大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析

作     者：丁秀臻 孔祥珍 陈业明 张彩猛 华欲飞 DING Xiuzhen;KONG Xiangzhen;CHEN Yeming;ZHANG Caimeng;HUA Yufei

作者机构：江南大学食品学院食品科学与工程国家重点实验室江苏无锡214122 

出 版 物：《中国油脂》 (China Oils and Fats)

年 卷 期：2016年第41卷第12期

页      面：31-36页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 083201[工学-食品科学] 

基　　金：国家自然科学基金(31201380) 江苏省自然科学基金(BK2011151) 

主　　题：大豆球蛋白酶解物 巯基肽 还原 Thiolpropyl—Sepharose 6B MALDI—TOF—MS 

摘      要：建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化。研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8μmol/g提高到了113.8μmol/g。共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80%,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min。此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除。MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性。