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Peutz-Jeghers综合征stk11基因胚系突变及stk11、TGFβ1蛋白表达研究

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Peutz-Jeghers综合征STK11基因胚系突变及STK11、TGFβ1蛋白表达...

作者：李联杰南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景 Peutz-Jeghers综合征(PJS)是一种以皮肤粘膜黑斑、胃肠道多发息肉为特征的常染色体显性遗传病。Hemminki和Jenne几乎同时在PJS患者和家系中发现stk11(serine threonine kinase 11,丝氨酸/苏氨酸激酶11)基因胚系突变,证实该基... 详细信息

研究背景 Peutz-Jeghers综合征(PJS)是一种以皮肤粘膜黑斑、胃肠道多发息肉为特征的常染色体显性遗传病。Hemminki和Jenne几乎同时在PJS患者和家系中发现stk11(serine threonine kinase 11,丝氨酸/苏氨酸激酶11)基因胚系突变,证实该基因为本病的主要致病基因。胚系突变与遗传相关,在血液DNA水平即可发生。研究表明,大多数PJS患者存在stk11基因突变,突变形式以点突变和小片段缺失为主,预期效应是提前出现终止信号,产生截短型蛋白、导致蛋白激酶失活。目前发现stk11(亦称LKB1)蛋白在染色质重构、细胞周期、细胞极性以及能量代谢的应答调控等方面发挥重要作用,对包括TGFβ/smad通路、NF-κB信号通路、PTEN/磷脂酰肌醇3’磷酸激酶信号通路、G蛋白偶联信号通路在内的多条通路发挥了调节作用。此外,stk11蛋白能抑制细胞的增殖,促进凋亡。其表达水平的降低,可导致体细胞其它肿瘤相关基因突变的累积,最终致恶性肿瘤的发生。 TGFβ(转化生长因子β)是一种由二硫键连接的多肽二聚体,其家族成员在哺乳动物体内具有相当高的稳定性。在机体内TGFβ可规律地控制上皮细胞的生长,间接修复DNA损伤,激发细胞凋亡,调节干细胞功能,具有致癌及抑制肿瘤的双重特性。TGFβ/Smad通路是TGFβ信号转导的主要途径,TGFβ与其受体形成受体复合物,激活Smad蛋白,将信号转导至细胞核,行使转录因子的功能。TGFβ对不同的细胞有不同的效应,对于成纤维细胞,它的主要作用是刺激细胞分裂;而对于大多数上皮细胞,却起生长抑制作用。近年来,大量文献报道TGFβ信号通路的异常与肿瘤的发生、发展及转移等密切相关。该通路中任一元件的异常都可引起信号转导紊乱,使细胞逃避TGFβ介导的生长抑制效应,导致肿瘤发生。人类TGFβ家族包括TGFβ1、2、3,三蔓者高度同源,其基因分别位于19q13、1q41、14q24。TGFβ1是细胞和组织中最丰富的TGFβ成员,由于其启动子的调控复杂,其失控导致的疾病,包括肿瘤的形成也是最为多见。TGFβ1具有抑制细胞生长的负调节生物学效应,其表达或激活方面的缺陷可导致生长抑制作用消失和细胞恶性增殖。 Ki67(增殖细胞核抗原)是目前较为肯定的核增殖标志,开始表达于细胞周期的G1期,S期及G2期表达增加,M期达高峰,在分裂晚期很快消失,G0期无表达。Ki67半衰期短,脱离细胞周期后迅速降解。其表达量的变化可较客观反映肿瘤的增殖活性。国外最新研究表明,stk11基因等位缺失的PJS模型老鼠,胃肠道错构瘤息肉间质TGFβ信号缺陷,进而引起间质邻近的腺上皮细胞的增殖活跃,在野生型(无stk11缺失)老鼠胃肠粘膜则未发现此特点。研究者进而提出“stk11表达缺失→TGFβ信号调低→腺上皮过度增殖→促进PJ息肉形成”学说,认为人PJ息肉的形成与TGFβ信号的异常有密切关系。该学说为探索PJ息肉的形成机理提供了新的思路。目的 1、对PJS患者及家系stk11基因的胚系突变进行筛查,分析突变类型及可能的致病突变,探讨国人PJS家系stk11基因胚系突变的特点。 2、检测stk11及TGFβ1蛋白在PJ息肉组织上的表达,结合对PJ息肉增殖活性的研究,从组织蛋白水平对“stk11缺失→TGFβ信号调低→腺上皮过度增殖→促进PJ息肉形成”学说进行初步验证。材料与方法 1、PJS家系20例为实验组(其中患者16例,家族正常人4例),随机选择与PJS家系无关的健康人20名做为对照组,两组均抽取外周血5 ml,提取基因组DNA。针对人类stk11基因全部九个外显子分别设计引物,PCR扩增后纯化回收产物,DNA直接测序法检测stk11基因胚系突变情况,NCBI在线BLAST比对初步筛查,阳性者分别与家系健康人及正常对照组比较,分析PJS家系stk11基因胚系突变特点。 2、PJ息肉石蜡标本23例(来自11名患者胃肠道不同部位息肉)为实验组,正常胃肠粘膜组织10例为对照组。免疫组化SP法检测stk11、TGFβ1及Ki67蛋白表达部位及阳性率,阳性率以染色标记指数(Labeling index,LI)表示。另外选取结肠腺瘤标本12例、结肠癌标本11例,同法检测TGFβ1和Ki67蛋白表达部位及阳性率。 3、采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。原始数据如满足参数检验条件,两独立样本均数比较用t检验;多组独立样本均数比较采用方差分析(F检验);双变量相关性分析采用Pearson积差相关分析。如不满足参数检验条件,两独立样本差异比较采用Mannn-Whitney U检验;多组独立样本比较采用Kruskal-Wallis H检验;双变量相关性分析采用Spearman秩相关分析。以双侧α=0.05作为检验水准。检

关键词： Peulz-Jeghers综合征 stk11 胚系突变 TGFβ1 免疫组化蛋白表达

Peutz-Jeghers综合征家系LKB1/stk11基因突变分析

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江苏医药 2014年第6期40卷 647-649页

作者：周云陆建伟周益琴张晓梅朱明周兆飞钱普东江苏省肿瘤医院内科 210009 江苏省肿瘤医院放疗科 210009 江苏省肿瘤医院科研科 210009

目的分析Peutz-Jeghers综合征(PJS)家系致病基因的突变。方法收集一个PJS家系成员三代9例的外周血,采用多重连接信赖性探针扩增和PCR-DNA测序方法检测LKB1基因大片段缺失、碱基突变、碱基插入和缺失。同时收集250例正常人外周血,PCR-变... 详细信息

目的分析Peutz-Jeghers综合征(PJS)家系致病基因的突变。方法收集一个PJS家系成员三代9例的外周血,采用多重连接信赖性探针扩增和PCR-DNA测序方法检测LKB1基因大片段缺失、碱基突变、碱基插入和缺失。同时收集250例正常人外周血,PCR-变性高效液相色谱筛查验证突变位点在正常人群中的分布。生物信息学分析突变位点对编码蛋白质结构和功能的影响。结果先证者及另2例家系受累成员均携带LKB1基因C.48G>T的同义突变,其家系正常人和250例正常人群中无LKB1基因C.48G>T突变位点。生物信息学分析结果显示,此突变可导致新的剪接调控位点产生,使mRNA的剪接发生改变,最终影响蛋白质的结构和功能。结论 C.48G>T位点的突变可能是一种病理性胚系突变,mRNA的剪接调控异常改变可能是此家系的致病性因素。

关键词： Peutz-Jeghers综合征LKBl stk11 胚系突变

Peutz-Jeghers综合征息肉stk11基因突变及相关基因表达的研究

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Peutz-Jeghers综合征息肉STK11基因突变及相关基因表达的研究

作者：陈新杰第一军医大学

学位级别：硕士

Peutz-Jeghers综合征(PJS)又称黑斑息肉综合征，是一种以皮肤粘膜黑斑、胃肠道多发息肉及恶性肿瘤发生率增加为特征的常染色体显性遗传病。PJS患者消化道息肉发生恶变及在消化道外发生恶性肿瘤的风险较正常人群高，因此有必要对参与PJS... 详细信息

Peutz-Jeghers综合征(PJS)又称黑斑息肉综合征，是一种以皮肤粘膜黑斑、胃肠道多发息肉及恶性肿瘤发生率增加为特征的常染色体显性遗传病。PJS患者消化道息肉发生恶变及在消化道外发生恶性肿瘤的风险较正常人群高，因此有必要对参与PJS息肉的发生、恶变的因素进行研究。stk11基因是PJS相关致病基因，其突变可引起丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的失活，导致PJS息肉的发生，并在胃肠道外多个器官发生肿瘤。但只有50-70％的PJS存在stk11基因突变，PJS息肉的发生可能还有其他因素参与。目的：stk11基因第六、八外显子突变及APC、NGAL、COX-2在PJS息肉的发生、恶变中的作用。方法：(1)选取24例PJS患者28个息肉，20例正常结肠粘膜提取DNA进行stk11基因第六、八外显子扩增，经SSCP、DNA测序分析，了解突变情况。(2)以1个PJS息肉和1例正常结肠粘膜为研究对象，采用基因芯片筛选与PJS相关的基因。(3)选取24例PJS患者28个息肉，以23例大肠癌、20例正常结肠粘膜作对照，应用免疫组化SP法进行APC、NGAL、COX-2在PJS息肉表达检测，各组间率的比较应用x检验，以P＜0.05为有显著性差异。结果：(1)PJS患者中有两例(同一家系姐弟两人)均在stk11基因第六外显子857位胸腺苷酸(T)发生缺失，286位氨基酸由亮氨酸(CTG)变为精氨酸(CGA)，第八外显子未检测到突变。(2)经基因芯片筛选，在PJS息肉有效表达的基因有2756个。以Ratio大于2或小于0.5的数据作为有表达变化的基因数据，有效表达的基因中表达上调的有27个，表达下调的基因有155个，特异变化的基

关键词： Peutz-Jeghers综合征 stk11 APC NGAL COX-2

新的stk11互作蛋白LOH12CR1的筛选及鉴定

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新的STK11互作蛋白LOH12CR1的筛选及鉴定

作者：沈宏伟中南大学

学位级别：硕士

目的:PJS综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS)是一种常染色体显性遗传疾病,发病率为1/10000-12000。临床表现主要为多发性错构瘤样胃肠息肉以及皮肤粘膜色素沉着,其致病基因stk11位于人类常染色体19p13-3,跨度为23kb,包含10个外显子,由... 详细信息

目的:PJS综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS)是一种常染色体显性遗传疾病,发病率为1/10000-12000。临床表现主要为多发性错构瘤样胃肠息肉以及皮肤粘膜色素沉着,其致病基因stk11位于人类常染色体19p13-3,跨度为23kb,包含10个外显子,由433个氨基酸残基组成,具有调控细胞周期、调节细胞极性以及细胞基础能量代谢等重要功能。虽然大多数PJS患者的致病原因是由于stk11催化活性域的突变导致的激酶功能丧失,但是在部分PJS患者和散发肿瘤中,却存在stk11羧基端的突变,stk11羧基端共123个氨基酸残基,包括多个翻译后修饰位点,对stk11生物学功能的实现起着调节作用,机制尚未明确。方法:本研究利用GST(Glutathione S transferase)融合蛋白表达系统,构建了pGEX4T-2-stk11羧基端重组载体,在低温的条件下诱导了GST-stk11羧基端融合蛋白的表达,并利用Glutathione Sepharose获得高度可溶性GST-stk11羧基端融合蛋白,采用GST-pull down结合质谱分析的方法,筛选到stk11羧基端的可能互作蛋白LOH12CR1。LOH12CR1定位于人12号染色体上,为抑瘤基因的候选基因,且进化上的高度保守。结果:我们通过免疫共沉淀技术证实stk11激酶与LOH12CR1的互作关系;并利用哺乳动物双杂交系统显示两者之间非直接互作,需第三方参与。免疫荧光共定位实验发现stk11与LOH12CR1共定位。结论:stk11与LOH12CR1互作的发现为研究stk11的功能提供新的切入点。

关键词： stk11 stk11羧基端 LOH12CR1 免疫荧光免疫共沉淀

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stk11与黑斑息肉综合征

国外医学（外科学分册） 2001年第6期28卷 332-335页

作者：张卫孟荣贵第二军医大学附属长海医院普外科，上海200433

stk11是新近发现的一种抑癌基因 ,定位于 19p13 .3 ,stk11的异常被认为不但与黑斑息肉综合征的发病有关 ,还与此类患者恶性肿瘤发病率上升及部分散发肿瘤的发生有关。

关键词： stk11 黑斑息肉综合征肿瘤抑癌基因

stk11遗传多态性对二甲双胍治疗2型糖尿病疗效的影响

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中国合理用药探索 2020年第11期17卷 82-87页

作者：张景旺任鹤民张志琴薛磊鹤壁市人民医院药学部鹤壁458030 河南大学淮河医院内分泌科开封475000

目的:探究stk11遗传多态性对二甲双胍治疗2型糖尿病(T2DM)疗效的影响。方法:选取2015年7月~2017年12月期间本院收治的400例T2DM患者为糖尿病组,并选取同期本院收治的200例健康志愿者为健康组。比较糖尿病组与健康组受试者的临床特征与... 详细信息

目的:探究stk11遗传多态性对二甲双胍治疗2型糖尿病(T2DM)疗效的影响。方法:选取2015年7月~2017年12月期间本院收治的400例T2DM患者为糖尿病组,并选取同期本院收治的200例健康志愿者为健康组。比较糖尿病组与健康组受试者的临床特征与基因型和等位基因频率分布。400例患者中,94例患者治疗期间仅使用二甲双胍进行治疗,设为观察组。其中32例患者经治疗糖化血红蛋白(HbA1c)水平降低但超过基线的0. 5%以上设为应答组,其余62例患者设为无应答组,比较两组患者的临床特征,并分析stk11 rs2075604基因多态性和二甲双胍的疗效。结果:糖尿病组与健康组的性别、年龄、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)水平比较差异无统计学意义(P> 0. 05);糖尿病组患者的体质量指数(BMI)、Hb A1c、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PBG)、胰岛素(INS)水平高于健康组,C肽(CPO)、餐后C肽(PCPO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)水平低于健康组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。应答组与无应答组患者的性别、年龄、BMI、二甲双胍剂量、二甲双胍治疗后FBG和PBG水平比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。应答组患者基线HbA1c、FBG和PBG水平低于无应答组,二甲双胍治疗后HbA1c水平低于无应答组,且应答组患者FBG和PBG水平变化均值低于无应答组,Hb A1c平均变化低于无应答组,差异具有统计学意义(P stk11rs2075604多态性对二甲双胍的疗效有显著影响,TK11 rs2075604 GT携带者使用二甲双胍的疗效优于野生型,T等位基因者二甲双胍疗效更好(P stk11 rs2075604 GG基因型作为参照,GT/TT基因型与二甲双胍的疗效显著相关(P stk11 rs2075604多态性会影响二甲双胍治疗T2DM患者的临床疗效,主要与其T等位基因相关,GT+TT基因型比GG基因型对减少HbA1c的作用更显著。

关键词： 2型糖尿病二甲双胍 stk11 遗传多态性疗效

口周色素沉着-肠道息肉综合征stk11基因遗传学研究进展

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中国麻风皮肤病杂志 2010年第7期26卷 496-499页

作者：康晓静(综述) 田艳(综述) 康晓静(审校) 新疆维吾尔自治区人民医院乌鲁木齐830002 新疆医科大学

口周色素沉着—肠道息肉综合征(PJS)是一种少见的常染色体显性遗传性疾病。以胃肠道错构瘤息肉和口腔黏膜、手、足和唇部色素沉着为特征。stk11基因的胚系突变是PJS的主要致病因素,定位于染色体19p13.3,编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。stk1... 详细信息

口周色素沉着—肠道息肉综合征(PJS)是一种少见的常染色体显性遗传性疾病。以胃肠道错构瘤息肉和口腔黏膜、手、足和唇部色素沉着为特征。stk11基因的胚系突变是PJS的主要致病因素,定位于染色体19p13.3,编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。stk11基因是一种抑癌基因,目前研究显示stk11基因主要是通过对细胞周期的阻滞作用和对细胞凋亡的促进作用抑制肿瘤的发生。到目前为止,在人类基因突变数据库(HGMD)中,已经报道了145种PJS患者stk11基因的胚系突变及40种体细胞突变。其突变研究有待于进一步深入。

关键词：口周色素沉着-肠道息肉综合征 stk11 基因抑癌基因突变

广西壮族女性人群stk11基因rs2019107和rs741765遗传多态性研究

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右江民族医学院学报 2021年第5期43卷 622-626页

作者：凌永嫦仇雯丽王俊利李妹燕右江民族医学院附属医院广西百色533000 右江民族医学院广西百色533000

目的探讨stk11单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)rs2019107和rs741765在广西壮族正常女性人群中的分布情况,并与其他人群比较分析,为研究不同地区stk11基因突变与疾病易感性的关系提供参考依据。方法采用iMLDR... 详细信息

目的探讨stk11单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)rs2019107和rs741765在广西壮族正常女性人群中的分布情况,并与其他人群比较分析,为研究不同地区stk11基因突变与疾病易感性的关系提供参考依据。方法采用iMLDR技术检测351例广西壮族正常女性人群stk11基因rs2019107和rs741765位点的基因型,DNA测序技术验证,计算这两个位点的基因型和等位基因频率,并与千人基因组计划数据库中不同人群进行比较。结果广西壮族正常女性人群中rs2019107和rs741765主要以TC基因型(52.99%和50.71%)为主。rs2019107基因型与美国、欧洲和印度正常女性人群分布频率差异有统计学意义(Pstk11基因rs2019107和rs741765存在遗传多态性,其基因型和等位基因具有种族差异。

关键词： stk11 单核苷酸多态性位点基因多态性广西女性

中国汉族Peutz-Jeghers综合征患者stk11的两个新突变

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中国汉族Peutz-Jeghers综合征患者STK11的两个新突变