清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

作     者：苏瑞 卢佳 席智男 王佳宝 宋新波 张晗 苗琳 LU Jia;XI Zhinan;WANG Jiabao;SONG Xinbo;ZHANG Han;MIAO Lin

作者机构：天津中医药大学中医药研究院天津301617 天津中医药大学方剂学教育部重点实验室天津301617 天津中医药大学组分中药国家重点实验室天津301617 天津中医药大学天津301617 天津现代创新中药科技有限公司天津300392 

出 版 物：《天津中医药大学学报》 (Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2022年第41卷第6期

页      面：737-745页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家科技部重点研发计划项目(2020YFA0708004) 天津市科技计划项目(22ZXGBSY00020) 

主　　题：清感冬饮 RAW264.7巨噬细胞 脂多糖 抗炎 NF-κB/iNOS/NO信号通路 

摘      要：[目的]通过构建脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮(QGDY)的抗炎作用及其机制。[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件(ARE)和核因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型,将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组(1、10、100μg/mL),倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κB p65(p65)核移位情况;采用Western blot法检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)和p65蛋白表达情况。[结果]0.01~10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1~10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用。0.01~100μg/mL清感冬饮干预24 h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比,1~100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10~100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达。[结论]清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。