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敲低双特异性磷酸酶5(DUSP5)通过阻断NF-κB信号抑制卡介苗诱导的小鼠raw264.7巨噬细胞炎性反应

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 404-410页

作者：任超刘文淼骆佳宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏银川750001 宁夏医科大学总医院病案统计室宁夏银川750001 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750001

目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠raw264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染raw264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调raw264.7巨... 详细信息

目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠raw264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染raw264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调raw264.7巨噬细胞DUSP5水平,并设置siRNA阴性对照(si-NC)组、DUSP5敲低(si-DUSP5)组、si-NC联合BCG感染组、si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10的mRNA表达,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;Western blot法检测细胞核因子κB(NF-κB)与磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)表达变化。结果BCG感染上调raw264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达,并在BCG刺激4 h后,DUSP5表达量达到高峰;与si-NC联合BCG感染组相比,敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、IL-6与TNF-α表达与分泌,而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响;且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。

关键词：卡介苗(BCG) 双特异性磷酸酶5(DUSP5) raw264.7巨噬细胞炎性反应

鞣花酸通过TLR4-SRC/MAPK/NF-κB途径抑制脂多糖诱导raw264.7巨噬细胞的炎症反应

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中南药学 2024年第4期22卷 943-949页

作者：乌里盼·托乎达阿里丁宛婷孙媛周茂杰姚雨含赵军新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011 新疆药物研究所维吾尔药重点实验室乌鲁木齐830004

目的基于Toll样受体4(TLR4)-酪氨酸激酶(SRC)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨鞣花酸的抗炎机制。方法采用不同浓度(0、0.5、5、25、50、75、100μmol·L^(-1))鞣花酸对raw264.7巨噬细胞[或脂多糖(LPS)诱导的R... 详细信息

目的基于Toll样受体4(TLR4)-酪氨酸激酶(SRC)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨鞣花酸的抗炎机制。方法采用不同浓度(0、0.5、5、25、50、75、100μmol·L^(-1))鞣花酸对raw264.7巨噬细胞[或脂多糖(LPS)诱导的raw264.7细胞]干预24 h,噻唑蓝(MTT)法检测raw264.7巨噬细胞存活率,筛选最适给药浓度。实验分为空白对照组,模型组(0.5 mg·L^(-1)LPS),阳性对照地塞米松组(10μmol·L^(-1)),鞣花酸(5、25、50μmol·L^(-1))给药组。Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;采用ELISA法检测细胞上清液中前列腺素-2(PGE2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;采用Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白以及TLR4-SRC/MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果MTT结果筛选出鞣花酸的干预浓度为5~50μmol·L^(-1)。与空白对照组比较,模型组PGE_(2)、NO和炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著升高(Praw264.7巨噬细胞的炎症反应,具体的调控机制有待进一步研究。

关键词：鞣花酸抗炎作用 raw264.7巨噬细胞 SRC蛋白激酶 MAPK通路 NF-κB通路

阻断连接子蛋白43(Cx43)抑制脂多糖诱导的小鼠raw264.7巨噬细胞M1型极化

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第11期38卷 972-978页

作者：蒋涵王璐张莹莹何文君闫美娟单莉娅李新芝马克涛石河子大学医学院、新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000 石河子大学医学院、病理生理学教研室新疆石河子832000 绵阳市中心医院四川绵阳621099 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832000

目的研讨连接子蛋白43(Cx43)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠raw264.7巨噬细胞M1型极化中的作用。方法将体外培养的小鼠raw264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS联合Cx43阻断剂模拟肽19(Gap19)或模拟肽26(Gap26)预处理组(LPS联合Gap19组、LPS联... 详细信息

目的研讨连接子蛋白43(Cx43)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠raw264.7巨噬细胞M1型极化中的作用。方法将体外培养的小鼠raw264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS联合Cx43阻断剂模拟肽19(Gap19)或模拟肽26(Gap26)预处理组(LPS联合Gap19组、LPS联合Gap26组)。Western blot法检测小鼠raw264.7巨噬细胞Cx43和M1型极化标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色观察CD86在raw264.7巨噬细胞的表达和定位,流式细胞术检测小鼠raw264.7巨噬细胞M1型极化标志物CD86的表达频数。结果与对照组相比,LPS组中CD86、iNOS和Cx43的蛋白表达明显升高,CD86的表达频数明显升高;与LPS组相比,在LPS联合Gap19组和LPS联合Gap26组中CD86和iNOS的蛋白表达均显著降低,CD86的表达频数均显著降低。因此,LPS可以诱导小鼠raw264.7巨噬细胞向M1型极化,而Gap19和Gap26能够降低M1型极化标志物的表达。结论通过阻断Cx43可以抑制巨噬细胞M1型极化。

关键词：脂多糖(LPS) raw264.7巨噬细胞极化连接子蛋白43(Cx43)

清感冬饮对大鼠急性咽炎的影响及其对raw264.7巨噬细胞极化的调控

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清感冬饮对大鼠急性咽炎的影响及其对RAW264.7巨噬细胞极化的调控

作者：苏瑞天津中医药大学

学位级别：硕士

背景:炎症作为一种保护性应答反应,可以保护机体免受物理损伤以及病毒、微生物和病原体等的侵害。但是过度的炎症反应会引发宿主机体损伤,导致呼吸系统疾病、心血管疾病和中枢神经系统疾病等。巨噬细胞是机体内广泛分布的免疫细胞,在炎... 详细信息

背景:炎症作为一种保护性应答反应,可以保护机体免受物理损伤以及病毒、微生物和病原体等的侵害。但是过度的炎症反应会引发宿主机体损伤,导致呼吸系统疾病、心血管疾病和中枢神经系统疾病等。巨噬细胞是机体内广泛分布的免疫细胞,在炎症进程中发挥着重要作用。巨噬细胞具有异质性和可塑性,在复杂多变的环境下,可极化为促炎表型巨噬细胞和抗炎表型巨噬细胞,促炎表型巨噬细胞参与机体正向免疫应答,发挥免疫监视功能,抗炎表型巨噬细胞促进炎症消退和受损组织修复。鉴定巨噬细胞的极化状态和调节两种表型之间的平衡,成为诊断疾病和治疗疾病的重要策略。清感冬饮具有益气固表、清热解毒、清咽利喉、宣肺止咳的功效,临床上多用于治疗冬季发作的急慢性咽喉炎、急慢性鼻炎、急慢性支气管炎等呼吸道疾病。炎症是呼吸道疾病常见的病理过程。已有研究表明清感冬饮可抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症因子的释放,提示清感冬饮有显著的抗炎活性,但是清感冬饮的抗炎机制仍不明确。因此,本研究从调控巨噬细胞表型极化的角度出发,探究清感冬饮抗炎机制。目的:利用网络药理学初步预测清感冬饮发挥抗炎作用的关键成分、核心靶点和作用通路,为后续实验研究奠定基础。建立金黄色葡萄球菌诱导的急性咽炎大鼠模型,探讨清感冬饮的抗炎作用。建立LPS诱导的raw264.7巨噬细胞促炎模型,以巨噬细胞极化为切入点,探究清感冬饮对巨噬细胞表型极化的影响及其抗炎机制,为清感冬饮在临床上广泛使用提供实验依据。方法:1.基于网络药理学预测清感冬饮抗炎的作用机制采用网络药理学,搜集清感冬饮抗炎靶点,并对其进行PPI网络构建、“中药-关键成分-核心靶点”网络构建、KEGG通路富集分析和GO功能富集分析,由此预测清感冬饮抗炎的关键成分、核心靶点和作用通路。2.清感冬饮对急性咽炎大鼠炎症反应的影响将28只SD大鼠随机分为正常组、模型组、清感冬饮组和阿莫西林组。清感冬饮组大鼠灌胃预给药7天后,对模型组、清感冬饮组和阿莫西林组大鼠咽部注射金黄色葡萄球菌菌液,连续2天,建立急性咽炎大鼠模型,与此同时,清感冬饮组和阿莫西林组大鼠灌胃给药5天。通过对大鼠外观行为表征评分、咽部病变评分、病理学检测和大鼠血清炎症因子检测,探究清感冬饮对急性咽炎大鼠炎症反应的影响。3.基于PI3K/AKT2/NF-κB信号通路探讨清感冬饮对raw264.7巨噬细胞促炎表型极化的影响(1)采用CCK-8、LDH和Griess法筛选LPS诱导raw264.7巨噬细胞炎症损伤的造模剂量以及清感冬饮对raw264.7巨噬细胞的安全作用剂量和有效作用剂量。采用中性红法评估巨噬细胞的吞噬能力;采用细胞免疫荧光法观察促炎表型表面标记物CD86的表达;采用q RT-PCR法和ELISA法检测i NOS、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA表达及其释放量。(2)选用HEK293T细胞,建立NF-κB双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞NF-κB表达活性的影响。采用Western blot法检测清感冬饮对raw264.7巨噬细胞NF-κB p65、IκBα、IKKα、AKT2和PI3K蛋白表达的影响,并通过细胞免疫荧光法观察NF-κB p65核移位情况。4.基于AKT1/C/EBPβ信号通路探讨清感冬饮对raw264.7巨噬细胞抗炎表型复极化的影响(1)采用细胞免疫荧光法考察清感冬饮对LPS诱导的raw264.7巨噬细胞抗炎表型标记物CD206表达的影响。采用q RT-PCR法评价Arg-1、TGF-β和IL-10 m RNA水平。采用ELISA法检测IL-10的释放。(2)采用Western blot法检测清感冬饮对raw264.7巨噬细胞PI3K、AKT1、AKT2和C/EBPβ蛋白表达的影响,并通过细胞免疫荧光法观察C/EBPβ核移位情况。结果:1.基于网络药理学预测清感冬饮抗炎的作用机制网络药理学分析结果显示,在清感冬饮205个活性成分中槲皮素、木犀草素、山奈酚和咖啡酸二甲醚等172个关键成分可作用于PTGS2、NOS2、PIK3CG、AKT1和TNF等119个核心靶点,影响TNF、IL-17、Toll-like receptor和PI3K/AKT等信号通路,调控炎症反应和细胞信号传导等生物进程。2.清感冬饮对急性咽炎大鼠炎症反应的影响清感冬饮增加急性咽炎大鼠胸腺重量、改善大鼠皮毛状态、修复大鼠咽部黏膜损伤、减轻大鼠咽部组织病理性损伤并降低大鼠血清中TNF-α的含量,表明清感冬饮可减轻急性咽炎大鼠炎症反应,对大鼠急性咽炎有防治作用。3.基于PI3K/AKT2/NF-κB信号通路探讨清感冬饮对raw264.7巨噬细胞促炎表型极化的影响(1)0.01-1μg/m L LPS对raw264.7巨噬细胞无毒性作用,并且呈浓度依赖性促进NO的释放(P<0.001),选取1μg

关键词：清感冬饮炎症巨噬细胞极化脂多糖 raw264.7巨噬细胞 PI3K/AKT2/NF-κB信号通路 AKT1/C/EBPβ信号通路

4T1乳腺癌细胞微环境对raw264.7巨噬细胞增殖及分化的影响

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4T1乳腺癌细胞微环境对RAW264.7巨噬细胞增殖及分化的影响

作者：郭陶陶承德医学院

学位级别：硕士

在我国女性最常见的恶性肿瘤中,乳腺癌(Breast cancer)占据着重要的位置。在世界范围内,乳腺癌的发病率及死亡率逐步呈现年轻化及上升的趋势。众所周知,巨噬细胞(Macrophage)是机体固有免疫中重要的免疫细胞。近年来的研究表明,在肿瘤... 详细信息

在我国女性最常见的恶性肿瘤中,乳腺癌(Breast cancer)占据着重要的位置。在世界范围内,乳腺癌的发病率及死亡率逐步呈现年轻化及上升的趋势。众所周知,巨噬细胞(Macrophage)是机体固有免疫中重要的免疫细胞。近年来的研究表明,在肿瘤组织中浸润着大量分化的巨噬细胞我们称之为肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs),尤以乳腺癌组织中的浸润最为多见。大量的证据表明,TAMs在乳腺癌的发生发展和转移中并没有通过诱发免疫应答起到抗肿瘤的作用,相反却起到了促进肿瘤进展的作用。目前认为TAMs有2种极化状态即经典活化型(M1型)和替代活化型(M2型),M1型TAMs在乳腺癌的发生发展中有促炎和抗肿瘤的作用,而M2型TAMs在乳腺癌免疫抑制、增殖及耐药性方面起着促进的作用,TAMs极化方式随着肿瘤微环境的不同发生改变。TAMs是乳腺癌微环境中重要的免疫细胞,乳腺癌细胞也依靠乳腺癌微环境赖以生存。近年来,越来越多的研究认为,乳腺癌微环境驱动着肿瘤相关巨噬细胞表型的极化。目的:本研究利用小鼠4T1乳腺癌细胞培养上清液及小鼠4T1乳腺癌细胞全细胞抗原上清液,模拟小鼠体内乳腺癌微环境培养小鼠raw264.7巨噬细胞,观察在体外小鼠4T1乳腺癌细胞肿瘤微环境中小鼠raw264.7巨噬细胞形态、增殖活性及相关细胞因子m RNA表达水平的变化。进一步探索在乳腺癌肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞功能发生改变的分子机制,从而发挥肿瘤相关巨噬细胞抗肿瘤活性的积极作用,为未来乳腺癌的免疫治疗提供理论依据。方法:1研究对象:小鼠4T1乳腺癌细胞、小鼠raw264.7巨噬细胞。2实验分组:对照组:将raw264.7巨噬细胞置于DMEM完全培养液中培养;4T1乳腺癌细胞培养上清组:将raw264.7巨噬细胞分别置于含25%、50%浓度的4T1乳腺癌细胞培养上清液的DMEM培养液中培养;4T1乳腺癌细胞全细胞抗原组:将raw264.7巨噬细胞分别置于含10%、20%浓度的4T1乳腺癌细胞全细胞抗原上清液的DMEM培养液中培养。3 4T1乳腺癌细胞培养上清液的制备:将4T1乳腺癌细胞以2.5×10/ml的浓度接种于含有1640培养基的T25培养瓶中,培养72小时后收集上清液离心、过滤除菌,-20℃储存备用。4 4T1乳腺癌细胞全细胞抗原上清液的制备:将4T1乳腺癌细胞以5×10/ml的浓度分装于冻存管,置于液氮中反复冻融3次后收集上清液离心、过滤除菌,-20℃储存备用。5倒置显微镜分别在各实验组培养第3天、5天时观察raw264.7巨噬细胞的形态及变化。6采用MTS实验分别在各实验组培养第3天、5天时检测raw264.7巨噬细胞的增殖活性。7采用Real-time PCR实验分别在各实验组培养第3天、5天时收集raw264.7巨噬细胞检测其白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素10(Interleukin-10,IL-10)、白介素12(Interleukin-12,IL-12)及肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)等细胞因子m RNA的表达。8统计学方法:实验数据使用SPSS 27.0软件进行分析。结果:1倒置显微镜观察raw264.7巨噬细胞形态:与对照组相比,4T1乳腺癌细胞培养上清组的raw264.7巨噬细胞生长快,在培养第2天时巨噬细胞体积变大,出现梭状改变,随着上清液浓度的增高其改变更为显著;4T1乳腺癌细胞全细胞抗原组的raw264.7巨噬细胞与对照组相比无明显改变。2 MTS实验结果提示:与对照组相比,4T1乳腺癌细胞培养上清组的raw264.7巨噬细胞在培养3天时其增殖率明显增高(P细胞全细胞抗原组的raw264.7巨噬细胞在培养3天及5天时其增殖率均随抗原浓度的升高呈现先增高后下降的趋势,但与对照组相比总体仍呈现上升的趋势(P细胞培养上清组及全细胞抗原组raw264.7巨噬细胞的IL-6、IL-12及TNF-α细胞因子的m RNA表达水平降低(P细胞因子的m RNA表达水平升高(P<0.05),而抗原组的IL-10表达水平升高不明显;在培养5天时,上清组中的IL-10及IL-12的m RNA表达水平升高(P<0.05),IL-6的表达水平降低(P<0.05)而TNF-α随上清浓度的增加表达水平呈先下降后升高的趋势(P<0.05),抗原组中的IL-6、IL-10及IL-12的m RNA表达水平降低(P<0.05),TNF-α的表达水平变化

关键词：肿瘤微环境肿瘤相关巨噬细胞极化 4T1乳腺癌细胞 raw264.7巨噬细胞细胞增殖细胞因子

抑制p38MAPK信号转导通路对钛颗粒诱导raw264.7巨噬细胞的影响

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宁夏医科大学学报 2022年第2期44卷 114-121页

作者：陈德胜张晨刘子歌宋国瑞郭凤英李燕宁夏回族自治区人民医院骨科银川750002 宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004

目的探讨抑制p38MAPK信号转导通路对钛(Ti)颗粒诱导raw264.7巨噬细胞的影响及可能机制。方法体外培养小鼠raw264.7巨噬细胞并通过加入不同剂量的p38MAPK信号转导通路抑制剂SB203580,分为对照组、SB20358060 nmol·L^(-1)组、SB203580120... 详细信息

目的探讨抑制p38MAPK信号转导通路对钛(Ti)颗粒诱导raw264.7巨噬细胞的影响及可能机制。方法体外培养小鼠raw264.7巨噬细胞并通过加入不同剂量的p38MAPK信号转导通路抑制剂SB203580,分为对照组、SB20358060 nmol·L^(-1)组、SB203580120 nmol·L^(-1)组、SB203580240 nmol·L^(-1)组;TRAP法检测各组小鼠raw264.7巨噬细胞转化为破骨细胞的能力;MTT检测各组小鼠raw264.7巨噬细胞的增殖;ELISA法检测细胞TNF-α和MMP-9含量的表达;实时荧光定量RT-PCR检测SB203580对Ti颗粒刺激raw264.7巨噬细胞分泌TNF-α、MMP-9 mRNA的表达。结果TRAP染色结果显示,与对照组比较,抑制剂SB203580能够明显抑制小鼠钛颗粒诱导下raw264.7巨噬细胞向破骨细胞的增殖、成熟和活化。加入SB203580后,Ti颗粒刺激的raw264.7巨噬细胞分泌的炎性因子TNF-α和MMP-9的蛋白表达降低(P均raw264.7巨噬细胞向破骨细胞转化,从而进一步抑制破骨细胞的增殖、分化和成熟,最终抑制骨溶解。

关键词：骨溶解 p38MAPK信号转导通路 SB203580 raw264.7巨噬细胞

不同食用菌多糖复配物对raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用

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清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的raw264.7巨噬细胞炎症

食品工业科技 2021年第17期42卷 366-372页

作者：谌淑平李明智董楠徐德昌陈晓敏胡婕伦钟虹光尧梅香聂少平南昌大学食品科学与技术国家重点实验室中加食品科学技术联合实验室(南昌)江西南昌 330047 江中食疗科技有限公司江西九江 330000

目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖(Tremella fuciformis polysaccharide)、茯苓多糖(Poriacocos polysaccharide)、香菇多糖(Lentinan)、猴头菇多糖(Hericium edodes polysaccharide)和竹荪多糖(Dictyophora indusiata polysaccharide)任意3种多糖复配得到的多糖复配物的免疫调节活性.方法:以raw264.7巨噬细胞为研究对象,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的复配物对巨噬细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法测定复配物处理后细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,以及流式细胞仪分析复配物处理后细胞吞噬能力.结果:与正常对照组相比,除了浓度为320μg/mL的茯苓多糖、香菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物,茯苓多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物以及香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物外,在检测浓度范围内10种多糖复配物可明显促进巨噬细胞的增殖,增强吞噬能力,提高细胞因子TNF-α的分泌量.其中,10μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和竹荪多糖的复配物促进巨噬细胞增殖的效果最佳,160μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和香菇多糖的复配物能最好的促进TNF-α的分泌和增强raw264.7的吞噬能力.结论:不同食用菌多糖的复配物均可调节巨噬细胞raw264.7的免疫活性.本结果可为开发免疫调节功能的食用菌复配多糖产品提供数据参考.

关键词：食用菌多糖复配 raw264.7巨噬细胞免疫调节

来源：评论

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天津中医药大学学报 2022年第6期41卷 737-745页

作者：苏瑞卢佳席智男王佳宝宋新波张晗苗琳天津中医药大学中医药研究院天津301617 天津中医药大学方剂学教育部重点实验室天津301617 天津中医药大学组分中药国家重点实验室天津301617 天津中医药大学天津301617 天津现代创新中药科技有限公司天津300392

[目的]通过构建脂多糖(LPS)诱导的raw264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮(QGDY)的抗炎作用及其机制。[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和raw264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反... 详细信息

[目的]通过构建脂多糖(LPS)诱导的raw264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮(QGDY)的抗炎作用及其机制。[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和raw264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件(ARE)和核因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的raw264.7巨噬细胞体外炎症模型,将raw264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组(1、10、100μg/mL),倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κB p65(p65)核移位情况;采用Western blot法检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)和p65蛋白表达情况。[结果]0.01~10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1~10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用。0.01~100μg/mL清感冬饮干预24 h对raw264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比,1~100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的raw264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10~100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达。[结论]清感冬饮可抑制LPS诱导的raw264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。

关键词：清感冬饮 raw264.7巨噬细胞脂多糖抗炎 NF-κB/iNOS/NO信号通路

不同分子量枸杞多糖对raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用

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中国新药杂志 2021年第12期30卷 1079-1086页

作者：王莹金红宇李耀磊董晓旭昝珂马双成中国食品药品检定研究院北京100050 北京中医药大学北京100029

目的:研究不同分子量枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠巨噬细胞raw264.7的免疫调节作用。方法:本研究通过水提醇沉及柱分离法以获得不同分子量的LBP成分。运用CCK8法检测不同给药浓度的LBP对raw 264.7细胞增殖的影... 详细信息

目的:研究不同分子量枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠巨噬细胞raw264.7的免疫调节作用。方法:本研究通过水提醇沉及柱分离法以获得不同分子量的LBP成分。运用CCK8法检测不同给药浓度的LBP对raw 264.7细胞增殖的影响;采用中性红吞噬实验测定LBP对细胞吞噬能力的影响;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达情况,采用Western Blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相应蛋白质的磷酸化水平。结果:通过分离纯化获得2个高纯度均一组分,分别为LBP1[重均分子量(Mw)=1207 kDa]和LBP2(Mw=125 kDa)。与对照组相比,不同浓度的LBP1和LBP2组分对巨噬细胞的增殖和吞噬能力均有明显的促进作用(P巨噬细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6和iNOS mRNA的表达,且呈现剂量依赖性。Western Blot法测定结果显示LBP1和LBP2诱导raw264.7细胞产生免疫应答与特异性激活JNK MAPK通路相关。此外,在对raw264.7细胞的刺激作用基础上,LBP1的调节作用明显优于LBP2。结论:LBP对raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用可能与其特异性激活JNK MAPK信号转导通路相关,且其活性强弱与LBP分子量表现出较大的关联性。

关键词：枸杞多糖免疫功能 raw264.7巨噬细胞丝裂原活化蛋白激酶细胞因子