化学合成小分子干扰RNA抑制缺氧大鼠视网膜血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α基因的表达

作     者：杨晓光 张文辉 黄晓艳 杨舒广 谢小强 叶贞志 白青青 周晓光 YANG Xiao-guang;ZHANG Wen-hui;HUANG Xiao-yan;YANG Shu-guang;XIE Xiao-qiang;YE Zhen-zhi

作者机构：广东省深圳市光明新区公明人民医院儿科518106 广州市妇女儿童医疗中心新生儿科 

出 版 物：《中华围产医学杂志》 (Chinese Journal of Perinatal Medicine)

年 卷 期：2012年第15卷第6期

页      面：358-362页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：深圳市科技计划项目(200903220) 晓光、张文辉、黄晓艳、杨舒广、谢小强、叶贞志) 广州市妇女儿童医疗中心新生儿科(白青青、周晓光)通信作者:周晓光,Email:gzzhouxg@163.COiql 

主　　题：RNA,小分子干扰 缺氧诱导因子1,α亚基 缺氧 视网膜血管 内皮细胞 细胞增殖 

摘      要：目的探讨缺氧诱导因子1a（hypoxia—induciblefactor-1d，HIF-1a）在早产儿视网膜病发病中的作用，为其基因治疗寻找新的靶点。方法将化学合成的小分子干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）用脂质体介导法转染大鼠视网膜血管内皮细胞，转染的细胞在含化学缺氧剂——二氯化钴的培养基中培养。培养8h后，应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和Western印迹技术检测转染后细胞HIF1amRNA和蛋白的表达量。培养24h后应用3-（4，5二甲基噻唑2）2，5-二苯基四氮唑溴盐比色法检测细胞的增殖活性。采用两独立样本t检验比较各转染组与阴性对照组之间的差异。结果成功将siRNA转染至大鼠视网膜血管内皮细胞，荧光定量逆转录一聚合酶链反应技术检测显示，针对靶基因HIF-1n设计的4条平行干扰序列siRNA均能不同程度抑制HIF-1α的转录表达，siRNAl、siRNA2和siRNA4组HIF-1α mRNA的相对表达水平分别为0．1620±0．0147、0．2034±0．0251和0．3049±0．0165，分别降至空白对照组（1．0000±0．0344）的16．20％、20．34％和30．49％，与阴性对照组（0．8334±0．0242）之间差异有统计学意义（t分别为16．786、8．953和4．087，P均dO．05）。Western印迹技术显示，siRNAl和siRNA2转染的大鼠视网膜血管内皮细胞HIF-1α蛋白表达水平分别为0．4956±0．0421和0．6544±1．0032，明显低于空白对照组（3．5105±0．4084）和阴性对照组（3．4019±1．0677），差异均有统计学意义（t分别为6．861、2．893、4．567和5．072，P均〈0．05）。siRNAl和siRNA2组细胞增殖抑制率分别为（49．5-±2．9）％和（67．4±1．2）％，明显高于阴性对照组[（15．7±1．5）％]，差异有统计学意义（t分别为2．786和6．904，P％0．05）。结论化学合成的HIF-1α siRNA能有效抑制大鼠视网膜血管内皮细胞在缺氧条件下HIF-1αmRNA及蛋白的表达，从而降低细胞增殖活性。