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satb1基因与乳腺癌的关系研究

SATB1基因与乳腺癌的关系研究

作者：郭宝平广西医科大学

学位级别：硕士

第一部分:satb1表达水平与乳腺癌临床病理特征的关系目的:利用免疫组化的方法检测satb1蛋白在乳腺癌组织中的表达,并对satb1表达水平与临床病理特征间的关系进行统计学分析,发现其相关性。方法:收集2001年1月到2003年12月,在广西医科大... 详细信息

第一部分:satb1表达水平与乳腺癌临床病理特征的关系目的:利用免疫组化的方法检测satb1蛋白在乳腺癌组织中的表达,并对satb1表达水平与临床病理特征间的关系进行统计学分析,发现其相关性。方法:收集2001年1月到2003年12月,在广西医科大学附属肿瘤医院接受手术治疗的原发性乳腺癌组织蜡块292例,采用免疫组织化学方法检测患者肿瘤组织satb1的表达情况,通过χ2检验分析satb1表达水平与临床病理特征间的相关性。结果:最终纳入有效分析的病理蜡块数为208例。免疫组化结果显示,satb1阴性有56例(26.9%),+有26例(12.5%),++为80例(38.5%),+++为46例(22.1%)。χ2检验显示,satb1的表达水平与ER、PR、HER2及年龄之间没有统计学差异(p>0.05);而satb1表达强度在(++)以上,与淋巴结状态,T分期之间具有显著相关性(psatb1的表达水平与激素受体状态、HER2表达及年龄之间无相关性,与淋巴结转移,T分期之间具有相关性。第二部分:利用生物信息学技术研究乳腺癌差异基因表达及其与satb1基因的调控关系目的:利用生物信息学的方法筛选乳腺癌组织与癌旁组织间的差异表达基因,探讨这些基因与satb1基因之间的表达及调控关系。方法:在GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中找到乳腺癌的相关基因芯片数据,利用BRB-ArrayTools软件包对其进行统计学分析,找到乳腺癌组织相关的差异表达基因;利用DAVID在线数据库对这些差异表达基因进行生物学分析。结果:在乳腺癌组织中找到70条差异表达基因,上调28条,下调42条。这些差异表达基因的功能大致分为:转录调控、细胞信号传导、细胞周期、细胞粘附、细胞凋亡等。与satb1共同上调的基因主要为Collagen(胶原蛋白)基因家族;satb1基因与其他共同上调基因之间未见相互调控关系。结论:利用生物信息学的方法成功的找到了与satb1基因共同表达的基因群,为进一步了解satb1基因与其共表达基因间的关系提供了前提。第三部分:satbl基因克隆及pEGFP-N1-satb1真核表达载体的构建目的:克隆扩增satb1开放阅读框基因片段,构建其真核表达重组质粒,为后续研究其功能以及与其他基因间的关系做准备。方法:以satb1基因的cDNA文库(pCMV6-XL6-satb1)为模板,通过一对satb1的特异性引物扩增出目的基因,PCR产物与克隆载体(pGEM-T-Easy)连接后转化到大肠杆菌DH5a,然后对单个菌落进行菌落PCR,酶切及测序鉴定。将测序正确的satb1亚克隆入真核表达载pEGFP-N1,该重组载体转化到大肠杆菌DH5a后进行菌落PCR、酶切及测序鉴定。结果:测序结果与Genbank(BC001744.1)序列完全一致。构建的重组真核表达载体经鉴定证实satb1基因已完全正确亚克隆到pEGFP-N1。结论:成功克隆了人核基质结合蛋白基因satb1,并构建了具有报告基因-增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组真核表达裁pEGFP-N1-satb1,为以后研究satb1的功能以及与其他基因间的关系奠定基础。

关键词：乳腺癌 satb1 免疫组化临床病理特征乳腺癌生物信息学差异表达基因 satb1 Collagen satb1基因基因克隆真核载体

人satb1基因5′上游序列的转录激活功能分析

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 221-226页

作者：李颖戴冰冰蔡蓉仇全于丽莉卢健上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室上海200025

在对人satb1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中satb1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由satb1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 ... 详细信息

在对人satb1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中satb1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由satb1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 -pGL3 SP2 94 6 luc ,pGL3 SP1718 luc和pGL3 SP75 1 luc ,分别瞬时转染JurkatT ,K5 6 2 ,U937和HeLa细胞 ,通过测定荧光素酶的表达活性 ,观察satb1基因 5′上游序列片段 3个删除突变体在不同细胞内活性的差异 .结果显示 ,satb1上游序列- 2 95 5 - 9在 4种细胞中的转录激活能力为U937>JurkatT >K5 6 2 ,在HeLa细胞中基本无激活 ,提示satb1的转录激活可能具有一定的细胞类型特异性 .3种 5′删除突变体转录激活性由大至小顺序为 - 76 0 - 9>- 2 95 5 - 9>- 172 7 - 9,提示satb1的核心启动子可能存在于其 5′上游序列的- 76 0至 - 9bp区域中 .

关键词： satb1基因启动子报告基因分析转录调控

靶向前列腺癌并携带satb1基因shRNA溶瘤腺病毒的构建

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中华男科学杂志 2010年第8期16卷 679-683页

作者：毛立军郑骏年李望王军起陈家存孙晓青徐州医学院附属医院泌尿外科江苏徐州221002

目的:构建DD3启动子调控并携带satb1基因shRNA溶瘤腺病毒,研究其对前列腺癌的特异抗肿瘤作用。方法:以pSilencer3.1-satb1为模板,通过PCR扩增出satb1-shRNA表达框并克隆至pZD55载体,构建重组质粒pZD55-satb1-shRNA。EcoRⅤ和XbaⅠ分别酶... 详细信息

目的:构建DD3启动子调控并携带satb1基因shRNA溶瘤腺病毒,研究其对前列腺癌的特异抗肿瘤作用。方法:以pSilencer3.1-satb1为模板,通过PCR扩增出satb1-shRNA表达框并克隆至pZD55载体,构建重组质粒pZD55-satb1-shRNA。EcoRⅤ和XbaⅠ分别酶切pZD55-satb1-shRNA和pZXC2-DD3-E1A,将目的片段连接重组,获得质粒pDD3-ZD55-satb1,将其与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染293细胞。PCR鉴定正确者即为溶瘤腺病毒DD3-ZD55-satb1。扩增,纯化,测病毒滴度。结晶紫染色观察对前列腺癌细胞毒性;Western印迹检测E1A在列腺癌细胞中的表达;RT-PCR和Western印迹检测列腺癌细胞中satb1基因沉默效果。结果:成功构建DD3启动子调控同时携带satb1-shRNA的溶瘤腺病毒DD3-ZD55-satb1,初步证实DD3-ZD55-satb1复制具有高度的前列腺癌靶向性和特异的satb1基因沉默效果。结论:成功构建的溶瘤腺病毒DD3-ZD55-satb1为进一步体内外研究其对前列腺癌的治疗作用奠定基础。

关键词： DD3启动子 satb1基因 RNA干扰溶瘤腺病毒前列腺癌

沉默satb1基因对前列腺癌DU145细胞侵袭力的影响

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中华实验外科杂志 2011年第12期28卷 2043-2045页

作者：毛立军王逢义李望王军起郑骏年陈家存徐州医学院附属医院泌尿外科 221002

目的通过RNA干扰（RNAi）沉默特异性核基质结合区结合蛋白-1（satb1）基因的表达，观察对前列腺癌DU145细胞增殖及侵袭力的影响。方法构建satb1基因特异性短发卡RNA（shRNA）表达载体pGPH1／GFP／Neo-satb1，用Lipofectamine^TM2000将pG... 详细信息

目的通过RNA干扰（RNAi）沉默特异性核基质结合区结合蛋白-1（satb1）基因的表达，观察对前列腺癌DU145细胞增殖及侵袭力的影响。方法构建satb1基因特异性短发卡RNA（shRNA）表达载体pGPH1／GFP／Neo-satb1，用Lipofectamine^TM2000将pGPH1／GFP／Neo—satb1转染人前列腺癌DU145细胞，以空质粒pGPH1／GFP／Neo及未转染的细胞作对照。在转染后24、48、72h收集样本，采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测satb1mRNA表达、噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖、Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果PCR及测序鉴定表明质粒pGPH1／GFP／Neo—satb1构建成功。转染pGPH1／GFP／Neo—satb124、48、72h后，DU145细胞satb1mRNA表达水平为（53．0±4．0）％、（49．3±3．1）％、（34．1±4．3）％，M1Tr表明：pGPH1／GFP／Neo—satb1组细胞增殖抑制率均显著低于空质粒组、未转染细胞组；Transwell侵袭实验结果显示，转染pGPH1／GFP／Neo—satb1组侵袭细胞数为34．2±4．2，显著低于两对照组（P〈0．05）。结论靶向satb1基因的RNA干扰可抑制前列腺癌DU145细胞增殖和侵袭力。

关键词：前列腺癌细胞侵袭 satb1基因

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satb1基因与食管癌关系的研究进展

当代医药论丛 2023年第17期21卷 79-82页

作者：闫睿怡何琳莉谢佳轩熊典南充市川北医学院附属医院四川南充637000 川北医学院四川南充637000

食管癌是最具侵袭性的上消化道恶性肿瘤之一。食管癌的发病原因不明,病情复杂,预后不良,严重威胁着我国居民的健康和生命,因此探索食管癌早期诊疗的新方法显得尤为重要。近些年来,有很多研究表明,特殊AT富集序列结合蛋白1(special AT-ri... 详细信息

食管癌是最具侵袭性的上消化道恶性肿瘤之一。食管癌的发病原因不明,病情复杂,预后不良,严重威胁着我国居民的健康和生命,因此探索食管癌早期诊疗的新方法显得尤为重要。近些年来,有很多研究表明,特殊AT富集序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1,satb1)作为一种转录调节基因,与食管癌发生发展的多个阶段以及临床诊断和治疗密切相关。satb1在食管癌中的异常表达可能是导致食管癌预后不良的因素,故其有望成为新的相关治疗靶点。因此,本文欲从食管癌的发生、发展、转归、诊疗等角度,介绍satb1与食管癌关系的最新研究成果,为食管癌的相关研究及临床靶向、免疫治疗提供新思路。

关键词： satb1基因食管癌细胞迁移和侵袭

RNA干扰satb1基因对乳腺癌干细胞Wnt信号通路的影响

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RNA干扰SATB1基因对乳腺癌干细胞Wnt信号通路的影响

作者：谢辉南昌大学

学位级别：硕士

背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，复发和转移是导致乳腺癌治疗失败的主要原因。研究显示肿瘤中存在着少量肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSC），CSC是肿瘤发生、转移和复发的根源之一。CSC受一系列信号转导通路的调控，Wnt/β-c... 详细信息

背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，复发和转移是导致乳腺癌治疗失败的主要原因。研究显示肿瘤中存在着少量肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSC），CSC是肿瘤发生、转移和复发的根源之一。CSC受一系列信号转导通路的调控，Wnt/β-catenin通路是其中的一种。satb1（special AT rich sequence bindingprotein，satb1）是一种组织特异性表达的核基质结合蛋白，satb1通过调控Wnt/β-catenin通路影响肿瘤发生、浸润、转移及复发。目的：采用RNAi抑制乳腺癌干细胞satb1表达，观察乳腺癌干细胞wnt-1、β-catenin的变化，研究satb1对乳腺癌干细胞Wnt/β-catenin通路研究的影响。方法： 1根据GenBank提供的satb1基因序列，利用siRNA的合成原则，合成4组含干扰satb1序列并包装至慢病毒载体。 2为对照需要及摸索感染条件，将不含干扰序列的空包病毒转染MCF-7细胞得MCF-7/siControl作为阴性对照。 34组慢病毒载体分别转染MCF-7细胞，然后采用实时荧光定量PCR和Western blot，检测4组MCF-7细胞satb1mRNA和蛋白，筛选出satb1基因抑制效果最好的MCF-7细胞(MCF-7/sisatb1)。 4根据乳腺癌干细胞的特异性免疫标记CD44+CD24-，通过流式细胞术分选出MCF-7干细胞、MCF-7/siControl干细胞和MCF-7/sisatb1干细胞。 5实时荧光定量PCR检测上述三组乳腺癌干细胞wnt-1、β-catenin mRNA表达。结果： 1成功构建4组人satb1基因干扰的重组慢病毒：satb1/GV115-RNAi#1、satb1/GV115-RNAi#2、satb1/GV115-RNAi#3、satb1/GV115-RNAi#4，经包装产生的病毒滴度均大于1.0×108TU/ml。 2空包病毒载体及上述4组satb1基因干扰的重组慢病毒分别转染MCF-7细胞，2-3天后GFP荧光表达均＞70%，证实重组慢病毒转染MCF-7成功。MOI=20，添加完全ENi.S组的转染效率最高为94.85%。 34种重组慢病毒感染的MCF-7细胞中，satb1/GV115-RNAi#4组MCF-7细胞的satb1mRNA相对表达量0.397±0.12，satb1蛋白标化后的净光密度值为0.5332±0.027，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。satb1/GV115-RNAi#4组MCF-7细胞的satb1mRNA抑制率为60.3%，蛋白抑制率46.68%，符合RNA干扰要求（大于30%），将satb1/GV115-RNAi#4MCF-7细胞作为MCF-7/sisatb1。 4流式细胞仪检测MCF-7、MCF-7/siControl和MCF-7/sisatb1细胞标记CD44+CD24-的表达。结果：①MCF-7：3.05%;②MCF-7/siControl：2.62%;③MC F-7/sisatb1：0.79%。然后采用流式细胞分选术成功分选MCF-7、MCF-7/siControl和MCF-7/sisatb1干细胞，并提取mRNA。 5实时荧光定量PCR检测MCF-7干细胞、 MCF-7/siControl干细胞和MCF-7/sisatb1干细胞的satb1、 wnt-1、 β-catenin的表达，结果：①MCF-7/sisatb1干细胞satb1基因mRNA相对表达量为0.164±0.17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MCF-7/sisatb1干细胞satb1抑制率86.3%。②MCF-7/sisatb1干细胞wnt-1基因mRNA相对表达量为0.367±0.17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MCF-7/sisatb1干细胞wnt-1抑制率63.3%。③MCF-7/sisatb1干细胞β-catenin基因mRNA相对表达量为0.307±0.17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MCF-7/sisatb1干细胞β-catenin抑制率69.3%。结果显示MCF-7/sisatb1组干细胞的satb1、wnt-1、β-catenin的mRNA表达降低。结论： RNAi抑制乳腺癌干细胞satb1表达，可以影响乳腺癌干细胞Wnt通路中wnt-1、β-catenin的

关键词：慢病毒转染 RNA干扰 satb1基因 Wnt/β-catenin信号通路实时荧光定量PCR Western blot 流式细胞术

satb1、hTERT基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义

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中华实验外科杂志 2011年第4期28卷 603-604页

作者：毛立军李望杨春华王军起陈家存郑骏年徐州医学院附属医院泌尿外科江苏221002

目的探讨特异性核基质结合区结合蛋白-1（satb1）、人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学技术检测前列腺癌和前列腺增生症组织中satbl、hTERT基因的表达。结果60例前列腺癌组织satb-... 详细信息

目的探讨特异性核基质结合区结合蛋白-1（satb1）、人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学技术检测前列腺癌和前列腺增生症组织中satbl、hTERT基因的表达。结果60例前列腺癌组织satb-1阳性表达率86．7％，而30例前列腺增生组织中无阳性表达，差异有统计学意义（P〈0．01）；其中，前列腺癌转移组100．0％阳性表达，而未转移组73．3％阳性表达，satb-1表达在有无转移组间差异有统计学意义（P〈0．01）。前列腺癌组织中hTERT阳性表达率为88．3％，前列腺增生组织中阳性率为20．0％，差异有统计学意义（P〈0．01）；而前列腺癌转移组和未转移组hTERT阳性率分别为90．0％和86．7％，差异无统计学意义（P〉0．05）。相关分析提示，前列腺癌和前列腺增生组织中satb-1蛋白与hTERT蛋白表达无明显相关。结论satb1、hTERT基因的表达可能与前列腺癌的发生和转移相关，联合检测satb1、hTERT基因对评价前列腺癌进展有一定的临床意义。

关键词：前列腺癌 satb1基因 hTERT基因

大白猪×民猪F2设计资源群体CD4+白细胞功能性状全基因组关联研究

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大白猪×民猪F2设计资源群体CD4+白细胞功能性状全基因组关联研究

作者：宋欣四川农业大学

学位级别：硕士

随着养猪业规模化、集约化的不断完善及猪育种工作的持续开展,养猪带来的经济效益在我国经济发展中起到了越来越重要的作用。但随着猪生长速度越来越快,其抗病性也逐渐下降,日益增高的发病率造成了极大的经济损失。因此,针对抗病性状、... 详细信息

随着养猪业规模化、集约化的不断完善及猪育种工作的持续开展,养猪带来的经济效益在我国经济发展中起到了越来越重要的作用。但随着猪生长速度越来越快,其抗病性也逐渐下降,日益增高的发病率造成了极大的经济损失。因此,针对抗病性状、免疫性状开展猪的育种工作,已经成为了当前的主要育种目标。本试验构建了大白猪×民猪F2设计资源群体共369头,成功获得F2代个体294头,F2代个体于240±7d采集血样。采用全基因组关联研究(GWAS)的方法,在猪的全基因组中检测与白细胞功能性状CD4+显著关联SNP位点,挖掘SNP位点附近的候选基因并开展初步的功能验证。结果发现猪13号染色体上存在两个与CD4+性状关联达到染色体水平显著的SNP位点ASGA0055625和ALGA0067672,这两个SNP位点分别位于2018446bp和4363721bp。距离这两个SNP位点最近的基因satb1(距ALGA0067672SNP位点35569bp)可作为CD4+'状主效候选基因。对脾脏和淋巴组织mRNA进行实时荧光定量PCR方法检测发现,极高组(>18%)和极低组(satb1基因表达差异不显著。对satb1基因的外显子进行多态性分析发现,在第5外显子上存在一个同义突变位点(g.23527T>C),第7外显子上存在一个同义突变(g.45814C>T)和非同义突变位点(g.45830G>A)。非同义突变位点g.45830G>A与免疫相关性状指标关联分析发现,其与血液中CD4+性状关联显著(Psatb1基因可作为白细胞功能性状CD4+的候选基因,且其第7外显子非同义突变位点g.45830G>A可作为候选功能突变位点开展进一步研究工作。

关键词：全基因组关联研究 CD4+ 猪 satb1基因 SNP

satb1在鼻咽癌中的表达和意义及其与鼻咽癌化疗耐药和放疗抵抗的关系

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SATB1在鼻咽癌中的表达和意义及其与鼻咽癌化疗耐药和放疗抵抗的...

作者：潘志勇福建医科大学

学位级别：硕士

目的检测富含AT序列的特异结合蛋白1（specialAT-rich sequence binding protein1，satb1）的mRNA在高成瘤高转移鼻咽癌细胞株（SUNE-1亚株-5-8F）、只成瘤不转移鼻咽癌细胞株（SUNE-1亚株-6-10B）、正常人永生化鼻咽上皮细胞株（NP... 详细信息

目的检测富含AT序列的特异结合蛋白1（specialAT-rich sequence binding protein1，satb1）的mRNA在高成瘤高转移鼻咽癌细胞株（SUNE-1亚株-5-8F）、只成瘤不转移鼻咽癌细胞株（SUNE-1亚株-6-10B）、正常人永生化鼻咽上皮细胞株（NP69-SV40T）及satb1蛋白在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）组织中的表达，探讨satb1的表达与NPC临床病理因素的关系。方法采用荧光定量RT-PCR（FQ-RT-PCR）的方法检测5-8F、6-10B及NP69-SV40T细胞中satb1的mRNA表达水平;采用免疫组化法检测72例原发性NPC和30例鼻咽黏膜慢性炎症组织（chronic nasopharyngitis tissue，CNT）中satb1蛋白的表达，并对检测结果与NPC的临床病理参数进行统计学分析。结果 1.成功建立实时荧光定量RT-PCR的检测方法，扩增效率高（＞90%）。satb1mRNA在5-8F细胞中的表达较NP69-SV40T细胞中的表达稍低，两者间差异无显著性（P＞0.05），5-8F细胞的表达量为6-10B细胞的4.09倍，两者间比较差异有显著性（P＜0.05）。 2. satb1染色阳性颗粒定位于细胞核。在NPC和CNT中satb1蛋白的阳性表达率分别为52.8%（38/72）和13.3%（4/30），与CNT比较，NPC中satb1表达上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。伴有淋巴结转移和不伴淋巴结转移的NPC组织中satb1阳性表达率分别为64.3%（27/42）和36.7%（11/30），有远处转移和无远处转移的NPC组织的阳性表达率分别为88.9%（8/9）和47.6%（30/63），两者比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。NPC原发灶中satb1高表达与患者性别、年龄、T分级和临床分期无关（P＞0.05），与N分级及M分级有关（P＜0.05）。结论 1.5-8F细胞（高成瘤高转移细胞株）中satb1mRNA的表达水平显著高于6-10B细胞（只成瘤不转移细胞株）中satb1mRNA的表达水平，可以说明satb1mRNA的表达水平与鼻咽癌细胞株的侵袭转移能力呈正相关。 ***组织中存在着satb1蛋白的高表达，且表达水平显著高于CNT组织，提示satb1在NPC的发生发展中可能起着重要作用。 ***1蛋白在NPC组织中的表达水平与淋巴结转移和远处转移正相关，提示satb1可能参与NPC的侵袭转移。目的研究顺铂（DDP）及X射线对鼻咽癌5-8F细胞satb1mRNA表达水平的影响，并探讨其相关的意义。方法以噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度DDP处理不同时间后5-8F细胞生存率的变化;用DDP及X射线干预5-8F细胞后，提取细胞总RNA，采用荧光定量RT-PCR方法检测satb1mRNA表达情况。结果 MTT实验表明顺铂对鼻咽癌5-8F细胞的增殖抑制存在剂量时间效应关系。顺铂及X射线处理鼻咽癌5-8F细胞后，satb1mRNA水平均显著增高（P＜0.05），差异有统计学意义。satb1mRNA在鼻咽癌5-8F细胞中的表达变化与顺铂的作用浓度、作用时间及X射线之间无明显的剂量时间效应关系（P＞0.05。）结论鼻咽癌5-8F细胞经顺铂及X射线作用后，satb1mRNA表达发生上调，推测satb1可能参与了鼻咽癌的化疗耐药和放疗抵抗。

关键词：鼻咽肿瘤 satb1基因免疫组织化学荧光定量RT-PCR 顺铂 X 射线