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用real-time RT-PCR技术检测肺癌淋巴结的隐匿性微小转移

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肿瘤防治研究 2005年第12期32卷 771-774页

作者：王晓陶 W.Sienel B.Passlick 北京天坛医院呼吸内科 100050 德国慕尼黑大学附属外科医院外科

目的评价一种简单客观敏感的检测淋巴结中扩散的肿瘤细胞方法:realtimeRTPCR。方法从手术的30例非小细胞肺癌病人获得纵隔淋巴结100组,分别进行常规病理学检查和realtimeRTPCR检测CK19mRNA的表达。从12例手术的非癌症病人获得纵隔淋巴... 详细信息

目的评价一种简单客观敏感的检测淋巴结中扩散的肿瘤细胞方法:realtimeRTPCR。方法从手术的30例非小细胞肺癌病人获得纵隔淋巴结100组,分别进行常规病理学检查和realtimeRTPCR检测CK19mRNA的表达。从12例手术的非癌症病人获得纵隔淋巴结18组作为正常对照,用15例肺癌病人原发肿瘤组织作为阳性对照。结果在94(94.0%)组经组织病理学检查未发现肿瘤细胞的淋巴结中,用realtimeRTPCR在26(27.7%)组检测到CK19mRNA的表达。6组经组织病理学检查有肿瘤细胞扩散的淋巴结中全部检测到CK19mRNA的表达。组织病理学检查22例病人为pN0期,用realtimePCR方法在这些病人中发现13(59.1%)例病人淋巴结有微小扩散的肿瘤细胞。结论应用realtimeRTPCR检测CK19mRNA的表达是一种在纵隔淋巴结发现扩散肿瘤细胞敏感而特异的方法。

关键词：肺癌隐匿性微小转移 real—time RT—PCR 角质蛋白19

real—time RT—PCR检测PD—L1 mRNA在肠癌中的表达

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常州实用医学 2008年第6期24卷 356-358页

作者：虞华明谈炎陈陆俊常州市第一人民医院江苏213003

目的探讨肠癌组织中共刺激分子PD—L1mRNA表达水平与肠癌患者临床病理参数的关系。方法real—timeRT—PCR和检测21例肠癌及其临近正常组织中PD～L1和内参照GAPDH的mRNA表达水平，采用2^-△△Ct法对PD—L1mRNA表达水平进行分析。结果肠... 详细信息

目的探讨肠癌组织中共刺激分子PD—L1mRNA表达水平与肠癌患者临床病理参数的关系。方法real—timeRT—PCR和检测21例肠癌及其临近正常组织中PD～L1和内参照GAPDH的mRNA表达水平，采用2^-△△Ct法对PD—L1mRNA表达水平进行分析。结果肠癌组织中PD—L1mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织（W=127．0，P=0．0281），肠癌组织中PD—L1mRNA表达水平与NM23负相关（P=0．0232）。结论PD—L1参与肠癌的肿瘤免疫应答，检测肠癌组织中B7一H3的mRNA表达水平对评价肠癌患者预后具有参考价值。

关键词： PD—L1 real—time RT—PCR 肠癌

金黄色葡萄球菌基因表达的DNA扣除法real-time RT PCR相对定量分析

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微生物学报 2008年第4期48卷 526-531页

作者：相丽姜毓君刘伟毕宇涵赵凤霍贵成东北农业大学乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030

【目的】金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值。【方法】对制备好的反转录(RT... 详细信息

【目的】金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值。【方法】对制备好的反转录(RT,含有cDNA和DNA)和非反转录(RT—,仅含DNA)样品进行real-time PCR检测,根据经典(1+E)—△△Ct相对定量算法并结合PCR效率公式建立一种基因表达相对定量分析的DNA扣除法,将得到的Ct值转换为各样品含量,从RT样品中扣除RT—样品的量,无需DNaseⅠ酶解处理就可以去除DNA的影响,RT—样品的检测结果还可同时作为稳定的DNA内参。【结果】采用以上方法分析金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(sea)、16S rRNA和RNAⅢ的表达情况,在含有葡萄糖的NB培养基中sea的相对转录水平随着葡萄糖浓度的增大而升高,RNAⅢ的相对转录水平随葡萄糖浓度的变化而产生小幅度的波动,16S rRNA在菌体生长初期时的表达量较为稳定;与绝对定量法比较,结果差异较小(均小于15%),且差异不显著(p>0.05)。【结论】这种基于DNA扣除法的real-time RT PCR相对定量方法可以有效的对金黄色葡萄球菌的基因表达进行分析。

关键词：金黄色葡萄球菌 real—time RT PCR 相对定量内参 DNA扣除法

real-time PCR和PCR方法快速检测犬细小病毒

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中国兽医学报 2009年第1期29卷 36-40页

作者：熊炜李健邱璐高莉华蒋静李春阳黄忠荣胡永强上海出入境检验检疫局上海200135 句容农业学校江苏句容212400

为适应出入境口岸对进出境宠物快速检疫的需要,本研究在建立PCR方法检测犬细小病毒(CPV)的基础上,进一步采用Taqman探针技术建立了快速检测CPV的real-time PCR方法。通过灵敏度对比试验,证实real-time PCR方法比PCR方法检测灵敏度显著... 详细信息

为适应出入境口岸对进出境宠物快速检疫的需要,本研究在建立PCR方法检测犬细小病毒(CPV)的基础上,进一步采用Taqman探针技术建立了快速检测CPV的real-time PCR方法。通过灵敏度对比试验,证实real-time PCR方法比PCR方法检测灵敏度显著提高。通过对大量不同采样部位样品的检测证实,本研究建立的real-time PCR和PCR方法具有较高的可靠性,并可显著提高CPV的阳性检出率。

关键词：犬细小病毒 real—time PCR Taqman探针 PCR 犬犬病

real-time RT-PCR检测西尼罗病毒一步法的建立

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中国人兽共患病学报 2008年第12期24卷 1107-1110页

作者：陈晓曾志磊朱丹彭丹余建萍谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的建立针对西尼罗病毒E基因的一步法real-time RT-PCR检测方法,用于西尼罗病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对西尼罗病毒的保守基因E设计引物和探针,建立一步法real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果本研究建... 详细信息

目的建立针对西尼罗病毒E基因的一步法real-time RT-PCR检测方法,用于西尼罗病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对西尼罗病毒的保守基因E设计引物和探针,建立一步法real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果本研究建立的一步法real-time RT-PCR方法可以特异性检测出西尼罗病毒,不与日本脑炎病毒及其他病毒产生交叉反应。该方法的最低检出浓度为3.6×102copies/μl,标准曲线的线性范围为3.6×102～3.6×107copies/μl。结论本研究建立的一步法real-time RT-PCR方法敏感性和特异性较高,且不易出现污染引起的假阳性结果,适合用于西尼罗病毒感染样本的检测。

关键词：西尼罗病毒 real—time RT—PCR 一步法 Taqman探针快速检测

real-time qPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1674-1678页

作者：黄磊张素梅张云赵青玉宁长申张龙现河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBR Green实时荧光定量PCR(real-time qPCR)方法,... 详细信息

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBR Green实时荧光定量PCR(real-time qPCR)方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBR Green real-time qPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好(R2=0.998),卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real-time qPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。

关键词： real—time qPCR 贝氏隐孢子虫鸡胚

real-time PCR探针法检测食物中毒中沙门菌方法建立及应用

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中国卫生检验杂志 2012年第1期22卷 16-18页

作者：宋士利檀薇张丽浙江省杭州余杭区疾病预防控制中心杭州311100

目的:建立食物中毒中沙门菌real-time PCR检测方法并将其应用。方法:选取沙门菌侵袭蛋白A基因(in-vA)进行引物和探针设计,并对反应条件不断优化,进行灵敏度和特异度测试,建立检测沙门菌的real-time PCR方法。结果:DNA灵敏度检测沙门菌达... 详细信息

目的:建立食物中毒中沙门菌real-time PCR检测方法并将其应用。方法:选取沙门菌侵袭蛋白A基因(in-vA)进行引物和探针设计,并对反应条件不断优化,进行灵敏度和特异度测试,建立检测沙门菌的real-time PCR方法。结果:DNA灵敏度检测沙门菌达到56 fg/PCR体系,菌液灵敏度检测沙门菌达到9 CFU/ml,特异度100%。用建立的方法对四起食物中毒、2000份健康从业人员体检肛拭样品、80份食品监测样品进行了检测,共检出沙门菌15株。结论:该方法具有高灵敏性和高特异性的特点,可以应用在沙门菌引起的食物中毒的快速检测中。

关键词： real—time PCR 沙门菌食物中毒

赤羽病病毒real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用

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黑龙江畜牧兽医 2010年第7期 119-121页

作者：张吉红闻伟刚李如松黄素文倪健波王建峰宁波出入境检验检疫局

为了研究赤羽病病毒的检测方法，试验根据GenBank中已发表的赤羽病病毒（Akabanevirus，AKAV）的s基因序列建立了检测AKAV的real-timeRT—PCR方法。结果表明：该方法对AKAV的检测有高度的特异性，与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、传染性牛... 详细信息

为了研究赤羽病病毒的检测方法，试验根据GenBank中已发表的赤羽病病毒（Akabanevirus，AKAV）的s基因序列建立了检测AKAV的real-timeRT—PCR方法。结果表明：该方法对AKAV的检测有高度的特异性，与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV）等13种病毒均无交叉反应；real—timeRT—PCR能够扩增稀释度为1×10^-5的病毒RNA（核酸含量约1．18ng／μL），比普通RT—PCR高出1000倍；用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料，均未检测到阳性样本；AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。

关键词：赤羽痛病毒 real—time RT—PCR 核酸检测

real-time PCR检测Vimentin基因在脊髓钝挫伤大鼠中的表达

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四川解剖学杂志 2014年第1期22卷 9-11页

作者：钱保江夏庆杰王廷华昆明医科大学神经科学研究所昆明650031 四川大学华西校区神经疾病转化中心成都610041

目的使用real-time PCR检测脊髓钝挫伤后不同时间点Vimentin基因表达变化。方法 SD成年雌性大鼠,随机分为假手术组、脊髓挫伤6h组,脊髓挫伤5d,组脊髓挫伤14d组。大鼠于术后6h、5d及14d取损伤脊髓进行real-time PCR,对Vimentin基因表达... 详细信息

目的使用real-time PCR检测脊髓钝挫伤后不同时间点Vimentin基因表达变化。方法 SD成年雌性大鼠,随机分为假手术组、脊髓挫伤6h组,脊髓挫伤5d,组脊髓挫伤14d组。大鼠于术后6h、5d及14d取损伤脊髓进行real-time PCR,对Vimentin基因表达进行定量分析。结果 real-time PCR发现假手术组Vimentin表达较少,脊髓钝挫伤后6hVimentin表达较假手术组增加,具有显著性(P<0.01),Vimentin表达达到高峰后逐渐下降,脊髓钝挫伤5d及14d时Vimentin表达较6h组显著降低(P<0.01),14d时接近正常水平。结论脊髓钝挫伤后大鼠Vimentin基因表达水平于损伤早期显著上升,之后下降逐渐恢复致正常水平,Vimentin的在脊髓损伤后基因的表达变化为脊髓损伤机制研究提供理论依据。

关键词：脊髓损伤 real—time PCR Vimentin