AX表达;SABG检测衰老细胞比例。6)采用细胞转染技术干预ECs ANRIL,构建干预后的ECs与巨噬细胞共培养体系;后者与未进行处理的ECs混合进行体外成管实验,观察共培养巨噬细胞对ECs血管新生的影响;并通过RT-q PCR技术检测共培养后巨噬细胞VEGF和miR-146a-5p m RNA表达。采用转染技术干预ECs ANRIL及miR-146a-5p,将干预后的ECs与巨噬细胞共培养;将后者与未进行处理的ECs混合进行体外成管实验,观察共培养巨噬细胞对ECs血管新生的影响。7)采用“PROMO”软件预测可能与编码miR-146a-5p的宿主基因启动子区域结合的转录因子。8)RNA结合蛋白免疫共沉淀技术(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)获得与转录因子Sry蛋白结合的RNA,RT-q PCR检测ANRIL的表达水平。9)敲降Sry,采用RT-q PCR技术检测ECs miR-146a-5p及SASP的m RNA表达;采用SABG检测衰老细胞比例;采用WB和免疫荧光检测γ-H2AX蛋白表达。10)采用转染技术干预ECs ANRIL和Sry,构建干预后ECs与巨噬细胞共培养体系,将后者与未进行处理的ECs混合进行体外成管实验,观察共培养巨噬细胞对ECs血管新生的影响。结果:1)ANRIL在衰老ECs细胞质中表达升高。2)与siCtrl组相比,si ANRIL ECs组衰老细胞比例减少;p21蛋白表达下调,p15、p16(cyclin dependent kinase inhibitor p16,p16)和p21的m RNA表达下调;ECs增殖、迁移和成管能力升高。3)与空载质粒相比,过表达ANRIL ECs组衰老细胞比例增加;p16、IL-6和IL-8 m RNA水平显著上调;γ-H2AX阳性细胞比例增多;血管新生能力明显受到抑制。4)siCtrl与si ANR

关键词： LncRNA ANRIL 内皮细胞衰老血管新生 Sry miR-146a-5p

基于COI与Sry序列建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的分子鉴别方法

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中国中药杂志 2017年第23期42卷 4588-4592页

作者：魏艺聪蒋超袁媛赵玉洋金艳黄璐琦福建中医药大学药学院福建福州350122 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地北京100700

为了建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的特异性PCR鉴别方法。采集不同来源的梅花鹿、马鹿鹿及其杂交鹿的鹿角或鹿茸样品共48份,其中24份为市场流通的待测样品。分别利用COI与Sry基因序列作为其父母本的鉴别标记,对已知样品的COI与Sry基因... 详细信息

为了建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的特异性PCR鉴别方法。采集不同来源的梅花鹿、马鹿鹿及其杂交鹿的鹿角或鹿茸样品共48份,其中24份为市场流通的待测样品。分别利用COI与Sry基因序列作为其父母本的鉴别标记,对已知样品的COI与Sry基因进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴别引物,分别基于COI与Sry基因建立对梅花鹿、马鹿及其杂交鹿的鹿茸的特异PCR鉴定方法,并随机对市场流通的24份待测鹿茸样品进行鉴别分析。该实验所构建双位点特异PCR体系,基于COI的鉴别位点,可通过PCR扩增获得232 bp的梅花鹿特异片段,而产生518 bp的马鹿特异片段;而基于Sry的鉴别位点,通过PCR扩增获得803 bp的梅花鹿特异片段,而产生425 bp的马鹿特异片段。随机抽取市场流通中的24个待测鹿茸样品,经鉴定有3个样品属于马·花杂交的鹿茸样品。该实验建立对梅花鹿、马鹿及其杂交鹿的鹿茸的PCR鉴别方法简便、可靠。

关键词：梅花鹿马鹿杂交双位点特异PCR体系 COI Sry

牛XY染色体差异分析及特异性基因的精准定位

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中国畜牧杂志 2022年第11期58卷 105-111页

作者：史佩华陶晨雨河北农业大学动物科技学院河北保定071000

性别分化对物种的生存和进化至关重要,X和Y染色体的分化导致了一对染色体进化差异,但仍然共享一些序列高度同源区域。本研究旨在比较牛XY染色体的结构差异及特有基因,为候选基因的分析及后续性别鉴定等技术提供理论支撑。实验针对牛参... 详细信息

性别分化对物种的生存和进化至关重要,X和Y染色体的分化导致了一对染色体进化差异,但仍然共享一些序列高度同源区域。本研究旨在比较牛XY染色体的结构差异及特有基因,为候选基因的分析及后续性别鉴定等技术提供理论支撑。实验针对牛参考基因组中的XY染色体的序列,对特异性基因进行了GO分析,并对现有应用广泛的PLP1及Sry进行了精准定位。结果发现X染色体的基因密度低于Y染色体;X染色体基因富集在细胞成分与组织形成、调节生物过程等功能,Y染色体基因主要富集在生殖过程、细胞器等功能;定位分析结果显示PLP1基因定位在X染色体上52.40~52.60 Mb之间,Sry基因位于Y染色体上42.20~42.40Mb之间。研究结果揭示了XY染色体基因分布的差异性,并且得到了PLP1和Sry的具体位置信息,为研究性染色体结构及后续特异基因在性别鉴定等方面的应用提供了基础。

关键词：牛 XY染色体 PLP1 Sry

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大鼠骨髓间充质干细胞对子宫内膜的损伤修复

中国妇产科临床杂志 2019年第3期20卷 240-242页

作者：林彤李冬宏张鲁榕郭玉佳陈丽红陈杏婷连梅林晨深圳市龙华区妇幼保健院生殖医学科 518109 福建医科大学附属第一医院生殖医学中心福建医科大学附属第一医院中心实验室福建医科大学附属第一医院妇产科

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植对大鼠子宫内膜损伤的修复作用。方法 45只雌性SD大鼠分为三组:正常组、模型组、BMSCs组,每组15只。除正常组外,其余两组大鼠采用95%乙醇宫腔注射法建立子宫内... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植对大鼠子宫内膜损伤的修复作用。方法 45只雌性SD大鼠分为三组:正常组、模型组、BMSCs组,每组15只。除正常组外,其余两组大鼠采用95%乙醇宫腔注射法建立子宫内膜损伤模型。正常组不予任何干预,模型组造模后注射PBS溶液,BMSCs组注射体外分离培养的雄性SD大鼠BMSCs悬液。14 d后切除子宫,观察子宫内膜形态学改变、子宫内膜厚度、用免疫组织化学方法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、整合素β3的表达,通过对移植后子宫内膜组织的Sry DNA原位杂交来定位源自雄性供体的细胞。结果与正常组相比,模型组大鼠子宫内膜厚度显著变薄[(276.25±59.46)μm vs(413.52±68.67)μm,P Sry阳性细胞的定植,模型组则未见。结论 BMSCs移植能不同程度地促进大鼠损伤子宫内膜的修复。

关键词：大鼠骨髓充质干细胞子宫损伤模型大鼠 Sry DNA

剖宫产手术不影响孕鼠体内骨髓间充质干细胞的归巢

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中国组织工程研究 2018年第17期22卷 2644-2649页

作者：沙文琼折瑞莲王硕石王倩许曼石苇李岚暨南大学附属第二临床医学院(深圳市人民医院)产科广东省深圳市518020

背景:剖宫产术后远期并发症(前置胎盘、胎盘植入、瘢痕处妊娠、子宫破裂)危及孕产妇生命,剖宫产术切口瘢痕处的子宫内膜及平滑肌缺损、蜕膜形成不良可能是主要病因。间充质干细胞具有修复组织损伤的功能,归巢于损伤部位的细胞量有可能... 详细信息

背景:剖宫产术后远期并发症(前置胎盘、胎盘植入、瘢痕处妊娠、子宫破裂)危及孕产妇生命,剖宫产术切口瘢痕处的子宫内膜及平滑肌缺损、蜕膜形成不良可能是主要病因。间充质干细胞具有修复组织损伤的功能,归巢于损伤部位的细胞量有可能影响组织修复的效果。目的:在大鼠剖宫产手术模型中探讨间充质干细胞输入后在体内的分布、归巢情况。方法:体外分离雄性大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定。取雌性Wistar大鼠随机分为2组:剖宫产手术组大鼠于受孕第21天进行剖宫产术,术后即时经尾静脉注射制备好的雄性大鼠间充质干细胞;对照组大鼠自然分娩后即注射等量雄性大鼠间充质干细胞。分别于注射后第7,28天处死大鼠,通过Sry-PCR技术检测其心、肺、肝、肾、以及子宫瘢痕组织中Sry基因含量,间接反映组织中雄性大鼠骨髓间充质干细胞的存留量及相对分布水平。结果与结论:剖宫产手术组细胞注射后第7天,Sry基因在肺组织中含量最高,其次是肝,在肾组织中也有一定量的分布,而在心脏和子宫瘢痕处的Sry基因含量较少;注射后第28天Sry基因在肺、肝和肾中的含量均有一定程度的下降(PSry基因的含量未见显著变化(P>0.05)。非手术对照组注射后第7,28天Sry基因的检测结果和剖宫产手术组基本一致,心脏和子宫组织的Sry基因含量均较低。结果提示:异体骨髓间充质干细胞进入大鼠体内主要分部于血流丰富的肺、肝、肾组织,并且随着时间干细胞量逐渐减少;心脏和子宫组织中的骨髓间充质干细胞数量较少,随时间变化不明显。剖宫产手术损伤并没有影响骨髓间充质干细胞在孕鼠体内的分布,也没有增加骨髓间充质干细胞在子宫手术瘢痕处的归巢和定植。

关键词：间质干细胞移植剖宫产术基因 Sry 干细胞骨髓间充质干细胞归巢 Sry基因组织修复

基于Sry基因分析梅花鹿的遗传多样性及父系类型

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中国畜牧兽医 2019年第2期46卷 489-496页

作者：董依萌刘华淼玉手英利刘汇涛鞠妍邢秀梅何金明鞠贵春吉林农业大学长春130118 中国农业科学院特产研究所长春130112 日本山形大学

试验旨在研究梅花鹿Sry基因的遗传多样性及其父系类型。选取东北亚种、北海道亚种、本州亚种、指名亚种、屋久岛亚种5个亚种的144个个体,利用试剂盒和传统酚/仿(1∶1)法进行DNA的提取,采用PCR扩增和直接测序法分析梅花鹿的核苷酸多样性(... 详细信息

试验旨在研究梅花鹿Sry基因的遗传多样性及其父系类型。选取东北亚种、北海道亚种、本州亚种、指名亚种、屋久岛亚种5个亚种的144个个体,利用试剂盒和传统酚/仿(1∶1)法进行DNA的提取,采用PCR扩增和直接测序法分析梅花鹿的核苷酸多样性(Pi)、单倍型多样性(Hd)、遗传距离及系统进化关系。结果显示,试验所获序列长度为1 613bp,在第47、62、602、1 148、1 569、1 604bp处共检测到6个SNPs多态位点,占核苷酸总数的0.3%,碱基替换以碱基转换为主。通过6个SNPs多态位点确立了6种单倍型:Hap-1、Hap-2、Hap-3、Hap-4、Hap-5和Hap-6,其中Hap-4、Hap-5和Hap-6为新发现单倍型。遗传多样性由高至低依次为:指名亚种、屋久岛亚种、东北亚种、本州亚种、北海道亚种。各亚种间遗传距离最小为北海道亚种与本州亚种的距离(0.000056),最大为东北亚种与指名亚种的距离(0.001733)。基于单倍型利用邻接法构建系统进化树,结果显示,与日本梅花鹿相比,东北亚种与马鹿关系更近,东北亚种存在两大分支,日本梅花鹿各亚种间无明显分支,其他单倍型均是由Hap-3进化而来,单倍型最小跨度网络图与系统进化树一致。结果表明,东北梅花鹿存在两大父系类型,日本梅花鹿存在一个父系类型,单倍型Hap-3是日本梅花鹿的原始单倍型。

关键词：梅花鹿 Sry 基因遗传多样性父系类型

新发睾丸决定基因Sry突变导致46,XY性发育异常三例

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基础医学与临床 2018年第1期38卷 26-31页

作者：王曦聂敏刘兆祥茅江峰伍学焱中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院协和转化医学中心内分泌科国家卫计委内分泌重点实验室北京100730

目的在46,XY性发育异常疾病(46,XY DSD)患者中进行Sry突变检测,分析其发生频率,并总结检出Sry突变患者的临床特点。方法纳入2009-2014年在北京协和医院内分泌科就诊的46,XY DSD患者63例,收集详细临床资料,提取外周血基因组DNA,PCR特异... 详细信息

目的在46,XY性发育异常疾病(46,XY DSD)患者中进行Sry突变检测,分析其发生频率,并总结检出Sry突变患者的临床特点。方法纳入2009-2014年在北京协和医院内分泌科就诊的46,XY DSD患者63例,收集详细临床资料,提取外周血基因组DNA,PCR特异性扩增Sry并进行Sanger测序,通过与在线数据库比对确定突变,分析临床特点。结果 63例患者中共有三例检出Sry的3种新突变(约5%)。这三例患者社会性别均为女性,染色体核型为46,XY,有阴道和子宫结构,性激素符合高促性腺激素性性腺功能减退症。3种突变分别为:Pro131His、R76C和L35Afs*25。前2种错义突变位点位于HMG box核定位信号区,累及高度保守氨基酸,后1种为移码突变导致HMG box缺失,均严重破坏了Sry蛋白的重要功能结构域。结论该研究发现的3种Sry新突变是导致46,XY DSD的病因,Sry突变的检出率约为5%;对于46,XY DSD患者,建议均行Sry检测以明确病因。

关键词： Sry 性腺发育不良性发育异常疾病