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小分子干扰rna对绒毛膜癌细胞人类白细胞抗原G基因表达的影响

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中华妇产科杂志 2005年第8期40卷 549-552页

作者：陈春玲廖秦平北京大学第一医院妇产科 100034

目的探讨小分子干扰rna(sirna)对绒毛膜癌(绒癌)细胞中人类白细胞抗原G(HLA-G)基因表达的影响,了解HLA-G基因在绒癌发生、发展中的作用。方法设计并合成HLA-Gsirna,分为两组。实验组以不同浓度(分别为1.0、2.5、5.0μg/L,下同)的HLA-Gsi... 详细信息

目的探讨小分子干扰rna(sirna)对绒毛膜癌(绒癌)细胞中人类白细胞抗原G(HLA-G)基因表达的影响,了解HLA-G基因在绒癌发生、发展中的作用。方法设计并合成HLA-Gsirna,分为两组。实验组以不同浓度(分别为1.0、2.5、5.0μg/L,下同)的HLA-Gsirna转染HLA-G基因高表达的绒癌细胞系JEG-3细胞,对照组以等量阴性对照sirna转染JEG-3细胞。实时荧光定量RT-PCR技术检测转染后JEG-3细胞中HLA-Gmrna的表达,HLA-Gmrna的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示;蛋白印迹法测定JEG-3细胞中HLA-G蛋白的表达;显微镜观察并计数转染后存活的JEG-3细胞数。结果HLA-Gsirna转染JEG-3细胞后,明显下调JEG-3细胞中HLA-Gmrna及蛋白的表达水平。实验组不同浓度的HLA-Gsirna转染后,JEG-3细胞的Ct值[分别为(20.67±0.02)、(21.37±0.03)、(21.43±0.02)个循环数],分别与对照组[分别为(20.33±0.01)、(20.37±0.02)、(20.40±0.03)个循环数]比较,差异有统计学意义(Prna可以下调HLA-Gmrna及蛋白的表达水平,抑制细胞生长,表明HLA-G基因在绒癌的发生、发展中具有重要作用。

关键词： rna,小分子干扰 HLA抗原组织相容性抗原Ⅰ类绒毛膜癌人类白细胞抗原G rna转染绒癌细胞系基因表达小分子 HLA-Gmrna

针对Her-2基因的小分子干扰rna对卵巢上皮性癌细胞生物学行为影响的研究

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中华妇产科杂志 2006年第12期41卷 830-833页

作者：周颖凌斌冯定庆程志祥沈国栋高婷石永云王梅梅赵卫东祝怀平安徽省分子医学重点实验室合肥230001 安徽省立医院妇产科

目的通过小分子干扰rna(sirna)对Her-2基因表达的影响,探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学行为的影响。方法针对Her-2基因的sirna质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选细胞克隆,收集其上清液... 详细信息

目的通过小分子干扰rna(sirna)对Her-2基因表达的影响,探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学行为的影响。方法针对Her-2基因的sirna质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选细胞克隆,收集其上清液并感染SKOV3细胞,经过嘌呤霉素筛选得到稳定转染的细胞株SKOV3/sirna、SKOV3/sirna-negative,并通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定Her-2基因表达的抑制效果。用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖并绘制生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡,并将稳定转染的细胞株接种到裸鼠皮下检测成瘤情况。结果(1)SKOV3/sirna细胞Her-2基因的表达明显减弱。(2)SKOV3/sirna细胞的G0/G1期细胞占68·6%,S期细胞占15·1%,SKOV3/sirna-negative细胞的G0/G1期占55·8%,S期占23·3%。(3)SKOV3/sirna细胞的早期凋亡率为(10·500±0·250)%,而SKOV3/sirna-negative细胞为(0·340±0·010)%,两者比较,差异有统计学意义(Prna-negative细胞比较,SKOV3/sirna细胞的生长速度减慢(Prna可以有效抑制Her-2基因的表达,抑制卵巢癌细胞的生物学行为。

关键词：基因,erbB-2 rna,小分子干扰卵巢肿瘤

靶向碱性成纤维生长因子的小分子干扰rna诱导胶质瘤U251细胞凋亡机制的初步探讨

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中华外科杂志 2012年第10期50卷 928-932页

作者：吴静超冯学泉王金环刘俊张飚徐新女刘宏胜天津医科大学一中心临床学院 300192 天津市第一中心医院神经外科天津市环湖医院神经外科天津市环湖医院临床检验科天津市环湖医院卫生部危重病急救医学重点实验室

目的初步探讨靶向碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的小分子干扰rna（sirna）诱导胶质瘤U251细胞凋亡的作用机制。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组，空载组和实验组按感染复数（MOI）=100分别进行空载体腺病毒（Ad—null）和含... 详细信息

目的初步探讨靶向碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的小分子干扰rna（sirna）诱导胶质瘤U251细胞凋亡的作用机制。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组，空载组和实验组按感染复数（MOI）=100分别进行空载体腺病毒（Ad—null）和含有bFGF小分子干扰rna的重组腺病毒（Ad-bFGF-sirna）转染，转染72h后通过Western blot方法检测相关蛋白的表达，并应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化，多组间均数比较采用单因素方差分析（One—way ANOVA）。结果实验组细胞经转染Ad—bFGF—sirna72h后，Western blot结果显示，与对照组和空载组相比bFGF蛋白表达明显降低，同时Cytochrome C、Caspase-3及Bax凋亡相关蛋白的表达增强，Bcl—xl和Bcl-2蛋白的表达降低；经流式细胞仪检测，线粒体膜电位高的细胞所占的比例实验组为74．4％±4．7％与对照组的92．1％±2．5％、空载组的90．9％±1．8％相比明显下降，差异有统计学意义（F=28．805，P〈0．05）；激光共聚焦显微镜的结果显示实验组的红色荧光与绿色荧光的比值为0．83±0．12与对照组的1．36±0．40和空载组的1．32±0．35相比明显下降，差异具有统计学意义（F=7．920，P〈0．05）。结论靶向bFGF的sirna可能通过线粒体途径诱导胶质瘤U251细胞非淋菌性尿道凋亡。

关键词：成纤维细胞生长因子2 rna,小分子干扰神经胶质瘤细胞系,肿瘤细胞凋亡

小分子干扰rna对子宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒18型E6、E7mrna表达的影响

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中华妇产科杂志 2006年第3期41卷 190-193页

作者：王萍崔竹梅罗兵林萍青岛大学医学院附属医院妇产科 266003 青岛大学医学院附属医院微生物实验室 266003

目的探讨小分子干扰rna(sirna)对宫颈癌细胞系HeLa细胞中人乳头状瘤病毒(HPV)18型E6、E7mrna表达的干扰作用。方法采用体外转录方法合成HPV18E6、E7sirna,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定HeLa细胞活性[以吸光度(A)值表示],筛选出最适... 详细信息

目的探讨小分子干扰rna(sirna)对宫颈癌细胞系HeLa细胞中人乳头状瘤病毒(HPV)18型E6、E7mrna表达的干扰作用。方法采用体外转录方法合成HPV18E6、E7sirna,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定HeLa细胞活性[以吸光度(A)值表示],筛选出最适宜转染浓度。通过阳离子脂质体将HPV18E6、E7sirna转染入靶细胞HeLa细胞中。实验分为3组,E6转染组(转染HPV18E6sirna),E7转染组(转染HPV18E7sirna),设未转染细胞为对照组。RT-PCR技术分别检测转染24、48、72h后HeLa细胞中HPV18E6、E7mrna的表达。流式细胞仪检测细胞周期。结果MTT比色法检测结果显示,HPV18E6、E7sirna的最适宜转染浓度为20pmol/L,以此浓度HPV18E6、E7sirna转染后,E6转染组细胞活性为0·57±0·05,E7转染组细胞活性为0·62±0·04,分别与对照组的0·87±0·05比较,差异有统计学意义(Prna表达水平为0·63±0·04,转染后24、48、72h,其表达水平分别为0·53±0·04、0·46±0·02、0·56±0·03;E7转染组转染前HPV18E7mrna的表达水平为0·66±0·03,转染后分别为0·60±0·05、0·52±0·04、0·59±0·02,E6、E7转染组各转染时间点分别与其转染前比较,差异均有统计学意义(Prna干扰现象,对外源性HPV18E6、E7sirna的干扰具有特异性。

关键词： rna,小分子干扰癌基因蛋白质类,病毒性宫颈肿瘤 HeLa细胞

Edg4基因小分子干扰rna载体的构建及其对卵巢上皮性癌细胞的沉默效应

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中华妇产科杂志 2007年第11期42卷 765-769页

作者：乔玉环李留霞郭瑞霞周蔚王淼张孝艳张建好赵先兰张梦真赵国强郑州大学第一附属医院妇产科 450052 郑州大学基础医学院 450052

目的构建针对 Edg4基因的小分子干扰 rna(sirna)载体,初步观察其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的沉默效应。方法利用软件分析、设计针对人 Edg4 mrna 的 sirna 靶序列,合成发夹样 DNA 序列;退火成双链,克隆至真核表达载体 prnaT-U6.1质粒... 详细信息

目的构建针对 Edg4基因的小分子干扰 rna(sirna)载体,初步观察其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的沉默效应。方法利用软件分析、设计针对人 Edg4 mrna 的 sirna 靶序列,合成发夹样 DNA 序列;退火成双链,克隆至真核表达载体 prnaT-U6.1质粒上,经 PCR 技术鉴定及DNA 双向测序证实其序列无误后,用脂质体包裹并转染卵巢癌细胞系 SKOV3细胞,用荧光显微镜初步观察其在 SKOV3细胞中的转染率。采用实时荧光定量荧光定量 PCR 技术检测转染前后 SKOV3细胞中 Edg4 mrna 的表达,生化法测定转染前后 SKOV3细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞术检测转染后 SKOV3细胞的凋亡率。结果经 PCR 技术鉴定及 DNA 双向测序证实重组真核表达载体的序列无误,并将此命名为 prnaT-U6.1-siEdg4。荧光显微镜下观察,转染后 SKOV3细胞内有明显绿色荧光信号,转染率为64%;实时荧光定量 PCR 技术检测显示,转染后 SKOV3细胞的Edg4 mrna 表达水平(0.05±0.01)明显低于转染前(0.29±0.04,Prna 真核表达载体,并能较高效转染 SKOV3细胞,转染后能明显抑制 SKOV3细胞中 Edg4 mrna 的表达,诱导卵巢癌细胞凋亡。

关键词：卵巢肿瘤 rna,小分子干扰受体,溶血磷脂酸基因表达

小分子干扰rna诱导HTB-94软骨肉瘤细胞凋亡的研究

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中华外科杂志 2008年第10期46卷 772-775页

作者：秦宏敏韩会峰许铁沙广钊刘林彭易根任天成徐州医学院附属医院骨科 221002 江苏邳州第一人民医院骨科

目的利用小分子干扰rna（sirna）表达质粒转染HTB-94软骨肉瘤细胞，观察其在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中对肿瘤细胞生长的影响。方法设计并合成高泳动家族性别决定基因9（Sox9）sirna，将其转染HTB-94肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的Sox9基因的m... 详细信息

目的利用小分子干扰rna（sirna）表达质粒转染HTB-94软骨肉瘤细胞，观察其在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中对肿瘤细胞生长的影响。方法设计并合成高泳动家族性别决定基因9（Sox9）sirna，将其转染HTB-94肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的Sox9基因的mrna和蛋白表达、生长曲线和细胞凋亡情况。结果Sox9sirna的插入片段测序结果与合成的sirna结果一致，Sox9基因的mrna和蛋白表达降低，HTB-94肿瘤细胞的生长繁殖受到抑制，细胞凋亡增加。结论Sox9sirna表达质粒可以通过稳定转染HTB-94肿瘤细胞，抑制Sox9基因的mrna和蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的生长繁殖，同时使肿瘤细胞凋亡。

关键词： rna,小分子干扰软骨肉瘤细胞凋亡 Sox9 mrna表达

小分子干扰rna沉默Notch1后增加胰腺癌细胞凋亡活性而提高吉西他滨化疗敏感性

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浙江大学学报（医学版） 2014年第3期43卷 313-318页

作者：杜潇王以涵王自强程中李旸胡建昆陈志新周总光四川大学华西医院胃肠外科中心四川成都610041

目的：探讨应用小分子干扰rna （sirna）沉默Notch1信号通路对胰腺癌吉西他滨化疗敏感性的影响及其可能机制.方法：Notch1 sirna转染AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2和Panc-1这4种胰腺癌细胞株.实时PCR检测胰腺癌细胞株Notch1受体相对表达量... 详细信息

目的：探讨应用小分子干扰rna （sirna）沉默Notch1信号通路对胰腺癌吉西他滨化疗敏感性的影响及其可能机制.方法：Notch1 sirna转染AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2和Panc-1这4种胰腺癌细胞株.实时PCR检测胰腺癌细胞株Notch1受体相对表达量;应用Notch1 sirna转染后,CCK-8法计算吉西他滨（10μmo1/L）作用时细胞抑制率,蛋白质印迹法检测促凋亡蛋白Bax表达水平,CaspACETM比色法检测caspase 3活性.结果：4株胰腺癌细胞中BxPC-1Notch1受体相对表达量最高,Panc-1最低.Notch1 sirna转染组吉西他滨作用抑制率较对照sirna转染组明显增高,同时伴随促凋亡蛋白Bax表达上调,caspase 3活性明显增高（均P＜0.05）.结论：应用sirna降低Notch1信号通路活性可通过激活凋亡活性而增加胰腺癌吉西他滨化疗敏感性.

关键词：胰腺肿瘤药物疗法脱氧胞苷治疗应用 rna,小分子干扰转染 Notch1受体

单核细胞化学吸引蛋白质1小分子干扰rna人肾小管上皮细胞株的建立

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中华肾脏病杂志 2007年第4期23卷 251-256页

作者：刘娜严海东李雪竹同济大学附属东方医院肾内科上海200120

目的建立单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1）小分子干扰rna（sirna）人肾小管上皮细胞株，并检测MCP-1 sirna对人肾小管上皮细胞（HKC）MCP-1基因的抑制效应。方法针对人MCP-1mrna67、116、142位点设计并合成3对MCP-1sirna序列。构建MC... 详细信息

目的建立单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1）小分子干扰rna（sirna）人肾小管上皮细胞株，并检测MCP-1 sirna对人肾小管上皮细胞（HKC）MCP-1基因的抑制效应。方法针对人MCP-1mrna67、116、142位点设计并合成3对MCP-1sirna序列。构建MCP-1特异性sirna真核表达载体，以脂质体法瞬时转染至HKC。转染24h后分别应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1mrna、蛋白表达，筛选出抑制效率最高的MCP-1sirna。以筛选出的MCP-1sirna序列构建慢病毒穿梭质粒。使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产，得到病毒液并确定其滴度。以病毒液感染HKC，筛选MCP-1sirna人肾小管上皮细胞株，并应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1mrna、蛋白表达。结果成功建立MCP-1特异性sirna人肾小管上皮细胞株。MCP-1sirna稳定转染能下调人肾小管上皮细胞MCP-1mrna（68．49±6．38）％、蛋白（72．97±6.13）％，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 MCP-1特异性sirna能高效抑制HKC内MCP-1基因表达。MCP-1 sirna人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾间质纤维化防治研奔提供宴验材料和依据。

关键词：单核细胞化学吸引蛋白质1 rna,小分子干扰纤维化人肾小管上皮细胞转染

化学合成小分子干扰rna抑制缺氧大鼠视网膜血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α基因的表达

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中华围产医学杂志 2012年第6期15卷 358-362页

作者：杨晓光张文辉黄晓艳杨舒广谢小强叶贞志白青青周晓光广东省深圳市光明新区公明人民医院儿科 518106 广州市妇女儿童医疗中心新生儿科

目的探讨缺氧诱导因子1a（hypoxia—induciblefactor-1d，HIF-1a）在早产儿视网膜病发病中的作用，为其基因治疗寻找新的靶点。方法将化学合成的小分子干扰rna（smallinterferencerna，sirna）用脂质体介导法转染大鼠视网膜血管内皮细... 详细信息

目的探讨缺氧诱导因子1a（hypoxia—induciblefactor-1d，HIF-1a）在早产儿视网膜病发病中的作用，为其基因治疗寻找新的靶点。方法将化学合成的小分子干扰rna（smallinterferencerna，sirna）用脂质体介导法转染大鼠视网膜血管内皮细胞，转染的细胞在含化学缺氧剂——二氯化钴的培养基中培养。培养8h后，应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和Western印迹技术检测转染后细胞HIF1amrna和蛋白的表达量。培养24h后应用3-（4，5二甲基噻唑2）2，5-二苯基四氮唑溴盐比色法检测细胞的增殖活性。采用两独立样本t检验比较各转染组与阴性对照组之间的差异。结果成功将sirna转染至大鼠视网膜血管内皮细胞，荧光定量逆转录一聚合酶链反应技术检测显示，针对靶基因HIF-1n设计的4条平行干扰序列sirna均能不同程度抑制HIF-1α的转录表达，sirnal、sirna2和sirna4组HIF-1α mrna的相对表达水平分别为0．1620±0．0147、0．2034±0．0251和0．3049±0．0165，分别降至空白对照组（1．0000±0．0344）的16．20％、20．34％和30．49％，与阴性对照组（0．8334±0．0242）之间差异有统计学意义（t分别为16．786、8．953和4．087，P均dO．05）。Western印迹技术显示，sirnal和sirna2转染的大鼠视网膜血管内皮细胞HIF-1α蛋白表达水平分别为0．4956±0．0421和0．6544±1．0032，明显低于空白对照组（3．5105±0．4084）和阴性对照组（3．4019±1．0677），差异均有统计学意义（t分别为6．861、2．893、4．567和5．072，P均〈0．05）。sirnal和sirna2组细胞增殖抑制率分别为（49．5-±2．9）％和（67．4±1．2）％，明显高于阴性对照组[（15．7±1．5）％]，差异有统计学意义（t分别为2．786和6．904，P％0．05）。结论化学合成的HIF-1α sirna能有效抑制大鼠视网膜血管内皮细胞在缺氧条件下HIF-1αmrna及蛋白的表达，从而降低细胞增殖活性。

关键词： rna,小分子干扰缺氧诱导因子1,α亚基缺氧视网膜血管内皮细胞细胞增殖