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M2巨噬细胞特征基因风险评分能准确预测HBV相关肝细胞癌患者的预后

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南方医科大学学报 2024年第5期44卷 827-840页

作者：刘鹏程娄丽娟刘霞王建姜颖军事科学院//军事医学研究院北京102206

目的探讨在乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)中M2巨噬细胞特征基因(mRG)对患者预后的评估价值及潜在的分子机制。方法从TCGA数据库获取73例HBV相关肝HCC患者的转录组数据,通过WGCNA识别M2巨噬细胞相关基因模块,利用LASSO鉴定出关键mR... 详细信息

目的探讨在乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)中M2巨噬细胞特征基因(mRG)对患者预后的评估价值及潜在的分子机制。方法从TCGA数据库获取73例HBV相关肝HCC患者的转录组数据,通过WGCNA识别M2巨噬细胞相关基因模块,利用LASSO鉴定出关键mRG并构建风险评分,并在外部数据集中验证风险评分的预测性能。应用CIBERSORT和R.pRRophetic分析风险评分与免疫细胞浸润、药物敏感性的关系。通过GSVA和GSEA对高风险组和低风险组的差异基因进行通路富集分析。R.Seurat验证在HCC中表达mRG的细胞类型,并通过R.Cellchat分析细胞互作强度,找到与HCC进展相关的重要细胞类型。流式细胞术检测肝癌条件培养基诱导THP-1向m2样极化,RT-qPCR验证mRG在HBV阳性的肝癌细胞系和M2巨噬细胞中表达。结果M2巨噬细胞高浸润状态与患者不良预后显著相关(P=0.025)。高风险组的总生存期(OS)均显著低于低风险组(训练集P=0.021,测试集P=0.046)。高风险组中M2巨噬细胞显著富集(P=0.03),低风险组中幼稚B细胞显著富集(P=0.049)。药物BI.2536对高风险组更有效(P=0.025),AG.014699(P=0.044)、AKT.inhibitor.VIII(P=0.041)、AZD.0530(P=0.0033)、AZD7762(P=0.0051)和BmS.708163(P=0.015)对低风险组更有效。通路富集分析结果表明,增殖相关通路和代谢相关通路在高风险组中富集。单核细胞在高风险组HCC进展的细胞互作中最为活跃。VTN在PLC/PRF/5中的表达显著上调(Pm27和GmPR在m2样THP-1中的表达显著上调(P=0.0037、P=0.0015、P=0.0071、P=0.0004)。结论mRG风险评分能准确预测HBV相关HCC患者的预后,揭示其肿瘤微环境的差异,为HCC患者的精准治疗提供了指导。

关键词： M2巨噬细胞肝细胞癌预后模型乙型肝炎病毒

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M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

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中国药科大学学报 2023年第1期54卷 95-106页

作者：张衡陈倩倩桂艳萍黄敏郭雅冰赵丽中国药科大学基础医学与临床药学学院南京211198 中国药科大学药学动物实验中心南京211198

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数... 详细信息

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。

关键词：胶质母细胞瘤 M2巨噬细胞外泌体 miR-1260b AJAP1

M2巨噬细胞特征基因风险评分能准确预测HBV相关肝细胞癌患者的预后

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南方医科大学学报 2024年

作者：刘鹏程娄丽娟刘霞王建姜颖军事医学研究院军事科学院

目的探讨在乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌中M2巨噬细胞特征基因（mRG）对患者预后的评估价值及潜在的分子机制。方法从TCGA数据库获取73例HBV相关肝细胞癌患者的转录组数据，通过WGCNA识别M2巨噬细胞相关基因模块，利用LASSO鉴定... 详细信息

目的探讨在乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌中M2巨噬细胞特征基因（mRG）对患者预后的评估价值及潜在的分子机制。方法从TCGA数据库获取73例HBV相关肝细胞癌患者的转录组数据，通过WGCNA识别M2巨噬细胞相关基因模块，利用LASSO鉴定出关键mRG并构建风险评分，并在外部数据集中验证风险评分的预测性能。应用CIBERSORT和R.pRRophetic分析风险评分与免疫细胞浸润、药物敏感性的关系。通过GSVA和GSEA对高风险组和低风险组的差异基因进行通路富集分析。利用R.Seurat验证在HCC中表达mRG的细胞类型，并通过R.Cellchat分析细胞互作强度，找到与HCC进展相关的重要细胞类型。利用流式细胞术检测肝癌条件培养基诱导THP-1向m2样极化，RT-qPCR验证mRG在HBV阳性的肝癌细胞系和M2巨噬细胞中表达。结果 M2巨噬细胞高浸润状态与患者不良预后显著相关（P=0.025）。mRG相关风险评分公式Riskscore=VTN×（-0.0498）+GCLC×0.0677+PARVB×0.0922+TRIm27×0.1797+GmPR×0.4240能够有效预测HBV相关HCC患者的预后，高风险组的总生存期（OS）均显著低于低风险组（训练集P=0.021，测试集P=0.046）。高风险组中M2巨噬细胞显著富集（P=0.03），低风险组中幼稚B细胞显著富集（P=0.049）。药物BI.2536对高风险组更有效（P=0.025）,AG.014699(P=0.044)、AKT.inhibitor.VII(I P=0.041)、AZD.0530(P=0.0033)、AZD7762(P=0.0051)和BmS.708163(P=0.015)对低风险组更有效。通路富集分析结果表明，增殖相关通路和代谢相关通路在高风险组中富集。单核细胞在高风险组HCC进展的细胞互作中最为活跃。VTN在PLC/PRF/5中的表达显著上调（Pm27和GmPR在m2样THP-1中的表达显著上调（P=0.0037、P=0.0015、P=0.0071、P=0.0004）。结论 mRG风险评分能准确预测HBV相关HCC患者的预后，揭示其肿瘤微环境的差异，为HCC患者的精准治疗提供了指导。

关键词： M2巨噬细胞肝细胞癌预后模型乙型肝炎病毒

雷帕霉素激活M2巨噬细胞自噬影响大肠癌放射敏感性的研究

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中华放射医学与防护杂志 2022年第9期42卷 657-663页

作者：邵乐宁朱宝松杨晓东曹建平邢春根苏州大学附属第二医院胃肠外科苏州215004 苏州市中医医院苏州215007 苏州大学放射医学与防护学院放射医学与辐射防护国家重点实验室苏州215123

目的探讨雷帕霉素(RAP)激活M2巨噬细胞(type-Ⅱmacrophage)自噬对大肠癌移植瘤放射敏感性的影响。方法经佛波酯(PmA)单独及联合人重组白介素4(IL-4)诱导人单核白血病细胞THP-1分化为m0和m2型巨噬细胞。使用RAP激活m2自噬,设置巴弗洛霉素... 详细信息

目的探讨雷帕霉素(RAP)激活M2巨噬细胞(type-Ⅱmacrophage)自噬对大肠癌移植瘤放射敏感性的影响。方法经佛波酯(PmA)单独及联合人重组白介素4(IL-4)诱导人单核白血病细胞THP-1分化为m0和m2型巨噬细胞。使用RAP激活m2自噬,设置巴弗洛霉素(bafilomycin A1)下调m2已被激活的自噬作为对照。将大肠癌LoVo细胞接种于BALB/c-nu/nu裸鼠,待形成直径10 mm瘤体后,利用随机数表法,将18只裸鼠分为m2自噬未激活组、激活组和激活后下调组,LoVo细胞单独成瘤为阴性对照组,每组6只。对荷瘤鼠行2次8 Gy X射线局部照射,分析各组间移植瘤放射敏感性的变化。结果M2巨噬细胞标志物Arg-1、CCL-22的相对表达量显著高于m0巨噬细胞(t=78.77、60.02,Pm2自噬未激活组瘤体质量、体积和微血管密度(mVD)[(1.93±0.05)g、(2.14±0.06)cm^(3)、36.37±1.04]较阴性对照组[(1.35±0.05)g、(1.77±0.02)cm^(3)、25.69±1.34]显著提高(t=20.07、14.56、10.92,Pm2自噬后,瘤体重量、体积和微血管密度均显著下降[(0.89±0.03)g、(1.24±0.01)cm^(3)、13.60±1.52](t=44.37、40.32、21.43,Pm2自噬后,瘤体质量、体积和微血管密度有所回升[(1.02±0.07)g、(1.37±0.02)cm^(3)、21.06±1.41](t=4.67、13.79、6.23,Pm2能够抑制Livin和Survivin在瘤体组织中的表达(t=2.64、7.90,Pm2自噬后,可进一步下调上述蛋白的表达(t=5.43、9.39,Pm2自噬后,Livin、Survivin表达量均有所回升(t=2.80、3.17,Pm2自噬,可抑制m2促进肿瘤微血管形成的能力,从而抑制移植瘤生长;同时,通过下调大肠癌移植瘤中抗凋亡基因Livin与Survivin的表达,诱导大肠癌移植瘤放疗后凋亡的发生,提高大肠癌的放射敏感性。

关键词：雷帕霉素 M2巨噬细胞自噬大肠癌放射敏感性

探讨白术转腰汤对黄韧带纤维化模型大鼠M2巨噬细胞TGF-β1介导炎症反应的影响

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北京中医药大学学报 2024年

作者：温海宝车颖李路广李建国高春雨高景华冯蓬山东中医药大学中国中医科学院望京医院脊柱二科

目的探讨白术转腰汤(《辨证录》转腰汤加鸡血藤、苏木、牛膝)对腰椎黄韧带纤维化的影响及其免疫调控机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、氯磷酸盐组和白术转腰汤组,每组6只。除正常组外,其余各组均采用腰椎失稳... 详细信息

目的探讨白术转腰汤(《辨证录》转腰汤加鸡血藤、苏木、牛膝)对腰椎黄韧带纤维化的影响及其免疫调控机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、氯磷酸盐组和白术转腰汤组,每组6只。除正常组外,其余各组均采用腰椎失稳法,通过持续微损伤建立腰椎黄韧带纤维化大鼠模型。白术转腰汤组给予白术转腰汤灌胃,其余各组给予等量生理盐水灌胃,每天1次,持续30 d。氯磷酸盐组于造模后即刻、9、18和27 d分别原切口皮下注射氯磷酸二钠脂质体(5 g/L,0.5 m L)。30 d后过量麻醉处死大鼠,采用HE染色和masson染色对大鼠黄韧带进行组织学评估,计算胶原容积分数(CVF);采用免疫组化染色法检测黄韧带中转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,采用免疫荧光双标法检测M2巨噬细胞中CD163与TGF-β1表达情况。构建M2巨噬细胞和成纤维细胞的共培养体系,利用RTqPCR分别检测各组细胞TGF-β1、TNF-α和IL-1β的mRNA表达。结果与正常组相比,模型组和白术转腰汤组HE染色、masson染色可见韧带纤维致密、扭曲,免疫细胞浸润,CVF增加,模型组大鼠的黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β显著增加,白术转腰汤组中TGF-β1、TNF-α显著增加(P细胞外基质堆积情况得到改善,黄韧带CVF显著降低,黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β显著降低(P细胞外基质堆积增加,CVF显著升高,韧带组织中TGF-β1、IL-1β升高(P细胞RT-qPCR结果中,与正常组比较,共培养体系显著增加了M2巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β,成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达;与共培养对照组比较,中药预处理M2巨噬细胞的共培养组中,M2巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β和成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达降低(PM2巨噬细胞中TGF-β1和IL-1β的表达,并影响成纤维细胞TNF-α和IL-1β的表达,抑制M2巨噬细胞TGF-β1介导的免疫炎症反应,发挥抑制黄韧带炎症-纤维化正反馈的作用。

关键词：白术转腰汤转化生长因子-β1 免疫炎症反应黄韧带纤维化大鼠 M2巨噬细胞

黄精对白细胞介素-4诱导M2巨噬细胞能量代谢和极化的作用与机制

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中华中医药杂志 2022年第8期37卷 4400-4404页

作者：侯亚琴李明岳利多郝冰洁岳庆喜范理宏安徽医科大学上海临床学院合肥230032 同济大学附属第十人民医院上海200072 同济大学医学院能量代谢与健康研究所上海200072

目的:探讨黄精对M2巨噬细胞能量代谢和极化的影响及其分子机制。方法:用白细胞介素-4(IL-4)构建M2巨噬细胞模型;CCK-8细胞增殖实验检测细胞活力;qPCR和Western blot实验检测M2巨噬细胞标志Arg1、CD206mRNA及蛋白和AmPK/PDH信号通路(p-A... 详细信息

目的:探讨黄精对M2巨噬细胞能量代谢和极化的影响及其分子机制。方法:用白细胞介素-4(IL-4)构建M2巨噬细胞模型;CCK-8细胞增殖实验检测细胞活力;qPCR和Western blot实验检测M2巨噬细胞标志Arg1、CD206mRNA及蛋白和AmPK/PDH信号通路(p-AmPK、p-PDH、PDK)蛋白的表达;细胞能量代谢分析仪(Seahorse)分析M2巨噬细胞能量代谢;ATP检测试剂检测M2巨噬细胞总ATP产量。结果:用IL-4处理RAW264.7巨噬细胞和THP-1细胞成功构建M2巨噬细胞模型。黄精浓度mg/mL时对巨噬细胞无明显细胞毒作用。黄精可抑制M2巨噬细胞标志Arg1和CD206mRNA及蛋白的表达(PM2巨噬细胞ATP产量、耗氧率(P细胞外酸化率(PmPK、p-PDH蛋白的表达(PmPK抑制剂使用后,p-AmPK、p-PDH蛋白表达更低(PM2巨噬细胞线粒体氧化磷酸化,降低M2巨噬细胞ATP产量,抑制M2巨噬细胞极化,其机制与黄精抑制AmPK/PDH信号通路磷酸化相关。

关键词：黄精 M2巨噬细胞能量代谢 AmPK/PDH信号通路肿瘤免疫极化

AC抑制M2巨噬细胞介导的Treg趋化促Poly（I:C）抑瘤机制

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AC抑制M2巨噬细胞介导的Treg趋化促Poly（I:C）抑瘤机制

作者：王文佳兰州大学

学位级别：硕士

目的聚肌胞苷酸(polycytidylic acid,Poly(I:C))是美国国家癌症研究所认可的有治疗潜力的癌症疫苗佐剂。可激活多种固有免疫细胞促进抗原提呈活化CD8T细胞向肿瘤浸润。但Poly(I:C)对进展期肿瘤没有疗效,与其激活巨噬细胞核因子k B(nucle... 详细信息

目的聚肌胞苷酸(polycytidylic acid,Poly(I:C))是美国国家癌症研究所认可的有治疗潜力的癌症疫苗佐剂。可激活多种固有免疫细胞促进抗原提呈活化CD8T细胞向肿瘤浸润。但Poly(I:C)对进展期肿瘤没有疗效,与其激活巨噬细胞核因子k B(nuclear factor-kappa B,NF-κB),诱导主要由M2巨噬细胞分泌的Treg趋化因子CCL22致Treg肿瘤浸润,进而免疫抑制CD8T细胞有关。乌头碱(aconitine,AC)可抑制巨噬细胞NF-κB转录活性,并下调NF-κB下游分子环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)/前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)在单核细胞中的表达及外周血Treg比例。猜测AC可减弱NF-κB信号,抑制Poly(I:C)诱导的CCL22产生及Treg肿瘤浸润,以维持CD8T细胞肿瘤浸润及免疫应答。前期研究显示两者联合治疗Hepa1-6移植瘤小鼠,抑瘤率达33.53～56.69%,本研究拟验证以上猜测并探讨其机制。方法1.CD4、CD8T细胞,Treg肿瘤浸润:构建Hepa1-6细胞移植瘤C57BL/6小鼠模型,每隔1天称重并给药,第22天处死剥取肿瘤计算抑瘤率。制备脾脏、引流淋巴结、肿瘤细胞悬液,流式细胞仪检测CD4、CD8T细胞,Treg(CD4Foxp3)占比,及T细胞活化指标CD69、IFN-γ,免疫检查点分子CTLA4;免疫组化检测肿瘤组织CD8表达。2.CD4、CD8T细胞,Treg迁移:取小鼠骨髓培养原代巨噬细胞m2极化模型,应用Transwell板检测药物干预后M2巨噬细胞上清对小鼠脾脏淋巴细胞的趋化效果,收集迁移细胞,流式细胞仪检测CD4、CD8T细胞,Treg占比。3.趋化因子表达:药物干预M2巨噬细胞或肿瘤外植体后,取细胞或组织提取m RNA,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantification,RT-q PCR)检测Treg趋化因子CCL22 m RNA,CD8T细胞趋化因子CXCL10、CCL5 m RNA表达。取上清酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测CCL22分泌。4.CCL22表达相关信号:药物干预后,Western Blot及免疫荧光检测原代M2巨噬细胞NF-κB p65蛋白活化水平及核移位,并检测TNF-α、COX2、CCL22m RNA动态表达及CCL22分泌。Poly(I:C)联合NF-κB或TNF-α抑制剂干预,检测肿瘤外植体、M2巨噬细胞TNF-α、COX2、CCL22 m RNA及CCL22分泌。结果1.Poly(I:C)及联合药物增加CD8T细胞肿瘤浸润、迁移及CXCL10、CCL5m RNA表达。(1)Poly(I:C)及联合药物促进CD8T细胞肿瘤浸润、迁移:相比未治疗组,流式结果显示AC、Poly(I:C)、联合组肿瘤组织中CD4T细胞比例无差异(P>0.05),CD8T细胞比例均升高(P细胞迁移实验显示,AC组CD4T细胞迁移比未治疗组降低(P0.05);AC组CD8T细胞迁移无差异(P>0.05),Poly(I:C)和联合组CD8T细胞迁移增多(PM2巨噬细胞CXCL10、CCL5 m RNA表达:相比未干预组,AC组CXCL10、CCL5 m RNA表达无差异(P>0.05),Poly(I:C)与联合组均上调(P细胞可能依赖于M2巨噬细胞产生的CXCL10、CCL5。2.Poly(I:C)增加Treg迁移及CCL22 m RNA表达、分泌,AC可降低该效应。(1)AC抑制Poly(I:C)诱导的脾脏Treg占比及M2巨噬细胞介导的迁移:相比未治疗组,Poly(I:C)治疗小鼠脾脏Treg比例升高(P0.05),且均低于Poly(I:C)组(P0.05),Poly(I:C)、联合组均增多(PM2巨噬细胞及肿瘤外植体CCL22 m RNA表达、分泌:M2巨噬细胞研究发现,相对未干预组,Poly(I:C)上调3、6、12 h CCL22 m RNA(P<0.01,P<0.001,P<0

关键词： Poly(I:C) AC NF-κB M2巨噬细胞 Treg CD8+T细胞

Exendin-4与Eldecalcitol协同促进M2巨噬细胞极化改善糖尿病性骨质疏松的机制研究

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Exendin-4与Eldecalcitol协同促进M2巨噬细胞极化改善糖尿病性骨...

作者：陆钰璞山东大学

学位级别：硕士

背景和目的随着人口老龄化社会的到来,糖尿病已经成为了全球性的公共健康问题而亟待解决。该疾病可诱发以骨量减少、骨微结构受损、骨脆性增加为特征的代谢性骨病,即糖尿病性骨质疏松症。由于该类型骨质疏松的发生与糖代谢紊乱密切相关... 详细信息

背景和目的随着人口老龄化社会的到来,糖尿病已经成为了全球性的公共健康问题而亟待解决。该疾病可诱发以骨量减少、骨微结构受损、骨脆性增加为特征的代谢性骨病,即糖尿病性骨质疏松症。由于该类型骨质疏松的发生与糖代谢紊乱密切相关,故如何降糖并改善骨微结构成为治疗该疾病的关键。作为长效降糖药物,艾塞那肽(Exendin-4,Ex-4)在降低血糖的同时可有效改善血脂代谢,目前已成为糖尿病临床治疗药物的重要选择;艾地骨化醇(Eldecalcitol,ED-71),作为近期将在我国临床上市应用的抗骨质疏松药物,可有效增加骨密度、维持骨代谢平衡,是改善和治疗骨质疏松的前景药物。然而,上述两种药物的联合应用对糖尿病性骨质疏松的治疗效果有待确定,其相关作用机制有待进一步探究。本课题旨在探讨Ex-4和ED-71的联合应用对糖尿病性骨质疏松症的治疗效果及相关作用机制,预期成果将为糖尿病性骨质疏松的临床治疗提供新的思路。材料和方法1.采用C57BLKS/J Iar-+Lepr/+Lepr(db/db)小鼠建立糖尿病性骨质疏松动物模型,并随机分为CON、Ex-4、ED-71、Ex-4+ED-71组,其中Ex-4的给药标准为10 μg/kg,皮下注射,每天一次;ED-71的投药剂量为0.25 μg/kg,灌胃处理,每周三次。在治疗过程中,每4天检测一次空腹血糖水平。为期4周治疗后,通过micro CT、HE染色观察骨组织形态学变化;利用免疫组化检测骨形成标志物的表达情况。综合评价糖尿病所致的骨组织病理学改变、评价联合用药对糖尿病性骨质疏松的治疗效果。2.采用免疫组化、RT-qPCR及ELISA检测db/db小鼠体内M2巨噬细胞极化情况。使用Ex-4或/和ED-71处理RAW264.7,通过细胞免疫荧光、流式细胞术及RT-qPCR评估RAW264.7的极化类型。随后,提取小鼠骨组织的BmSCs,构建RAW264.7及BmSCs的共培养体系。通过结晶紫染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色评估BmSCs的迁移及成骨分化能力。综合评价联合用药后巨噬细胞的极化类型,以及巨噬细胞与骨髓间充质干细胞之间的通讯在联合用药改善糖尿病性骨质疏松过程中所发挥的作用。3.通过相关文献综合分析,PI3K/AKT信号通路可能在Ex-4与ED-71联合应用促进巨噬细胞极化过程中发挥重要作用,并通过相关体外实验进行验证。体外培养RAW264.7,给予Ex-4或/和ED-71刺激,通过Western Blot检测该信号通路的蛋白表达情况。随后,在Ex-4或/和ED-71作用的前提下,给予PI3K抑制剂(LY294002)及AKT抑制剂(ARQ092)处理,通过Western Blot、RT-qPCR及ELISA检测该信号通路的转导情况。此外,在构建的RAW264.7与BmSCs共培养体系中给予LY294002及ARQ092,通过结晶紫染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色评估BmSCs的迁移及成骨分化能力。结果1.联合应用Ex-4及ED-71可显著增加db/db小鼠的骨量,其骨体积分数、骨小梁数量及骨小梁厚度显著增加、骨小梁分离度显著减少,成骨效果明显强于单一用药。Ex-4或ED-71可增加碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原蛋白(Col I)的免疫反应性,联合用药可更为显著地增加上述骨形成标志物的免疫反应性。此外,血糖异常升高的db/db小鼠经ED-71治疗后,血糖水平降低,且联合用药组的血糖降低程度明显优于单一用药组。2.联合用药处理的db/db小鼠骨组织中M2巨噬细胞标志物CD206及TGF-β1的免疫反应性显著增加,且M2巨噬细胞标志物CD163及CD206 mRNA的表达水平显著增加,而m1巨噬细胞标志物IL-1β及iNOS mRNA的表达水平显著降低。此外,联合用药处理的db/db小鼠血清中TGF-β1分泌增多,而IL-1β分泌减少。与单一用药相比,联合应用Ex-4与ED-71可显著增加RAW264.7的CD163及CD206免疫荧光强度,大幅度提高F4/80+CD206+细胞的比例。在共培养体系中,联合用药组的结晶紫染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色的阳性表达区域显著增加。3.与单一用药相比,联合用药可显著增加RAW264.7的磷酸化PI3K和AKT水平,给予LY294002及ARQ092刺激后,PI3K和AKT的磷酸化水平受到显著抑制。此外,联合应用Ex-4和ED-71可显著增加TGF-β1的表达和分泌,在加入LY294002或ARQ092后,TGF-β1的表达和分泌受到显著抑制。在施加LY294002与ARQ092的共培养体系中,联合用药组的结晶紫染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色的阳性表达区域显著减少。结论1.Ex-4与ED-71协同促进糖尿病性骨质疏松小鼠的新骨形成并降低其血糖水平。2.Ex-4与ED-71联合应用促进M2巨噬细胞极化并诱导BmSCs成骨分化。3.Ex-4与ED-71通

关键词： Exendin-4(Ex-4) Eldecalcitol(ED-71) 骨髓间充质干细胞(BmSCs) M2巨噬细胞 PI3K/AKT信号通路

非酒精性脂肪性肝病显著肝纤维化患者IL-25表达降低并伴随m2型巨噬细胞数量减少

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第3期37卷 246-252页

作者：吴剑平肖海英郑雪莲张振东章燕朱萱汪安江南昌大学第一附属医院消化内科江西南昌330006 南昌市第三医院消化科江西南昌330009 南昌大学第一附属医院药学部江西南昌330006 南昌大学第一附属医院病理科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院内分泌科江西南昌330006

目的观察和比较非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者白细胞介素25(IL-25)水平和肝纤维化程度及肝内m2型巨噬细胞极化情况的关系。方法募集NAFLD患者36例和对照组患者20例,根据Fibrotouch测定的肝硬度值结合HE染色和病理特殊染色对肝脏纤维化... 详细信息

目的观察和比较非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者白细胞介素25(IL-25)水平和肝纤维化程度及肝内m2型巨噬细胞极化情况的关系。方法募集NAFLD患者36例和对照组患者20例,根据Fibrotouch测定的肝硬度值结合HE染色和病理特殊染色对肝脏纤维化情况进行评估,将NAFLD患者分为轻度肝纤维化组20例和显著肝纤维化组16例。ELISA测定各组患者血清IL-25水平;采集对照组、轻度肝纤维化组和显著肝纤维化组各6例的肝组织,实时荧光定量PCR检测肝组织IL-25、1型胶原蛋白(Col1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SmA)、巨噬细胞甘露糖受体1(CD206/mR1)和谷氨酰胺转氨酶2(TGm2)的mRNA表达。免疫组织化学染色法检测肝组织IL-25、α-SmA、CD206、TGm2的表达。结果各组血清IL-25水平变化不明显。与对照组和轻度肝纤维化组相比,显著肝纤维化组患者肝组织IL-25、CD206、TGm2的mRNA和IL-25蛋白表达明显降低,M2巨噬细胞数量明显减少。结论随着NAFLD患者肝纤维化的进展,肝组织中IL-25水平下降并伴随m2型巨噬细胞数量的减少。

关键词：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD) 肝纤维化白细胞介素25(IL-25) M2巨噬细胞