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复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒的pk-15细胞中Bcl-2/BAXmRNA转录的影响

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中国农业科学 2014年第11期47卷 2242-2250页

作者：邵秋红凌榕镔朱兆荣刘娟郭志兴王鹏西南大学荣昌校区兽医科学研究中心中药创新研究室

【目的】探讨中药复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的猪肾细胞(pk-15)中凋亡基因Bcl-2/BAX mRNA转录的影响。【方法】体外扩增TGEV,用TGEV感染pk-15细胞的模型进行体外试验研究,... 详细信息

【目的】探讨中药复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的猪肾细胞(pk-15)中凋亡基因Bcl-2/BAX mRNA转录的影响。【方法】体外扩增TGEV,用TGEV感染pk-15细胞的模型进行体外试验研究,试验中设有复方苦芩组、空白组、模型组及黄芪多糖组,在测定了病毒半数感染细胞量(TCID50),复方苦芩及黄芪多糖药液对pk-15细胞的最大无毒浓度后,制作细胞爬片采用瑞士染色法染色观察pk-15细胞的形态变化;按试剂盒操作提取各试验组RNA并及时反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中Bcl-2和BAX mRNA转录情况。【结果】与空白组相比,模型组的pk-15细胞发生了明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),细胞变细长,细胞间成网状,细胞核着色较浅,出现核浓缩、固缩、碎裂等现象;与模型组比,复方苦芩组与黄芪多糖组细胞病变得到改善,而复方苦芩组效果更加明显,大部分细胞核结构清晰,染色质着色均一,少部分细胞核变大或碎裂;与空白组相比,模型组Bcl-2 mRNA转录量减少(P0.05);与空白组相比,模型组BAX mRNA转录量明显升高,而其他3组BAX基因转录差异不明显(P>0.05),模型组BAX基因转录量为空白组的1.440倍、复方苦芩组1.290倍、黄芪多糖组的1.490倍,差异极显著(P0.05);与空白组相比,模型组Bcl-2/BAX mRNA转录比值降低,差异极显著(P0.05)。【结论】复方苦芩可通过上调pk-15细胞Bcl-2 mRNA转录,下调BAX mRNA的转录,从而抑制TGEV引起的pk-15细胞凋亡。

关键词：复方苦芩猪传染性胃肠炎病毒 pk-15 Bcl-2 BAX 荧光定量PCR

利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的pk-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1094-1098,1105页

作者：张越秀张华伟李连峰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为研究猪源2’-5’寡腺苷酸合成酶2(OAS2)对CSFV复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除OAS2的pk-15细胞系(pk-OAS2-KO)。在构建pk-OAS2-KO细胞系时,设计2条分别靶向OAS2基因第1和第2外显子的特异性sg RNAs,将sg RNA插入LentiCRISPRv2载体获得重组质粒plentiCRISPRv2-sgRNA;将重组质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得携带sg RNA的慢病毒后以MOI 1转导pk-15细胞,通过嘌呤霉素药物筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,经基因测序和western blot鉴定OAS2敲除效果。利用MOI 0.01r CSFV-Rluc株(报告病毒)或CSFV Shimen株分别感染pk15细胞获得的pk-OAS2-KO细胞系,经荧光素酶活性检测和q RT-PCR证实敲除OAS2基因能够促进CSFV复制。综上,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了OAS2基因敲除的pk-15细胞系,并发现OAS2具有抑制CSFV复制的作用,本研究为进一步研究OAS2抗CSFV作用的分子机制提供了依据。

关键词： CRISPR/Cas9 2’-5’寡腺苷酸合成酶2 pk-15 猪瘟病毒

β2m基因在猪肾细胞系pk-15中的表达研究

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中国畜牧兽医 2020年第2期47卷 372-380页

作者：张宗辉王心怡曹海虹胡晓王宝宝高凤山大连大学生命科学与技术学院大连116622 河北省涿鹿县农业农村局涿鹿075600

为研究猪肾细胞系pk-15中Beta 2微球蛋白(Beta 2 microglobulin,β2m)基因的表达情况,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增β2m。回收后的基因克隆至pMD18-T载体,获得重组质粒,经Eco RⅠ和Hin dⅢ双酶切筛选后,阳性克隆送生物公司测序。序列经GE... 详细信息

为研究猪肾细胞系pk-15中Beta 2微球蛋白(Beta 2 microglobulin,β2m)基因的表达情况,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增β2m。回收后的基因克隆至pMD18-T载体,获得重组质粒,经Eco RⅠ和Hin dⅢ双酶切筛选后,阳性克隆送生物公司测序。序列经GENETYX version 9.0编辑分析,通过DNAMAN version 5.2.2与其他猪β2m基因进行序列比对分析,利用Mega 5.0的NJ法进一步分析其与其他物种β2m的分子进化关系,并在此基础上利用SWISS-MODEL和PDBsum预测该基因编码的成熟肽二级结构和三级结构。提取pk-15总蛋白,Western blotting检测和分析细胞中β2m的表达。结果显示,经RT-PCR扩增,成功获得β2m条带,大小约360 bp。经测序发现pk-15-β2m基因为364 bp,共编码118个氨基酸,其中成熟肽为98个氨基酸,N端信号肽含有20个氨基酸。序列分析证实pk-15细胞中β2m基因未发生突变;分子进化分析显示,pk-15-β2m与牛的亲缘关系最近,其次为羊、马等。多重序列比对发现,pk-15-β2m与牛、羊、马β2m成熟肽均为98个氨基酸,而其他物种β2m成熟肽为99个氨基酸;二级结构预测显示,pk-15-β2m成熟肽主要以β-折叠、β-转角和γ-转角为主,不含有α-螺旋。三级结构预测显示,pk-15-β2m成熟肽主要由7条β-折叠条带构成。Western blotting分析显示β2m在细胞中成功表达。本研究证实了猪肾细胞系pk-15中β2m在核酸和蛋白质水平均稳定表达,为下一步研究pk-15细胞的抗原递呈功能奠定了基础。

关键词：猪肾细胞 pk-15 β2m 克隆表达

敲除RIG-I基因的pk-15细胞系的建立及RIG-I对猪圆环病毒2型感染的作用

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中国动物传染病学报 2019年第5期27卷 14-21页

作者：许曼黄立平邵玉乐夏德利曾为俊王辉鲁国涛刘长明陈洪岩王金泉孟庆文新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除RIG-I基因的pk-15细胞,初步探究视黄酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene-I,RIG-I)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染的作用。本研究根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计了针对猪RIG-I基因的2条sgRNA,构建重组载体pUC19-RIG-I-sgRNA1和pUC19-RIG-I-sgRNA2,转染pk-15细胞,通过流式细胞仪分选单细胞、测序、Western blot检测RIG-I敲除情况。PCV2感染细胞后,通过荧光定量PCR分析RIG-I及其下游分子mRNA水平,IPMA方法及TaqMan定量PCR检测病毒增殖水平。结果显示,筛选出的1株RIG-I基因缺失37 bp的pk-15细胞,Western blot检测RIG-I蛋白不表达。PCV2感染正常pk-15细胞48 h和72 h后,RIG-I mRNA水平上调,表明PCV2可激活RIG-I。敲除RIG-I基因,可下调MAVS、STING、IRF3、IFN-β的mRNA水平,抑制PCV2在pk-15细胞中复制,初步表明RIG-I信号通路促进PCV2在pk-15细胞中复制。本研究为PCV2感染的天然免疫机制研究提供了良好的细胞模型。

关键词： CRISPR/Cas9基因编辑视黄酸诱导基因Ⅰ信号通路 pk-15 猪圆环病毒2型

镉通过Nrf2/HO-1通路诱导猪肾pk-15细胞铁死亡

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中国兽医学报 2024年第9期44卷 1992-1998页

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊吴亚王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾pk-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl_(2))对pk-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L ... 详细信息

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾pk-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl_(2))对pk-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L CdCl_(2)处理pk-15细胞3、6和12 h,通过比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白的表达水平,荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))含量。最后,用10μmol/L的HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理pk-15细胞6 h,再用10μmol/L CdCl_(2)处理pk-15细胞12 h,通过相差显微镜观察细胞形态,Western blot检测铁死亡相关蛋白表达水平。结果显示,CdCl_(2)处理后细胞活力下降,LDH、MDA和Fe^(2+)水平极显著升高(Ppk-15细胞铁死亡。ZnPP预处理组细胞形态明显好转,Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著下降(Ppk-15细胞铁死亡。

关键词：镉 pk-15 HO-1 铁死亡

猪传染性胃肠炎病毒诱导pk-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究

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中国预防兽医学报 2019年第3期41卷 256-260页

作者：龚双燕李小璟李幽幽朱玲徐志文四川农业大学动物医学院四川成都611130 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为探究pk-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染pk-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导pk-15细胞发... 详细信息

为探究pk-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染pk-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导pk-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染pk-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导pk-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 pk-15 细胞凋亡 Bcl-XL MCL-1 PUMA

猪瘟病毒高感染性pk-15细胞单克隆细胞株的筛选

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猪瘟病毒高感染性PK-15细胞单克隆细胞株的筛选

作者：孔令芸河南科技学院

学位级别：硕士

猪瘟(Classical Swine Fever)，早期称猪霍乱(Hog Cholera, HC)，是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus, CSFV)引起猪的一种急性、热性和高度接触性传染病，其特征为高热稽留和全身广泛性出血。猪瘟病毒(CSFV)属于黄病毒科（Flaviv... 详细信息

猪瘟(Classical Swine Fever)，早期称猪霍乱(Hog Cholera, HC)，是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus, CSFV)引起猪的一种急性、热性和高度接触性传染病，其特征为高热稽留和全身广泛性出血。猪瘟病毒(CSFV)属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus），是RNA病毒，具有感染性。CSFV在猪体内复制增殖，破坏机体多种细胞，使猪迅速发病并死亡。而在体外细胞培养中，CSFV并不能使细胞产生病理变化。CSFV在体外增殖的病毒滴度较低，而提高病毒滴度对研究CSFV的分子生物学特性和免疫学特性，以及制备CSFV单抗和疫苗都具有非常重要的作用。猪瘟病毒是单股正链线性RNA病毒，ORF编码一个由3898个氨基酸组成的多聚蛋白，在病毒和宿主细胞酶的作用下，形成至少12种成熟的病毒蛋白。用于CSFV分子流行病学分析的核苷酸片段主要有NS5B、E2和5’UTR等，其中NS5B和E2可用来精确区分毒株。根据CSFV的NS5B、E2和E0基因分群的结果一致，初步认为这3个基因在系统发生分析中具有高度的一致性。本研究通过设计E0、E2和NS5B基因特异性引物，扩增目的片段，然后通过测序及序列分析，确定使用的CSFV与shimen株同源性最高，为后续试验奠定背景基础。pk15细胞广泛应用于CSFV的分离与培养，但是其不均一性导致了病毒培养滴度不高。研究表明猪瘟病毒在体外培养中释放的病毒的量与细胞感染数量（阳性细胞）有关，所以提高细胞感染数量同时提高感染速度对提高病毒滴度有至关重要的作用。研究显示感染PCV2的pk15细胞培养物，约有20％pk-15细胞是PCV2易感的细胞群，该研究表明pk-15细胞的异质性与PCV2滴度的高低有密切关系。本实验通过IPMA检测发现CSFV对pk-15的感染也仅仅只有20%左右，所以获得均一的pk-15细胞有助于提高CSFV滴度。CSFV病毒滴度，即50％组织细胞感染剂量（TCID50），得到每毫升pk15细胞培养通常从104到105不等。为了获得均一的、针对培养CSFV高病毒滴度的pk15细胞，本研究通过有限稀释法对pk15亲代细胞进行克隆，获得两株pk15细胞克隆株，分别为pk15-1A6和pk15-3B1，与pk15亲代细胞相比，pk15-1A6和pk15-3B1TCID50分别能达到106.8TCID50/mL和103.61TCID50/mL，而pk15亲代细胞的TCID50则为104.88TCID50/mL。pk15-1A6单克隆细胞株感染CSFV的强度远远高于pk15母细胞，为以后CSFV疫苗评价及诊断研究奠定了基础。

关键词： CSFV 猪瘟病毒细胞生长 pk-15 单克隆细胞株亲代细胞病毒滴度病毒蛋白瘟病毒属 swine

猪伪狂犬病毒感染早期引起pk-15细胞转录组变化及差异表达基因分析

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猪伪狂犬病毒感染早期引起PK-15细胞转录组变化及差异表达基因分析

作者：杨高娟华中农业大学

学位级别：硕士

伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)可在猪群内引起传染性的伪狂犬病(Pseudorabies,PR),引起成年猪发热、母猪流产、死胎及仔猪死亡等症状。目前PR在我国还没有根除,给我国的养猪业带来经济损失。此前对PRV感染细胞转录组的研究往往更... 详细信息

伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)可在猪群内引起传染性的伪狂犬病(Pseudorabies,PR),引起成年猪发热、母猪流产、死胎及仔猪死亡等症状。目前PR在我国还没有根除,给我国的养猪业带来经济损失。此前对PRV感染细胞转录组的研究往往更多地关注在感染12h后的差异表达基因,而鲜有对感染早期发生的病毒吸附和侵入事件时的细胞转录组变化进行研究,同时对PRV粘附及侵入相关受体或基因的研究也知之尚少。本实验将PRV感染pk-15细胞0hpi、2hpi、6hpi、12hpi、24hpi、36hpi、48hpi的总RNA进行转录组测序,并对测序数据进行生物信息分析,筛选0hpi、2hpi、6hpi的差异表达基因,随后对这些差异表达基因进行功能注释,包括GO功能分析、KEGG通路分析、蛋白功能聚类分析、PPI网络分析,从而有助于我们理解在病毒感染早期的发生的生物学事件,寻找可能的病毒受体或影响病毒侵入的功能基因。另外,本次实验还通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对转录组测序数据筛选出来的显著差异表达的CYP1A1基因及文献报道过的PRV受体NECTIN-1、NECTIN-2基因设计靶向sgRNA分别在PRV的宿主细胞pk-15及3D4/21细胞中进行了基因敲除实验。得到结果表明:(1)PRV对pk-15细胞的感染存在时间与剂量效应,即随着病毒感染MOI和时间的增加,细胞出现致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)越明显。使用MOI为10的PRV-Eα毒株感染pk-15细胞时,84hpi仍能使细胞大量死亡,表明PRV-Eα毒株对于pk-15细胞是强致死毒株。(2)PRV-Eα感染pk-15细胞后,pk-15细胞和PRV基因组的转录水平随着感染时间的延长呈现显著负相关,感染6h后PRV编码基因开始表达。(3)以|log2FC|≥2,p≤0.001为条件,筛选出PRV感染2h后差异表达基因有830个,感染6h后差异表达基因有848个,感染2h到6h内差异表达基因有381个。在0-2 hpi、0-6 hpi、2-6 hpi都差异表达的基因有8个,在0-2 hpi与0-6hpi都差异表达的基因有410个,在0-6hpi与2-6hpi都差异表达的基因有137个,在0-2hpi与2-6 hpi都差异表达的基因有65个。(4)对PRV感染pk-15细胞3个时间点的感染差异表达基因进行功能注释:GO分析富集到与免疫应答、RNA聚合酶II启动子的转录负调节、炎症应答、脂多糖应答、突触囊泡内吞作用、pH调节等多个相关条目。KEGG富集到p53信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用和突触小泡循环等通路。蛋白功能分类到多数基因与水解酶、转运和受体功能相关。PPI网络分析富集到多个差异表达基因间存在互作关系。(5)对CYP1A1、NECTIN-1、NECTIN-2基因设计了有活性的靶向sgRNAs,通过慢病毒感染的方法在pk-15细胞中成功敲除了NECTIN-1基因,通过脂质体转染的方法在3D4/21细胞中实现了NECTIN-2基因的片段敲除。本研究通过对PRV感染pk-15细胞0hpi、2hpi、6hpi、12hpi、24hpi、36hpi、48hpi转录组测序数据的分析揭示了PRV在感染宿主细胞后病毒与宿主细胞转录组水平的变化,对感染不同时间点差异表达基因进行功能注释筛选出与病毒粘附和侵入相关的关键基因以及通路。同时通过CRISPR/Cas9技术对PRV粘附及侵入可能的相关基因CYP1A1、NECTIN-1、NECTIN-2进行敲除,为PRV的致病机制的研究提供参考,并为猪的抗病育种提供一些理论基础。

关键词：猪 PRV pk-15 粘附侵入差异表达基因基因编辑

RLRs和cGAS信号通路在PCV2感染pk-15细胞诱导IFN-β产生和病毒复制中的作用

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RLRs和cGAS信号通路在PCV2感染PK-15细胞诱导IFN-β产生和病毒复...

作者：黄蓓南京农业大学

学位级别：硕士

病毒入侵宿主细胞后,宿主细胞能通过模式识别受体识别入侵病毒,并诱导多种先天性免疫以及抗病毒基因、干扰素、趋化因子和促炎细胞因子的产生,这些产物协同抑制和控制病毒感染。但令人意外的是,体外研究表明用IFN-α或IFN-y处理PCV2感染... 详细信息

病毒入侵宿主细胞后,宿主细胞能通过模式识别受体识别入侵病毒,并诱导多种先天性免疫以及抗病毒基因、干扰素、趋化因子和促炎细胞因子的产生,这些产物协同抑制和控制病毒感染。但令人意外的是,体外研究表明用IFN-α或IFN-y处理PCV2感染的pk-15细胞后能促进病毒复制,表明干扰素与PCV2之间存在复杂的关系。但到目前为止,人们对于PCV2感染后是如何诱导干扰素产生以及PCV2本身诱导的干扰素是否能促进病毒复制仍然不清楚。因此本实验以pk-15细胞为模型,研究RLRs和cGAS信号通路在PCV2感染pk-15细胞时诱导IFN-β产生和病毒复制中的作用,以期更深入的了解PCV2是如何与宿主模式识别受体相互作用及其发病机制,同时为PCV2的防治提供理论基础。为了研究RIG-1或MDA-5在PCV2感染pk-15细胞中对诱导IFN-β产生和病毒复制的影响,本实验用荧光定量PCR和双萤光素酶报告的方法检测PCV2感染pk-15细胞后对IFN-β产生的影响,结果表明PCV2感染pk-15细胞72h后能够诱导IFN-β的显著上升（P＜0.01）;用IRF3抑制剂BX795预先处理pk-15细胞,然后再感染PCV2,结果显示IFN-β表达显著下降（P＜0.01）,而用NF-κB抑制剂BAY11-7082处理却未见IFN-β表达变化（P＞0.05）,表明PCV2是通过IRF3介导的信号通路而非NF-κB介导的信号通路诱导IFN-β产生;PCV2感染pk-15细胞72h后RIG-1、MDA-5和MAVS蛋白表达量显著上升（P＜0.01）,而干扰RIG-1或MDA-5后,IFN-β的表达水平则显著下降（P＜0.01）,表明PCV2通过RIG-1/MDA-5-MAVS-IRF3信号通路介导IFN-β产生;另外,绝对荧光定量PCR和间接免疫荧光结果显示,干扰RIG-1或MDA-5后PCV2感染pk-15细胞的病毒拷贝数和细胞感染率显著下降（P＜O.01）,表明PCV2能够通过RIG-1和MDA-5信号通路诱导干扰素产生从而促进自己复制。以上结果表明,PCV2感染pk-15细胞通过RJG-1和MDA-5信号途径诱导IFN-β产生,并且产生的IFN-β有利于促进病毒自身复制。cGAS是目前发现的最主要的DNA模式受体,且广泛地存在各种细胞中,主要识别进入到宿主细胞胞质的病毒DNA,并通过STING/IRF3信号通路诱导干扰素产生。PCV2是无囊膜的单链环状DNA,为了研究cGAS-STING信号途径是否参与了 PCV2诱导干扰素的产生,本实验首先用荧光定量PCR方法检测PCV2感染pk-15细胞24h,48h和72h后cGAS和STING的表达,发现cGAS mRNA的表达量在PCV2感染24h,48h和72h后均显著上升（P＜0.01）,STING mRNA表达量在PCV2感染72h后显著上升（P＜0.01）;Western blot结果表明STING蛋白表达量在PCV2感染后72h也明显上升;Native PAGE实验结果显示PCV2感染72h后STING显著增多;免疫荧光结果表明STING从胞浆到细胞核的位移也明显增多;干扰cGAS或STING后,PCV2感染pk-15细胞24h、48h和72h后,发现干扰cGAS 72h后IFN-β的表达水平显著下降（P＜0.01）,干扰STING 48h和72h后IFN-β的表达水平显著下降（P＜0.01）;此外,绝对荧光定量PCR结果表明,干扰cGAS或STING后PCV2感染pk-15细胞的病毒滴度显著下降（P＜0.01）,同样间接免疫荧光结果也表明干扰cGAS或STING后PCV2感染pk-15细胞的感染率显著降低（P＜0.01）。以上结果表明,PCV2感染pk-15细胞能够通过cGAS/STING信号传导途径诱导IFN-β表达,产生的IFN-β促进病毒自身复制。综上所述,PCV2 感染 pk-15 能通过 RIG-1/MDA-5-MAVS-IIRF3 和 cGAS-STING信号通路来诱导IFN-β产生。并且干扰RIG-1/MDA-5或cGAS/STING后,IFN-β的表达显著下降,同时PCV2的复制及感染率也都显著降低。

关键词： PCV2 pk-15 模式识别受体干扰素病毒复制