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马立克氏病病毒meq基因细胞转化机制的最新研究进展

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病毒学报 2008年第3期24卷 244-247页

作者：杨庆利韦平广西大学南宁530004

马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)是禽类马立克氏病(MD)的病原体.MDV有三个血清型,其中MDV-1强毒株不仅可以导致宿主淋巴细胞溶细胞性病变,使淋巴组织萎缩,而且还有转化淋巴细胞能力,诱发淋巴瘤[1].meq是MDV-1的主要致瘤基因... 详细信息

马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)是禽类马立克氏病(MD)的病原体.MDV有三个血清型,其中MDV-1强毒株不仅可以导致宿主淋巴细胞溶细胞性病变,使淋巴组织萎缩,而且还有转化淋巴细胞能力,诱发淋巴瘤[1].meq是MDV-1的主要致瘤基因,近来研究发现,meq不仅具有转录活化作用,它还能与C-末端结合蛋白家族(Ct-BPs)转录辅助抑制因子结合成转录抑制复合物,抑制目的基因转录.本文从meq的转录活化与转录抑制的双向作用报告其促进细胞转化机制的最新研究进展。

关键词：马立克氏病病毒细胞转化 meq基因机制转录抑制淋巴细胞活化作用 virus

马立克氏病毒meq基因缺失株SC9-1通过自然重组获得meq能力的分析

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病毒学报 2017年第1期33卷 89-95页

作者：张言坤韩妮孙鹏陈俊霞苏帅赵鹏崔治中山东农业大学动物医学院泰安271018

为了探究meq基因缺失的马立克氏病毒疫苗株SC9-1与超强毒株Md5是否能够通过自然重组获得meq基因的能力,将SC9-1疫苗毒和Md5超强毒共同感染鸡胚成纤维细胞(CEF),并在CEF上连续传三代,提取单个蚀斑的病毒DNA。同时将Md5超强毒接种免疫过SC... 详细信息

为了探究meq基因缺失的马立克氏病毒疫苗株SC9-1与超强毒株Md5是否能够通过自然重组获得meq基因的能力,将SC9-1疫苗毒和Md5超强毒共同感染鸡胚成纤维细胞(CEF),并在CEF上连续传三代,提取单个蚀斑的病毒DNA。同时将Md5超强毒接种免疫过SC9-1疫苗株的SPF鸡,在不同的时间点分离病毒,提取单个蚀斑的病毒DNA。将两种方式获得的病毒DNA进行PCR验证,并将香啤酒重组酶位点(FRT)残留序列克隆测序,比较其同源性。两种方式鉴定的病毒均为SC9-1或是Md5,没有检测到重组病毒,而且FRT残留序列同源性为100%。结果 SC9-1没有从野生毒株Md5获得缺失的meq基因,而且meq基因敲除区具有很好的遗传稳定性。

关键词：马立克氏病病毒疫苗毒株SC9-1 超强毒株Md5 meq基因 PCR鉴定

马立克病病毒中meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响

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中国生物制品学杂志 2007年第10期20卷 721-724页

作者：潘风光郑梅竹周玉卢士英罗翔丹艾永兴吉林大学军需科技学院长春130062 吉林大学人兽共患病研究所长春130062 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

目的研究鸡马立克病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT) mRNA转录水平的影响,并探讨meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建重组载体pcDNA-meq,转染CEF细胞,利用Taq- Man探针,经实时荧光定量RT-PCR检测... 详细信息

目的研究鸡马立克病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT) mRNA转录水平的影响,并探讨meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建重组载体pcDNA-meq,转染CEF细胞,利用Taq- Man探针,经实时荧光定量RT-PCR检测meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响,并用TRAP法测定端粒酶活性。结果meq基因能激活CEF细胞中chTERT mRNA的转录,在48h的转录水平是72h的16倍,端粒酶活性在转染后48h是转染后72h的12倍。结论meq基因可能是MDV基因组中的主要致瘤基因,可以在体外导入正常的CEF细胞中,激活端粒酶的活性。

关键词：马立克病病毒 meq基因 chTERT基因端粒酶活性鸡胚成纤维细胞

马立克氏病病毒河南分离株meq基因的克隆与序列分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2014年第8期42卷 15-20页

作者：余祖华滕蔓丁轲闵亚杰禹乐乐宿靖伟程相朝罗俊河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471003 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 洛阳普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471003

【目的】了解马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）河南分离株meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的meq基因片段,克隆... 详细信息

【目的】了解马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）河南分离株meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的meq基因片段,克隆测序后,将各毒株meq基因序列与vv＋MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参考毒株meq基因的核苷酸同源性为99.0%～100%,部分毒株meq基因的氨基酸序列有10个位点的氨基酸存在规律性突变;MDV河南分离株和参考株共组成3个进化分支,其中强毒株GA、RB1B和648A位于一个分支,分离株HNGS201、HNLH304、HNLC503与mMDV毒株CVI988和814位于同一分支,其余14株分离株位于另一个较大的分支。【结论】河南省可能流行着不同毒力的MDV,一些mMDV毒株的meq蛋白存在59个或60个氨基酸的插入。

关键词：马立克氏病病毒 meq基因克隆序列分析

马立克氏病病毒不同致病型meq基因的比较研究

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中国预防兽医学报 2002年第2期24卷 88-92页

作者：韦平崔治中扬州大学畜牧兽医学院

为了研究马立克氏病病毒 (MDV)的 meq基因与不同毒株致病性的关系 ,应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因 ,测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括 :国际通用I型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒 814株... 详细信息

为了研究马立克氏病病毒 (MDV)的 meq基因与不同毒株致病性的关系 ,应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因 ,测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括 :国际通用I型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒 814株、强毒GA株 (vMDV)、特超强毒 6 48A株 (vv +MDV)以及 6个广西分离到的野毒株。结果发现 ,MDV不同致病型的meq基因序列相对比较保守 ,它们相互间核苷酸和氨基酸序列的同源性均在 95 .6 %～ 99.7%。但是 ,与所有测试的致病性MDV毒株相比 ,二个I型疫苗毒CV1988/Rispens株和 814株均在阅读框的核苷酸序列中缺失第 5 75～ 5 77位 3个碱基(CAC) ,导致一个氨基酸 (脯氨酸 )的缺失。该缺失性突变恰恰位于 meq基因的多脯氨酸功能区的一个重复序列 (EELCAQLC STPPPPI)之中。该缺失性突变与一个疫苗毒株失去致肿瘤性是否有关。

关键词：马立克氏病病毒 meq基因序列比较缺失性突变毒株致病 PCR技术

鸡MDV meq基因对鸡胚成纤维细胞p53基因表达的影响

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中国兽医学报 2008年第3期28卷 243-246页

作者：潘风光郑梅竹李赫邹亚学孙莹崔文璟张玉静吉林大学人兽共患病研究所

利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测了鸡马立克氏病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)p53基因表达的影响,并用本室改进的TRAP法测定了端粒酶活性。结果显示,meq基因激活了CEF中... 详细信息

利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测了鸡马立克氏病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)p53基因表达的影响,并用本室改进的TRAP法测定了端粒酶活性。结果显示,meq基因激活了CEF中原癌基因p53的表达,并且48 h的表达量是72 h的18.8倍;在对CEF和转染前后48、72 h的细胞端粒酶活性测定时也发现,端粒酶活性在转染后48 h是转染后72 h的16倍。流式细胞仪检测发现meq基因使S期细胞比例较转染前有所上升,进一步印证了meq基因是MDV中致瘤的主要因素。

关键词： MDV meq基因 p53基因

利用重组反转录病毒表达马立克氏病病毒meq基因

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中国兽医学报 1999年第2期19卷 105-108页

作者：韦平 Luck F.Lee 广西大学动物科技学院美国农业部禽病与肿瘤研究所

为研究马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｍｅｑ蛋白的生物学功能，应用磷酸钙与ＭＤＶＭｅｑ基因重组的反转录病毒转染载体质粒ＲＣＡＳ－Ｍｅｑ的ＤＮＡ，转染于鸡胚成纤维细胞系ＤＦ１。经间接免疫荧光技术研究表明，转染后第３天即开始有少... 详细信息

为研究马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｍｅｑ蛋白的生物学功能，应用磷酸钙与ＭＤＶＭｅｑ基因重组的反转录病毒转染载体质粒ＲＣＡＳ－Ｍｅｑ的ＤＮＡ，转染于鸡胚成纤维细胞系ＤＦ１。经间接免疫荧光技术研究表明，转染后第３天即开始有少量ＤＦ１细胞在细胞核表达Ｍｅｑ蛋白，以后阳性细胞增多，到转染后第７天阳性细胞最多，之后荧光即衰减；通过酶联免疫吸附试验检测，发现细胞培养上清中游离病毒在转染后第５天即可检出，直至第７天仍维持最高水平，第９天开始下降。用细胞培养上清感染ＤＦ１细胞单层，于感染后第２天即可检出Ｍｅｑ蛋白阳性细胞，之后阳性细胞逐渐增多，到第４～５天达高峰，之后逐渐衰减；培养上清中的游离病毒在感染后第４天即可被检出，第５～７天达最高值。研究结果表明：（１）磷酸钙法能很好地将重组质粒ＲＣＡＳ－ＭｅｑＤＮＡ转染到ＤＦ１细胞中，而对细胞的损伤很小；（２）转染后细胞释放出的重组病毒能感染ＤＦ１细胞并稳定地表达Ｍｅｑ蛋白。表明Ｍｅｑ基因在构建的重组病毒基因组中的存在及其转录表达都是稳定的。这为在体内和体外研究ＭＤＶＭｅｑ基因的生物学功能提供了一种非常有效的方法和途径；（３）Ｍｅｑ蛋白仅分布于细胞核（包括核质和核仁）。这一结果证实了?

关键词：马立克氏病病毒 meq基因 RCAS 重组转染

应用杆状病毒载体在昆虫细胞表达马立克氏病病毒meq基因

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中国兽医学报 2000年第3期20卷 210-215页

作者：韦平 LucyFLee 广西大学动物科技学院广西南宁530005

将源于马立克氏病病毒 ( MDV) GA株的 meq基因克隆到杆状病毒转移载体质粒 p Blu Bac4中强有力的多角化蛋白启动子 ( PPH)之后 ,经与线性化的 Bac-N-Blue TMDNA共转染于昆虫细胞系 SF9,获得了重组杆状病毒。使用重组痘病毒表达的 meq制... 详细信息

将源于马立克氏病病毒 ( MDV) GA株的 meq基因克隆到杆状病毒转移载体质粒 p Blu Bac4中强有力的多角化蛋白启动子 ( PPH)之后 ,经与线性化的 Bac-N-Blue TMDNA共转染于昆虫细胞系 SF9,获得了重组杆状病毒。使用重组痘病毒表达的 meq制备的单抗 ,对重组杆状病毒感染的 SF9细胞及其裂解物分别进行间接免疫荧光试验、Western blotting和免疫沉淀试验 ,结果发现 :( 1 )本表达系统产生的 meq可被原制备的单抗所识别 ;( 2 )在感染细胞中 ,meq蛋白仅局限于细胞核内 ,而且随着感染后时间的增加 ,具有从核质向核仁和核膜转移的趋向 ;( 3 ) Western blotting和免疫沉淀试验均证实重组杆状病毒感染细胞裂解物中出现有 2条特异带 ( 60 0 0 0处 )。结果表明 ,杆状病毒

关键词： meq基因杆状病毒载体昆虫细胞系统马立克式病

马立克氏病病毒meq基因缺失株细菌人工染色体序列自我敲除的分子鉴定

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中国畜牧兽医 2015年第2期42卷 285-291页

作者：孙鹏苏帅李延鹏丁家波崔治中山东农业大学动物科技学院泰安271018 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国兽医药品监察所北京100081

本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒（MDV）感染性克隆基因组中细菌人工染色体（BAC）序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞（CEF）拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1... 详细信息

本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒（MDV）感染性克隆基因组中细菌人工染色体（BAC）序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞（CEF）拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1重组病毒在CEF细胞上进行连续传代培养，利用病毒表达的cre重组酶在传代过程中逐步敲除病毒的BAC序列。分别提取1～10代不同代次SC9—1重组病毒的DNA作为模板，利用BAC序列特异性引物对病毒基因组中的BAC进行PCR检测。利用针对BAC序列gpt基因的特异性检测引物，以MDV保守基因pp38作为内参，对不同代次病毒基因组中BAc序列进行荧光定量PCR的检测。利用PCR扩增SC9—1病毒敲除BAC序列后基因组中残留loxp位点两端序列，通过测序分析进一步验证BAC序列的敲除。利用BAC序列特异性引物对不同代次病毒基因组中BAC序列的检测结果显示，1～5代病毒DNA均能扩增出600bp的特异性目的条带，证实病毒的基因组中含有BAC序列。6～10代病毒DNA均不能扩增出特异性目的条带，证实病毒基因组中没有BAC序列。荧光定量PCR结果显示，病毒基因组中的BAC序列随着病毒的传代逐渐减少，直至第6代已经完全检测不到BAC序列。在病毒BAC序列敲除的过程中，对每代病毒BAC序列敲除后残留loxp位点序列进行PCR测序鉴定，结果显示BAC序列敲除后基因组中仅留下一个loxp位点，序列同源性均在99．7％以上。结果表明，利用cre／loxp系统将病毒在CEF细胞上连续6代传代培养可将MDVmeq基因缺失株SC9—1的BAC序列完全敲除掉，且同源重组酶敲除BAC序列具有高度一致性。

关键词：马立克氏病 meq基因细菌人工染色体敲除鉴定