靶向前列腺癌并携带SATB1基因shRNA溶瘤腺病毒的构建

作     者：毛立军 郑骏年 李望 王军起 陈家存 孙晓青 MAO Li-jun;ZHENG Jun-nian;LI Wang;WANG Jun-qi;CHEN Jia-cun;SUN Xiao-qing

作者机构：徐州医学院附属医院泌尿外科江苏徐州221002 

出 版 物：《中华男科学杂志》 (National Journal of Andrology)

年 卷 期：2010年第16卷第8期

页      面：679-683页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(3070099) 江苏省自然科学基金(BK2008122) 

主　　题：DD3启动子 SATB1基因 RNA干扰 溶瘤腺病毒 前列腺癌 

摘      要：目的:构建DD3启动子调控并携带SATB1基因shRNA溶瘤腺病毒,研究其对前列腺癌的特异抗肿瘤作用。方法:以pSilencer3.1-SATB1为模板,通过PCR扩增出SATB1-shRNA表达框并克隆至pZD55载体,构建重组质粒pZD55-SATB1-shRNA。EcoRⅤ和XbaⅠ分别酶切pZD55-SATB1-shRNA和pZXC2-DD3-E1A,将目的片段连接重组,获得质粒pDD3-ZD55-SATB1,将其与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染293细胞。PCR鉴定正确者即为溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SATB1。扩增,纯化,测病毒滴度。结晶紫染色观察对前列腺癌细胞毒性;Western印迹检测E1A在列腺癌细胞中的表达;RT-PCR和Western印迹检测列腺癌细胞中SATB1基因沉默效果。结果:成功构建DD3启动子调控同时携带SATB1-shRNA的溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SATB1,初步证实DD3-ZD55-SATB1复制具有高度的前列腺癌靶向性和特异的SATB1基因沉默效果。结论:成功构建的溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SATB1为进一步体内外研究其对前列腺癌的治疗作用奠定基础。