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古代彩绘颜料胶结材料maldi-tof-ms分析表征(Ⅰ)

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科学通报 2013年第3期58卷 211-217页

作者：安晶晶闫宏涛西北大学化学与材料科学学院西安710069

建立了古代彩绘颜料鸡卵蛋白胶结材料基质辅助激光解析电离飞行质谱(maldi-tof-ms)分析表征方法.探讨优化了彩绘颜料鸡卵蛋白胶结材料样品前处理和测定条件,进行彩绘颜料鸡卵蛋白胶结材料模拟样品和秦俑彩绘样品的maldi-tof-ms"肽质谱指... 详细信息

建立了古代彩绘颜料鸡卵蛋白胶结材料基质辅助激光解析电离飞行质谱(maldi-tof-ms)分析表征方法.探讨优化了彩绘颜料鸡卵蛋白胶结材料样品前处理和测定条件,进行彩绘颜料鸡卵蛋白胶结材料模拟样品和秦俑彩绘样品的maldi-tof-ms"肽质谱指纹"图谱分析表征研究.结果表明秦始皇兵马俑彩绘颜料胶结材料并非鸡卵蛋白.这对于古代彩绘颜料蛋白类胶结材料的分析表征,秦俑彩绘的研究、保护和修复具有一定的实际意义和参考价值.

关键词：彩绘文物胶结材料鸡卵蛋白 maldi—tof—ms

maldi-tof-ms技术筛选牛奶中氟喹诺酮类药物

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食品研究与开发 2013年第23期34卷 52-56页

作者：张金玲李凯孙军房灵军赵晗丁葵英张启迪潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261041 滨州六和隆达农牧有限公司山东滨州256600 青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109

前处理过程是整个食品安全检测过程中最耗时耗力,最繁琐,并且最影响检测结果的一环。开发高效快速省时省力的前处理方法是未来的研究方向。本文建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)技术快速筛选牛奶中25中氟喹诺酮类药... 详细信息

前处理过程是整个食品安全检测过程中最耗时耗力,最繁琐,并且最影响检测结果的一环。开发高效快速省时省力的前处理方法是未来的研究方向。本文建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)技术快速筛选牛奶中25中氟喹诺酮类药物残留的方法。将样品和基质混合点于靶板之上,直接进入基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行测定,省去了繁琐的前处理过程。当牛奶中氟喹诺酮类药物残留量超过0.05 mg/kg时,可以有效检测到25种氟喹诺酮类药物残留中的18种。

关键词： maldi—tof—ms 氟喹诺酮牛奶快速检测

NM23-H1、DJ1和TIM1在低分化鼻咽鳞癌组织和CNE2细胞株中共同表达

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生物化学与生物物理进展 2005年第4期32卷 338-346页

作者：冯雪萍陈主初肖志强杨海燕诸葛勤朱果杨轶轩李明李萃李茂玉李峰张鹏飞肖健云中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组重点实验室长沙410008 中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科长沙410008

鼻咽癌为一种好发于鼻咽项前壁及咽隐窝的头颈肿瘤,98%属低分化鳞癌.鼻咽癌就诊的患者中约75%已有颈淋巴结转移,颅神经受累(Ⅱ～Ⅵ,Ⅸ～Ⅻ)也较易发生.CNE2为一种低分化鼻咽鳞癌细胞系,其生物学行为具有低分化鼻咽鳞癌的一些共同特点.... 详细信息

鼻咽癌为一种好发于鼻咽项前壁及咽隐窝的头颈肿瘤,98%属低分化鳞癌.鼻咽癌就诊的患者中约75%已有颈淋巴结转移,颅神经受累(Ⅱ～Ⅵ,Ⅸ～Ⅻ)也较易发生.CNE2为一种低分化鼻咽鳞癌细胞系,其生物学行为具有低分化鼻咽鳞癌的一些共同特点.选择恶性程度高的鼻咽癌组织(Ⅳ期,低分化鼻咽鳞癌)和恶性程度高的低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2为研究样本,应用双向凝胶电泳技术获得了6例分辨率较高、重复性较好的低分化鼻咽鳞癌组织和CNE2细胞系双向凝胶电泳图谱,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)技术,分析了145个蛋白质斑点(组织66个点,细胞株79个点),共鉴定出了74种蛋白质,其中瘤基因DJ1、转移相关基因NM23-H1和磷酸丙糖激酶异构酶1(TIM1)3种蛋白质,在CNE2细胞系和该6例低分化鼻咽鳞癌组织中均共同表达.并进一步应用RT-PCR法检测低分化鼻咽鳞癌细胞系CNE2和12例低分化鼻咽鳞癌组织三者mRNA的表达:在细胞系CNE2和3例Ⅳ期低分化鼻咽鳞癌病人的组织中三者全表达,3例Ⅲ期及6例Ⅱ期也各有1例为全表达,而在正常对照的6例慢性鼻咽炎组织中未检测到三者的同时表达且有一例为全阴性,NM23-H1、DJ1和TIM1三者的mRNA在Ⅲ、Ⅳ期低分化鼻咽鳞癌组织共同表达,与正常对照组织相比,发现两者有显著性差异(x2=10.214,P<0.005).NM23-H1、DJ1和TIM1三者的共同表达,可能与低分化鼻咽鳞癌的发生发展有关.

关键词：低分化鼻咽鳞癌 2-DE maldi—tof—ms 蛋白质组 RT—PCR

应用蛋白质组学技术筛选胃癌SGC-7901细胞中的let-7a功能相关蛋白

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生物化学与生物物理进展 2011年第5期38卷 441-448页

作者：朱益民徐其董来荣刘志明嘉兴市第二医院肿瘤外科嘉兴314000 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021

为探讨let-7a表达下调在胃癌发病中的机制,高通量地检测了与let-7a功能相关的蛋白质.首先采用基因克隆技术稳定过表达SGC-7901细胞系的let-7a基因,然后用蛋白质组学技术研究稳定过表达该基因对SGC-7901细胞蛋白质表达谱的影响.通过对SGC... 详细信息

为探讨let-7a表达下调在胃癌发病中的机制,高通量地检测了与let-7a功能相关的蛋白质.首先采用基因克隆技术稳定过表达SGC-7901细胞系的let-7a基因,然后用蛋白质组学技术研究稳定过表达该基因对SGC-7901细胞蛋白质表达谱的影响.通过对SGC-7901/let-7a细胞的蛋白质表达谱改变的研究,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)分析鉴定了10个差异表达蛋白质.这些差异表达蛋白质可能是let-7a功能相关蛋白质,其中抗氧化蛋白2、胰岛素样生长因子结合蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、四氢叶酸合成酶、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Rho-GTPsae激活蛋白4表达上调,Skp2蛋白、血小板黏附蛋白CD41、纤维连接蛋白、Cks1蛋白表达下调.部分差异表达蛋白质如细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Skp2蛋白和纤维连接蛋白经蛋白质印迹分析进行了验证.在SGC-7901/let-7a中鉴定的10个差异表达蛋白质涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为let-7a功能相关蛋白质,为阐明let-7a表达下调在胃癌发病中的机制提供了重要线索.

关键词： miRNA 胃癌蛋白质组学双向电泳 maldi—tof—ms

毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析

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华东理工大学学报（自然科学版） 2013年第5期39卷 565-571页

作者：刘海峰周祥山庞甲佩刘立岗胡永水张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 山东阿华生物药业有限公司山东聊城252201 山东东阿阿胶股份有限公司山东聊城252201

利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白... 详细信息

利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,得到的样品经过maldi-tof-ms和N末端测序,证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象,并对产生不均一性的原因进行了分析。实验同时证实,利用毕赤酵母得到的胰岛素前体,经胰蛋白酶酶切后,生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30,且C末端未发生降解,这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路。

关键词：毕赤酵母胰岛素前体反相层析 maldi—tof—ms N末端测序

夏枯草提取物作用Jurkat细胞的蛋白质组学研究

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中药材 2009年第6期32卷 917-922页

作者：张明智孙振昌付晓瑞陈长英丁梦杰郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052

目的:研究夏枯草提取物作用于Jurkat细胞后蛋白质组的变化。方法:体外培养Jurkat细胞,用MTT法观察不同浓度夏枯草提取物对细胞的增殖抑制作用。加入20μg/mL夏枯草提取物作用于细胞48 h,提取总蛋白,进行双向电泳测定,凝胶银染显色,用Ima... 详细信息

目的:研究夏枯草提取物作用于Jurkat细胞后蛋白质组的变化。方法:体外培养Jurkat细胞,用MTT法观察不同浓度夏枯草提取物对细胞的增殖抑制作用。加入20μg/mL夏枯草提取物作用于细胞48 h,提取总蛋白,进行双向电泳测定,凝胶银染显色,用ImageMaster 2D Platium 5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质。切取差异点,胶内酶切后进行maldi-tof-ms分析和数据库搜索,实现对蛋白点的定性鉴定。结果:夏枯草提取物可显著抑制Jurkat细胞的生长,且具有一定的量效关系。经双向电泳和质谱后,成功鉴定了11个蛋白质,包括glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、coagulation factor VII、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L、heat shock 70 kDa protein 8 isoform 2、immunoglobulin heavy chain variable region、heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1、heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L(为heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1不同亚型)、zinc finger protein 43、chaperonin containing TCP1、subunit 6A (zeta 1)、isoform CRA-b。结论:夏枯草提取物可显著抑制Jurkat细胞的生长,并引起Jurkat细胞蛋白质组的改变,这可能是夏枯草提取物抗肿瘤作用的机制之一。

关键词：夏枯草 Jurkat细胞蛋白质组学 maldi—tof—ms

玉米T型细胞质雄性不育系与相应保持系线粒体蛋白质组中的差异蛋白

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分子细胞生物学报 2007年第6期40卷 410-418页

作者：张维佳李纯正黄海泉王振英彭永康天津师范大学生物系天津300387

利用固相pH3-10梯度双向凝胶电泳,对玉米T型细胞质雄性不育系(T-Cms)及其相应保持系叶片(苗期、拔节期、孕穗期),胚轴,胚根和花药(花粉母细胞减数分裂期、花粉粒小孢子单一双核期)线粒体蛋白质组中的差异蛋白进行分析。PDQuest 2D图像... 详细信息

利用固相pH3-10梯度双向凝胶电泳,对玉米T型细胞质雄性不育系(T-Cms)及其相应保持系叶片(苗期、拔节期、孕穗期),胚轴,胚根和花药(花粉母细胞减数分裂期、花粉粒小孢子单一双核期)线粒体蛋白质组中的差异蛋白进行分析。PDQuest 2D图像软件分析表明,苗期和拔节期叶片约有150个蛋白质斑点,胚轴和胚根中可识别出150个线粒体蛋白质斑点,花药中约有100个斑点。利用maldi-tof-ms方法,运用MASCOT软件于NCBI进行数据查询,对T-Cms与相应保持系中存在的差异蛋白进行归属鉴定,在T-Cms中存在,保持系中缺失的线粒体蛋白质有:r40c1 protein(胚轴中),mature anther-specific protein,DNA-directed RNA polymerase 23kD subunit,hex- okinaseⅡ和T-Cms中缺失而在保持系中存在的有:glutathione S-transferase,putative protein。其中T-Cms与相应保持系间,线粒体蛋白质组呈现出差异的组织有胚轴、胚根和小孢子单-双核期的花药。叶片的不同发育时期线粒体蛋白质组呈现明显变化,但T-Cms与保持系间没有差异。在小孢子单-双核期(花粉败育期)的花药中,T-Cms与保持系间线粒体蛋白质组出现明显差异,线粒体蛋白质组出现变异的时期与花粉败育时期相一致。

关键词：线粒体蛋白质组花粉败育 maldi—tof—ms 玉米 T型细胞质雄性不育

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人胰腺癌胰液蛋白质差异表达分析

中国肿瘤临床 2008年第5期35卷 265-268页

作者：朱峰吕顺莉高军龚燕芳李兆申上海交通大学附属第一人民医院第二军医大学附属长海医院消化内科上海市300080

目的:应用蛋白质组学方法分析人胰腺癌患者胰液蛋白质表达。方法:通过内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)中放置鼻胰管引流收集患者胰液,利用双向凝胶电泳,分离5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石等量混合胰液(200μg)的总蛋白质,用图... 详细信息

目的:应用蛋白质组学方法分析人胰腺癌患者胰液蛋白质表达。方法:通过内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)中放置鼻胰管引流收集患者胰液,利用双向凝胶电泳,分离5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石等量混合胰液(200μg)的总蛋白质,用图像分析软件识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱,搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:1)经ERCP留置鼻胰管成功收集胰液标本,胰液量约为35～200ml,Brad-ford法测定蛋白质浓度为0.8～4.6μg/μl。同一胰液标本(200μg)的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性;5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石等量混合胰液自身比较后可重复的蛋白质点均在75%以上。2)对图像分析软件识别的9个差异蛋白质点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)分析,鉴定出胰腺癌相关的差异表达蛋白质。结论:人胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者胰液的蛋白质谱存在一定的差异。

关键词：胰腺癌胰液双向凝胶电泳 maldi—tof—ms

β2肾上腺素受体基因Arg16Gly位点多态性与华南人群哮喘相关性研究

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免疫学杂志 2012年第8期28卷 687-690,702页

作者：何选秋李粉霞谭家余杨学习南方医科大学第一临床医学院广州510515 生物技术学院抗体工程研究所南方医科大学附属中山市博爱医院中心ICU 中山528403

目的探讨β2肾上腺素受体基因（ADRB2）SNP位点rs1042713即突变位点Arg16Gly的多态性与华南汉族人群支气管哮喘发病的相关性。方法采用病例对照研究,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（maldi-tof-ms）对rs1042713进行基因分型... 详细信息

目的探讨β2肾上腺素受体基因（ADRB2）SNP位点rs1042713即突变位点Arg16Gly的多态性与华南汉族人群支气管哮喘发病的相关性。方法采用病例对照研究,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（maldi-tof-ms）对rs1042713进行基因分型，对实验结果运用X^2检验和二分类Logistic回归进行统计学相关性分析。结果rs1042713多态位点AA、AG、GG3种基因型在哮喘患者的频率为18．7％、76．0％和5．3％，与对照组（33．8％，44．6％和21．6%）相比具有显著差异（X^2=36．28，P〈O．001）；对年龄和性别进行校正后，发现相对于AA＋GG基因型，携带AG基因型的哮喘发病风险增加（OR=4.37，95％CI：2．64～7．23）。结论华南汉族人群哮喘的发病机制可能与SNP rs1042713位点的单核苷酸多态性有关,杂合子基因型AG为其发病的危险因素。

关键词：支气管哮喘 ADRB2 Arg16Gly 单核苷酸多态性 maldi—tof—ms