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A2AR基因敲除对新生小鼠HIBD神经细胞凋亡及p-jnk和AIF表达的影响

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A2AR基因敲除对新生小鼠HIBD神经细胞凋亡及P-JNK和AIF表达的影响

沙棘多糖对急性肝衰竭小鼠肝组织中p-ERK、p-jnk和p-p38表达的影响

2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班

作者：范海玲陈翔温州医学院附属第二医院

目的观察新生小鼠缺氧缺血脑损伤对大脑皮层、海马CA1区p-jnk、AIF及TUNEL阳性细胞表达的动态变化,探讨其相关性。研究基因敲除腺苷A2AR对新生小鼠缺氧缺血脑损伤神经细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制。方法1、SpF级健康7日龄新生A... 详细信息

目的观察新生小鼠缺氧缺血脑损伤对大脑皮层、海马CA1区p-jnk、AIF及TUNEL阳性细胞表达的动态变化,探讨其相关性。研究基因敲除腺苷A2AR对新生小鼠缺氧缺血脑损伤神经细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制。方法1、SpF级健康7日龄新生A2AR基因敲除(KO)小鼠32只及同窝野生型(WT)小鼠32只,分为KO组和WT组,每组下随机设假手术组(SKO、SWT,n=8),HIBD(Model)后分1d、3d、

关键词：新生小鼠 AIF p-jnk 神经细胞凋亡基因敲除

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沙棘多糖对急性肝衰竭小鼠肝组织中p-ERK、p-JNK和p-p38表达的影响

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠p-jnk蛋白表达的影响

第九届全国免疫学学术大会

作者：陈俊娜王玉珍内蒙古农业大学生命科学学院分子免疫学实验室

研究背景:我们以往研究表明,沙棘多糖可以剂量依赖地促进巨噬细胞的生长;促进巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和i-NOS等炎性因子mRNA的表达;减轻LpS诱导的小鼠肝细胞凋亡,具有一定的抗炎作用。ERK、jnk和p38通路是参与启动细胞凋亡的重要... 详细信息

研究背景:我们以往研究表明,沙棘多糖可以剂量依赖地促进巨噬细胞的生长;促进巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和i-NOS等炎性因子mRNA的表达;减轻LpS诱导的小鼠肝细胞凋亡,具有一定的抗炎作用。ERK、jnk和p38通路是参与启动细胞凋亡的重要通路,能通过TLR4信号通路激活,也能被TNF-α和IL-1β等前炎症因子激活,从而在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用。目前国内外对于沙棘多糖的抗炎效应及其机理研究都非常少,所以本实验从沙棘多糖对急性肝衰竭小鼠肝脏中p-ERK、p-jnk和p-p38表达的影响来初步揭示沙棘多糖的抗炎机理。目的:通过建立脂多糖(LpS)联合D-氨基半乳糖(D-Ga1N)诱导的小鼠急性肝衰竭模型,研究沙棘多糖对急性肝衰竭小鼠肝脏中p-ERK、p-jnk和p-p38表达的影响。方法:120只C57BL/6系雄性小鼠随机分为六组:(A)正常组;(B)模型组;(C)地塞米松阳性对照组;(D)沙棘多糖低剂量组;(E)沙棘多糖中剂量组;(F)沙棘多糖高剂量组。沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100、200mg/kg剂量的沙棘多糖溶液连续灌胃14天,其它三组灌等量的生理盐水。14天后,除正常组外,其它五组腹腔注射LpS(10μg/kg)联合D-GalN(700mg/kg)构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组腹腔注射等量的生理盐水,地塞米松阳性对照组同时腹腔注射地塞米松(10mg·kg)。建模8h后处死小鼠,摘取肝脏,提蛋白,通过SDSpAGE、Western Blot法检测各组小鼠肝脏组织中p-ERK、p-jnk和p-p38表达量的变化。结果:Western Blot结果显示,正常组小鼠肝脏组织中ERK、jnk和p38均有一定程度的磷酸化水平,模型组中p-ERK、p-jnk和p-p38的表达量显著高于正常组和地塞米松阳性对照组,沙棘多糖各剂量组与模型组相比,ERK、jnk和p38的磷酸化水平呈剂量依赖性降低。结论:沙棘多糖抑制了ERK、jnk和p38的磷酸化。

关键词：沙棘多糖急性肝衰竭 p-ERK p-jnk p-p38

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中国现代普通外科进展 2010年第7期13卷 518-522页

作者：孟中良张培建庄卓男苏辉张杰伍学艳蒋永军扬州大学第二临床医学院普通外科研究室江苏扬州225000

目的:探讨低氧预适应(Hp)对大鼠自体肝移植后p-jnk蛋白表达的影响及其保护作用。方法:采用改良的自体肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、自体肝移植(AT)组和+AT(Hp)组,每组32只。Hp组术前用8%氮氧混合气体处理90min。分别于术... 详细信息

目的:探讨低氧预适应(Hp)对大鼠自体肝移植后p-jnk蛋白表达的影响及其保护作用。方法:采用改良的自体肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、自体肝移植(AT)组和+AT(Hp)组,每组32只。Hp组术前用8%氮氧混合气体处理90min。分别于术后1、2、12和24h处死各组大鼠,每个时相点处死8只,取肝脏标本,抽血检测肝功能,免疫组织化学方法测定大鼠肝组织磷酸化的jnk(p-jnk)蛋白、细胞色素C的表达,并在透射电子显微镜下观察各组肝细胞形态学改变。结果:Hp组血清ALT和AST水平显著低于AT组,差异有统计学意义(pp组各时相点的肝功能明显优于AT组;Hp组各时相点p-jnk蛋白、细胞色素C的表达明显低于AT组,差异有统计学意义(pp组肝细胞无明显凋亡形态。结论:Hp对移植所导致的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;其机制可能是通过抑制jnk信号通路的持续激活,下调p-jnk蛋白的表达、抑制线粒体细胞色素C的释放而发挥其保护作用。

关键词：肝移植低氧预适应 p-jnk 再灌注损伤大鼠 Sprague-Dawley

痹肿消汤及拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织中p38与jnk通路影响

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痹肿消汤及拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织中P38与JNK通路影...

血清对SH-SY5Y细胞吗啡戒断后ERK1/2、p38和jnk磷酸化表达的影响

第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：梁清华肖玉美熊新贵徐则林

目的:观察痹肿消汤及拆方对胶原诱导性关节炎大鼠中丝裂原活化蛋白激酶(MAKs)通路中磷酸化p38(p-p38)和磷酸化jnk(p-jnk)的影响。方法:90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、痹肿消汤组(全方组)、清热解毒组(拆方1组)、祛风除湿组(拆方2组... 详细信息

目的:观察痹肿消汤及拆方对胶原诱导性关节炎大鼠中丝裂原活化蛋白激酶(MAKs)通路中磷酸化p38(p-p38)和磷酸化jnk(p-jnk)的影响。方法:90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、痹肿消汤组(全方组)、清热解毒组(拆方1组)、祛风除湿组(拆方2组)、活血化瘀组(拆方3组)。除正常组外其余各组大鼠足趾注射胶原蛋白乳剂制备胶原诱导性关节炎模型,10 d后加强免疫;初次免疫后第14天开始给全方组每天痹肿消汤灌胃,拆方1组每天拆方1号药灌胃,拆方2组每天拆方2号药灌胃,拆方3组每天拆方3号药灌胃,模型组蒸馏水灌胃,正常组自由饮水。分别于初次免疫后14,21,28 d观察大鼠全身状况,Western-blot检测磷酸化p38和磷酸化jnk在大鼠滑膜组织中的表达。结果与结论:胶原诱导性关节炎大鼠中磷酸化p38及磷酸化jnk表达较正常组显著增高。与模型组相比,全方组及拆1,拆2方组能下调磷酸化p38及磷酸化jnk的表达(pp38及磷酸化jnk的表达无明显差异(p>0.05)。与全方组比,各拆1拆2方组对下调磷酸化p38及磷酸化jnk的表达作用较弱,但无统计学意义(p>0.05)。结果证实,全方组及各拆方组可抑制类风湿关节炎中磷酸化p38及磷酸化jnk的表达。

关键词：胶原诱导性关节炎滑膜全方组拆方组丝裂原活化蛋白激酶 p-p38 p-jnk

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郑州大学学报（医学版） 2013年第4期48卷 455-459页

作者：李文杰王明洋白银亮程月芳李静刘宇张旗郑州大学药学院临床药学系郑州450001 兰州大学第二医院药剂科兰州730030 河南省肿瘤医院药剂科郑州450008

目的:探讨胎牛血清(FBS)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)吗啡戒断后细胞中ERK1/2、p38和jnk磷酸化表达的影响。方法:SH-SY5Y细胞分为无血清培养组和体积分数为10%血清培养组(有血清培养组)。细胞经10μmol/L吗啡作用48h后,10μmol/L纳洛... 详细信息

目的:探讨胎牛血清(FBS)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)吗啡戒断后细胞中ERK1/2、p38和jnk磷酸化表达的影响。方法:SH-SY5Y细胞分为无血清培养组和体积分数为10%血清培养组(有血清培养组)。细胞经10μmol/L吗啡作用48h后,10μmol/L纳洛酮戒断。在纳洛酮戒断不同时间后,收集细胞,应用Westernblot检测ERK1/2、jnk和p38蛋白磷酸化水平的变化。结果:无血清培养条件下纳洛酮戒断10min后SH-SY5Y细胞中ERK1/2磷酸化水平显著上调(F=6.619,ppp38磷酸化水平呈时间依赖性递增,同时也能引起jnk磷酸化水平的增加,但不随戒断时间的增加而升高。结论:SH-SY5Y细胞在无血清培养下,吗啡戒断时ERK1/2磷酸化为瞬时增高;血清培养下,吗啡戒断可诱导ERK1/2磷酸化持续增高。

关键词：吗啡纳洛酮戒断血清 p-ERK1 2 p-jnk p-p38 SH-SY5Y细胞

基于jnk通路探讨人源性重组蛋白p75ECD-Fc治疗缺血性脑卒中的作用

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基于JNK通路探讨人源性重组蛋白p75ECD-Fc治疗缺血性脑卒中的作用

作者：黄俊凌昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]脑卒中是一类具有高致命、高致残率的疾病,至今仍无特效的治疗药物。大脑中动脉栓塞时,缺血半暗带p75神经营养因子受体（p75 neurotrophin receptor,p75NTR）高表达,p75NTR通过结合神经营养因子促进神经元凋亡。课题组前期研究表... 详细信息

[目的]脑卒中是一类具有高致命、高致残率的疾病,至今仍无特效的治疗药物。大脑中动脉栓塞时,缺血半暗带p75神经营养因子受体（p75 neurotrophin receptor,p75NTR）高表达,p75NTR通过结合神经营养因子促进神经元凋亡。课题组前期研究表明,脑缺血时p75ECD-Fc阻断p75NTR而发挥抗脑缺血作用,但具体机制目前仍未知。本实验拟研究p75NTR是否参与脑缺血后的损伤;以及人源性重组蛋白p75ECD-Fc治疗脑缺血的作用和可能的作用机制。[方法]体内实验:培育p75NTR敲除的C57BL/6小鼠（p75NTR（-/-））。采用光化学法建立小鼠局灶性脑缺血模型。分组1:野生型假手术组、野生型模型组、p75NTR（-/-）假手术组、p75NTR（-/-）模型组,分组2:野生型假手术组、野生型模型组、野生型p75ECD-Fc组（10mg/kg）、野生型依达拉奉组（15 mg/kg）。每组15只小鼠。p75ECD-Fc溶液,仅给药1次。p75ECD-Fc组在缺血5h后尾静脉注射一次p75ECD-Fc;依达拉奉组在缺血5h后尾静脉注射依达拉奉,每天一次,连续7天;假手术组和模型组注射等量pBS稀释的人源性Fc片段。术后第3天每组5只小鼠取脑,TTC法检测脑缺血面积。余下小鼠术后第7天检测行为学,随后取脑,Western Blot、免疫组化法检测p-jnk、jnk、Caspase-3和Cleaved-Caspase-3等蛋白表达情况,TUNEL检测细胞凋亡,ELISA检测proBDNF表达量。体外实验:使用SH-SY5Y细胞。p75 siRNA沉默p75NTR基因。建立氧糖剥夺/再灌注模型（Oxygen Glucose Deprivation/Reoxygen,OGD/R）。分组 1:Control 组、OGD/R 组、siRNA 组、OGD/R+siRNA 组。分组 2:Control组、OGD/R 组、OGD/R+p75ECD-Fc 组、OGD/R+p75ECD-Fc+Sp600125组。p75ECD-Fc200pg/mL,Sp600125 10μM。CCK-8 法检测细胞活力,Western Blot、免疫荧光法检测蛋白表达情况,TUNEL检测细胞凋亡。[结果]1 体内实验:1.1行为学检测结果:①转轮试验:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组在转轮上运动的最大速度和时间均增加,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组在转轮上运动的最大速度和时间均增加,差异有统计学意义（p＜0.05）。②胶带移除试验:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组接触胶带与移除胶带时间均缩短,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组接触胶带与移除胶带时间均缩短,差异有统计学意义（p＜0.05）。③圆筒试验（）:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组双侧前肢接触圆筒壁的次数增加,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组双侧前肢接触圆筒壁的次数增加,差异有统计学意义（p＜0.05）。1.2 TTC检测结果:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组白色缺血梗死面积减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组白色缺血梗死面积减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。1.3 pro-BDNF（ELISA）检测结果:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组pro-BDNF表达量减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组pro-BDNF表达量减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。1.4 Western Blot检测结果:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组p-jnk、Caspase-3蛋白表达量减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组p-jnk、Caspase-3蛋白表达量减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。1.5 IHC检测结果:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组Caspase-3阳性表达的光密度值减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。与野生型模型组相比,野生型p75ECD-Fc组、野生型依达拉奉组Caspase-3阳性表达的光密度值减少,差异有统计学意义（p＜0.05）。1.6 TUNEL检测结果:与野生型模型组小鼠相比,p75NTR（-/-）模型组TUNEL凋亡阳性表达的光密

关键词：脑缺血 p75ECD-Fc proBDNF p-jnk Caspase-3

p38MApK和jnk信号通路在阿尔茨海默病、帕金森病患者外周血淋巴细胞中的表达及意义

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P38MAPK和JNK信号通路在阿尔茨海默病、帕金森病患者外周血淋巴细...

作者：张冲河北医科大学

学位级别：硕士

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种年龄相关的痴呆，最常发生于老年及老年前期，也是目前神经退行性疾病及痴呆的最常见原因。典型临床表现为进行性认知功能障碍和神经精神及行为损害。患者脑部有进行性的边缘系统及相关区... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种年龄相关的痴呆，最常发生于老年及老年前期，也是目前神经退行性疾病及痴呆的最常见原因。典型临床表现为进行性认知功能障碍和神经精神及行为损害。患者脑部有进行性的边缘系统及相关区域的新皮质选择性神经元缺失。其特征性的组织病理改变为神经炎性斑或老年斑(主要为淀粉样肽)的形成和异常细胞骨架蛋白的聚集(神经纤维缠结，NTFs)。我国60岁以上老年人口有1.2亿，痴呆患病率为3%，其中60%以上为阿尔茨海默病。帕金森病(parkinson’s disease, pD)，又名震颤麻痹(shaking palsy,paralysis agitans)于1817年由英国医生James parkinson首先系统的进行描述故而得名，是第二位最常见的神经系统变性疾病，患病率仅次于阿尔茨海默病，全世界大约有600万pD患者。pD的发病年龄在400岁之间，其中，500岁为发病高峰。我国55岁5岁人群患病率为约1%，并随着年龄增高而升高，男性稍高于女性。随着老年人口的快速增长，老龄化的社会问题成为世界各国关注的焦点，阿尔茨海默病和帕金森病的发病率也逐年上升。AD已成为继肿瘤、心血管疾病、脑血管疾病之后导致死亡的第四位疾病。阿尔茨海默病和帕金森病严重影响患者的生活质量，晚期患者生活自理能力严重丧失，极大地增加了社会和家庭的经济负担和护理负担。虽然引起AD和pD发病的病理机制尚未完全阐明，但诸多研究结果显示，神经细胞凋亡在AD和pD的发病机制中占有重要地位。而且，有研究表明AD的细胞凋亡发生在疾病的早期，不仅局限于神经元，而且体现在外周血淋巴细胞和成纤维细胞。近期也有资料显示，pD的细胞凋亡除发生在脑神经元外，在外周血淋巴细胞中也有发现。 p38MApK和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, jnk)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MApK)的重要家族成员，为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在哺乳动物细胞内广泛表达。p38MApK和jnk信号通路通常由紫外线、渗透压变化、各种细胞因子和生理应激等激活，合称为MApK应激信号通路，它们除了在介导炎症、应激等多种细胞反应中起着重要的作用外,还与细胞的生长、发育和分化密切相关。越来越多的研究亦发现，p38MApK和jnk的表达和活性的变化，可以有效调节和阻断关键的信号通路，调控细胞凋亡。外周血采集方便，为研究细胞凋亡事件在AD、pD发病机制中的作用和寻找可干预的靶点提供了方便有用的模型。如果能从外周血中获得简便、有效的标志物将对AD的诊断及治疗产生重要意义，但至今尚无这样的标志物为临床所应用。目的：1本研究从蛋白水平出发，研究AD和pD患者淋巴细胞中应激活化蛋白激酶p38MApK和jnk的表达情况，为筛查疾病的可干预靶点提供细胞模型。 2在AD外周血淋巴细胞中研究调控细胞凋亡的相关激酶p38MApK及jnk的表达及活化水平，寻找诊断AD的特异性外周标记物。 3同时，对年龄和教育程度相匹配的正常人及帕金森病患者外周血淋巴细胞中p38MApK和jnk的表达及其活性进行检测，从而明确该指标的特异性。方法：1分别根据美国国立神经病语言障碍卒中研究所和阿尔茨海默病及相关疾病学会(the national institute of neurological and communicativedisorders and stroke and the Alzheimer’s disease and related disordersassociation，NINCDS-ADRDA)很可能AD的诊断标准和2006年中华医学会公布的pD诊断标准筛选病人，收集2010年9月至2011年12月河北医科大学第二医院神经内科门诊就诊的很可能AD患者20例、pD患者20例、正常对照组20例，征得入选者或其监护者同意，利用简易精神状态量表(MMSE)、临床痴呆量表(CDR)等综合评价认知障碍的程度并记录入选者的个人信息。 2所有入选者均于上午9：001：00抽取15ml新鲜静脉血置于抗凝管中，用Ficoll密度梯度离心法提取外周血淋巴细胞。 3从已提取的外周血淋巴细胞中提取总蛋白，采用Western Blotting技术，检测其中p38MApK、p-p38MApK、jnk及p-jnk的蛋白表达水平。 4统计学处理。采用SpSS17.0统计软件包进行处理。结果：与正常对照组相比，AD和pD患者外周血淋巴细胞中p-p38MApK、p-jnk蛋白表达水平均显著升高(ppD组差异无统计学意义(p>0.05);而AD和pD患者外周血淋巴细胞中总p38MApK、总jnk蛋白表达水

关键词：阿尔茨海默病帕金森病淋巴细胞 p38MApK p-p38MApK jnk p-jnk 细胞凋亡

磷酸化jnk在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中表达的研究

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中国实验诊断学 2008年第11期12卷 1347-1349页

作者：张宇虹唐建武王绍清李玲孙成荣王波王梅大连医科大学附属第二医院超声科辽宁大连116027 大连医科大学病理学教研室辽宁大连116044 大连医科大学附属第二医院实验中心辽宁大连116027

目的观察磷酸化jnk(p-jnk)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-p)中的表达水平,分析其在这两个细胞株中表达的关系及意义,以进一步探讨jnk基因在肝癌淋巴道转移过程中的作用。方法以小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移株(Hca-F)和... 详细信息

目的观察磷酸化jnk(p-jnk)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-p)中的表达水平,分析其在这两个细胞株中表达的关系及意义,以进一步探讨jnk基因在肝癌淋巴道转移过程中的作用。方法以小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移株(Hca-F)和低转移株(Hca-p)为研究对象,采用Western Blot检测p-jnk在Hca-F和Hca-p两细胞株的表达。结果p-jnk在Hca-F细胞株中的表达显著高于Hca-p,二者间差异有显著性(pp-jnk可能在促进肝癌淋巴道转移中发挥作用,本研究为进一步探讨其机制和功能奠定了基础。

关键词：肝癌淋巴道转移 p-jnk Western Blot

磷酸化jnk在高温致神经管畸形中的表达及其意义研究

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医学研究与教育 2009年第3期26卷 5-7,10页

作者：潘晓燕高彦丽马金龙陈晓新疆医科大学病理学教研室新疆乌鲁木齐830011 山东省立医院山东济南250100

目的研究磷酸化jnk(p-jnk)在高温致神经管畸形中的表达及其意义。方法在高温致神经管畸形的动物模型上,用Western blot方法检测p-jnk在实验组和对照组神经上皮中的表达。结果实验组p-jnk蛋白表达增高。9 d与10 d实验组p-jnk蛋白表达升高... 详细信息

目的研究磷酸化jnk(p-jnk)在高温致神经管畸形中的表达及其意义。方法在高温致神经管畸形的动物模型上,用Western blot方法检测p-jnk在实验组和对照组神经上皮中的表达。结果实验组p-jnk蛋白表达增高。9 d与10 d实验组p-jnk蛋白表达升高,与9 d和10 d对照组相比有显著差异(pp-jnk蛋白表达较9 d与10 d实验组p-jnk蛋白表达有所下降,但仍高于11 d对照组,两者相比有显著差异(pp-jnk可能在促进高温致神经管畸形中发挥作用。

关键词：高温神经管畸形 p-jnk