Real-time qPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

作     者：黄磊 张素梅 张云 赵青玉 宁长申 张龙现 

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2012年第32卷第11期

页      面：1674-1678页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：教育部博士点基金资助项目(20094105110003) 国家自然科学基金资助项目(30871863) 

主　　题：real—time qPCR 贝氏隐孢子虫 鸡胚 

摘      要：为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBR Green实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBR Green real-time qPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好(R2=0.998),卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real-time qPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。