利用SYBR Green real-time PCR方法监控鸡外周血淋巴细胞中马立克病毒的载量

作     者：金元昌 韦平 袁志栋 李玉峰 

作者机构：湖南科技大学生命科学学院湖南湘潭411201 广西大学养禽与禽病研究所广西南宁530004 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2013年第33卷第8期

页      面：1170-1173,1178页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30860206) 湖南省自然科学基金资助项目(13JJ6055) 湖南省教育厅一般资助项目(10C0717) 湖南科技大学博士启动基金资助项目(E510C4) 

主　　题：马立克病毒 外周血淋巴细胞 real—time FQ-PCR meq基因 

摘      要：建立基于SYBR GreenⅠ的real-time FQ-PCR方法检测并定量鸡外周血淋巴细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)中马立克病毒(Mareks disease virus,MDV)的载量(以meq基因为定量标准),并将此技术的敏感性与标准PCR方法进行对比。应用PCR技术从MDV-1攻毒后的霞烟鸡PBLs中扩增MDVmeq基因的部分片段,纯化上述基因的DNA扩增产物,然后克隆到pGM-T载体,重组质粒通过PCR和EcoRⅠ酶切及测序分析进行确认;将浓度梯度的meq基因的重组标准品质粒DNA进行real-time FQ-PCR,建立其相应的标准曲线。同样以质粒DNA为模板,real-time FQ-PCR方法的最低检出率为10拷贝,而标准PCR的最低检出率则为32拷贝。结果表明,在检测MDV时,real-time FQ-PCR敏感度比标准PCR要高。