检索结果-南通市图书馆

作者：孙洋湖南师范大学

学位级别：硕士

在细胞运动中激活rac蛋白,其表现出很强的时间性和空间性,故在细胞前端产生扁平突起——片状足。继而使细胞产生运动牵拉胞体的过程。但对于正调控rac蛋白局部化激活的原理到目前为止尚未定论。我们已知根据在细胞两端及其后端当整合素... 详细信息

在细胞运动中激活rac蛋白,其表现出很强的时间性和空间性,故在细胞前端产生扁平突起——片状足。继而使细胞产生运动牵拉胞体的过程。但对于正调控rac蛋白局部化激活的原理到目前为止尚未定论。我们已知根据在细胞两端及其后端当整合素α4处于激活状态时,则抑制rac蛋白的活性。并根据信号分子的结构及其功能提出了整合素正调控rac蛋白活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化导致其不能与Paxillin结合时,Paxillin、GIT1,与PIX、PAK形成信号分子复合物。由于PIX为rac的转换分子,PAK为rac的效应分子,构成了Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,在细胞前端rac蛋白处于激活状态时就会导致无细胞器的扇形突起--片状足的形成,从而使细胞向前移动。我们利用Western blotting技术,荧光双定位技术,已经验证GIT1可与Paxillin相互作用、GIT1可与PIX相互作用、GIT1可与PAK相互作用,则确认Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号分子复合物存在于细胞前端。我们设计、克隆了Paxillin的ShRNA,以降低细胞中Paxillin的表达。免疫荧光试验表明,在转染了shRNA中,Paxillin明显受到抑制。rac蛋白激活试验表明,fibronectin刺激5min,rac蛋白的激活程度最强。FRET定量检测,验证了该信号转导通路在Paxillin正常或受抑制情况下rac的激活。研究结果表明,在Paxillin表达受到抑制时,rac蛋白激活受到明显抑制。研究结果阐明Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号通路在细胞前端对rac局部化激活起着正调控作用。

关键词： rac蛋白激活细胞突起---片状足整合素α4 Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路 FRET定量检测 Paxillin表达受到抑制细胞迁移

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定向迁移细胞前沿rac局部化激活的分子调控

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湖南师范大学自然科学学报 2013年第1期36卷 63-67页

作者：李友军罗孝勇郭向荣湖南师范大学生命科学学院分子细胞实验室中国长沙410081

提出构想:当α4胞内区域磷酸化而抑制其与paxillin结合时,paxillin、GIT1与PIX、PAK形成信号分子复合物.由于PIX为rac的转换分子,PAK为rac的效应分子,构成了paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使rac在细胞前沿持续地局部化激活,... 详细信息

提出构想:当α4胞内区域磷酸化而抑制其与paxillin结合时,paxillin、GIT1与PIX、PAK形成信号分子复合物.由于PIX为rac的转换分子,PAK为rac的效应分子,构成了paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使rac在细胞前沿持续地局部化激活,导致片状足的形成,产生细胞向前扩展推动力.研究结果表明,GIT1与paxillin、PIX在活细胞中均存在强烈的相互作用,且这种相互作用可发生在细胞前沿.由于rac的转换因子PIX(PAK-interacting exchange factor)在活细胞中往往与PAK相伴而行,因而,在细胞前沿,必定存在paxillin-GIT1-PIX-PAK的信号转导通路.在纤粘蛋白(fibronectin)刺激下,整合素α4诱导rac蛋白处于激活状态(GTP-bound).

关键词： paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路 rac蛋白激活免疫印迹免疫荧光

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定向迁移细胞前沿α4整合素对rac局部化激活的分子调控机制

定向迁移细胞前沿α4整合素对Rac局部化激活的分子调控机制

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作者：李思锐湖南师范大学

学位级别：硕士

本研究项目根据已发表的,激活的整合素α4在细胞尾部、两侧,负调控rac活性的信号转导通路的研究结果,结合相关信号分子的结构、功能,提出在细胞前沿,整合素正调控rac活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化进而抑制其与paxillin结合... 详细信息

本研究项目根据已发表的,激活的整合素α4在细胞尾部、两侧,负调控rac活性的信号转导通路的研究结果,结合相关信号分子的结构、功能,提出在细胞前沿,整合素正调控rac活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化进而抑制其与paxillin结合时,paxillin、GIT1,与PIX、PAK形成信号分子复合物。由于PAK为rac的效应分子,PIX为rac的转换分子,构成了paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使rac1在细胞前沿持续的局部化激活,导致片状足的形成,产生细胞向前迁移推动力的全新构想。首先我们将验证hFN对rac蛋白的激活,然后我们将采用免疫印迹实验,初步证明这些蛋白在细胞前沿存在两两相互作用,即该处存在这样的信号分子复合物,进而通过荧光双定位验证这些分子间的相互作用可以发生在细胞前沿,最后通过FRET单分子探针,实时、定量高分辨率的监测rac的激活时空变化图像。

关键词：激光共聚焦显微镜技术 rac蛋白激活免疫印迹 FRET探针荧光双定位

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定向迁移细胞前沿rac局部化激活的分子调控机制

定向迁移细胞前沿Rac局部化激活的分子调控机制

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作者：李友军湖南师范大学

学位级别：硕士

根据激活的整合素α4在细胞尾部、两侧,负调控rac活性的信号转导通路的研究结果,结合相关信号分子的结构、功能,提出了在细胞前沿,整合素正调控rac活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化而抑制其与Paxillin结合时,Paxillin、GIT1,与... 详细信息

根据激活的整合素α4在细胞尾部、两侧,负调控rac活性的信号转导通路的研究结果,结合相关信号分子的结构、功能,提出了在细胞前沿,整合素正调控rac活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化而抑制其与Paxillin结合时,Paxillin、GIT1,与PIX、PAK形成信号分子复合物。由于PIX为rac的转换分子,PAK为rac的效应分子,构成了Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使rac在细胞前沿持续的局部化激活,导致片状足的形成,产生细胞向前扩展推动力的全新构想。本文利用蛋白免疫印迹法,将种植于纤粘蛋白(fibronectin)包被的培养皿中的CHO细胞(Chinese hamster ovary)裂解,在蛋白A/G琼脂糖珠(protein A/G agrose beads)的作用下,以抗Paxillin、PIX的单克隆抗体与细胞裂解液免疫共沉淀。SDS-PAGE分离蛋白,转膜,用化学发光(Super-Signal West Pico detection Kit, Pierce)以抗GIT1的单抗在分子成像系统(ChemiDocTM XRS,BIO-RAD)上直接检测,验证了Paxillin?PIX与GIT1蛋白两两之间具有相互作用。并通过荧光双定位证实了Paxillin与GIT1, GIT1与PIX的相互作用可以定位于细胞前沿,即证实了Paxillin-GIT1-PIX可以三元复合体形式存在于细胞前沿。rac蛋白激活试验表明,在纤粘蛋白(fibronectin)刺激下,整合素a4聚集成簇,激活Paxillin-GIT1-PIX-PAK的信号转导通路,使rac蛋白处于激活状态(GTP-bound)。本文的实验结果清晰地表明,GIT1与Paxillin、PIX在活细胞中均存在强烈的相互作用,且这种相互作用可发生在细胞前沿。由于rac的转换因子PIX(PAK-interacting exchange factor)在活细胞中往往与PAK相伴而行,因而,在细胞前沿,必定存在Paxillin-GIT1-PIX-PAK的信号转导通路。在纤粘蛋白(fibronectin)刺激下,整合素α4诱导rac蛋白处于激活状态(GTP-bound)。该试验结果为定向迁移细胞前沿rac局部化激活的分子调控机制的研究奠定了实验基础。

关键词： Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路 rac蛋白激活免疫印迹荧光双定位

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