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k562/adm耐药细胞株的建立及其生物学特性的初步观察

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癌症 1992年第3期11卷 222-224页

作者：沈世人苏颖黄秀清谢左孚高频福建省肿瘤医院研究室福州350014

我们建立的k562/adm耐药细胞株,在adm浓度为2.4μg/m1(4.46μM)中已稳定培养3.5个月,传了30—35代,k562/adm亦具有多药耐受件(Multidrug Resistance,MDR)的特点,对adm、VCR、AT—1258和DDP的耐受性分别为k562的114.7、94.0、13.3和7.4倍,但对5—FU不产生交叉耐药。k562和k562/adm的倍增时间分别为19.2h和52.8h,集落生成率分别为37.5％和11.1％,k562染色体数为34—68,中位数为56;k562/MDM染色体数为32—90,中位数为50,k562/adm可做为耐药机理和克服耐药措施研究的极好模型。

关键词： k562 k562/adm 耐药细胞株生物学

四物合剂对人红白血病细胞株k562/adm多药耐药性的逆转作用研究

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中国中药杂志 2004年第8期29卷 792-795页

作者：夏蕾沈朋浙江大学药学院中药科学与工程学系浙江杭州310027 浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株k5 6 2 /adm多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株k5 6 2 /adm的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的adm浓度 ;免疫... 详细信息

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株k5 6 2 /adm多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株k5 6 2 /adm的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的adm浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和adm合用时 ,对k5 6 2 /adm耐药性的逆转倍数及细胞内的adm含量比adm单独使用时明显增高 (P k5 6 2 /adm细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株k5 6 2 /adm对adm的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

关键词：四物合剂 k562/adm 逆转作用人红白血病细胞株k562 细胞内多药耐药性表达浓度细胞膜剂量

k562/adm细胞耐药性与有氧糖酵解的关系及双氢青蒿素诱导其铁死亡的研究

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K562/ADM细胞耐药性与有氧糖酵解的关系及双氢青蒿素诱导其铁死亡...

作者：艾子莺兰州大学

学位级别：硕士

有氧糖酵解与k562/adm细胞耐药性的关系研究背景与目的:多药耐药性(Multi-drug resistance,MDR)的产生是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一。有氧糖酵解增强已被列为肿瘤细胞重要的生物学标志。近年研究认为增强的有氧糖酵解与肿瘤恶性程... 详细信息

有氧糖酵解与k562/adm细胞耐药性的关系研究背景与目的:多药耐药性(Multi-drug resistance,MDR)的产生是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一。有氧糖酵解增强已被列为肿瘤细胞重要的生物学标志。近年研究认为增强的有氧糖酵解与肿瘤恶性程度及临床耐药密切相关,但其发生机制及调控方式并不清楚。本课题以白血病敏感细胞k562和由k562诱导而来的MDR细胞k562/adm为研究模型,比较研究药物敏感细胞与耐药细胞糖代谢模式的差异,明确耐药细胞不同于亲本敏感细胞的糖代谢特征,探讨k562/adm细胞多药耐药性与有氧糖酵解的关系,深入分析抑制有氧糖酵解逆转k562/adm细胞耐药性的可行性及分子机制,以期为临床克服肿瘤细胞耐药提供新的策略。方法:采用MTT法检测细胞的增殖活性;酶学方法检测细胞葡萄糖消耗、乳酸产量、糖代谢相关酶活性及谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;生物发光法检测三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP),荧光探针标记法检测细胞内线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;Western-blotting法检测糖代谢相关信号通路中蛋白的表达及活化程度。结果:1.常氧条件下,k562/adm细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量均明显高于亲本k562细胞(Pk562细胞,k562/adm细胞己糖激酶(hexokinase,Hk)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙酮酸激酶(pyruvate,Pk)的酶活性显著增高(Pkinase,PFk)活性降低(Pk562/adm细胞葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)和LDH-A表达量高于k562细胞(Pk562/adm细胞MMP低于k562细胞,GSH水平升高(Pk562/adm细胞和k562细胞对阿霉素(adriamycin,adm)的敏感性,k562细胞增殖抑制率提高了15%,而k562/adm细胞则提高达30%。2-DG能够降低细胞ATP含量,当2-DG浓度达到4m M时,k562/adm细胞ATP下降倍数高于k562细胞近1倍。adm可使白血病细胞内葡萄糖消耗、乳酸输出及己糖激酶活性均受到抑制,联合应用2-DG抑制糖酵解后,k562细胞葡萄糖消耗量的抑制率增加30%,乳酸生成的抑制率增加10%,而k562/adm细胞则分别达到40%、30%;抑制糖代谢对k562细胞Hk活性几乎没有影响,而k562/adm细胞Hk活性则下降了10个单位。此外,2-DG还诱导k562/adm细胞内ROS含量上升和GSH浓度的降低。3.k562/adm细胞与k562细胞比较,AkT-m TOR-c Myc和Mek-MAPk信号通路处于高活化状态。糖代谢抑制剂2-DG能够显著抑制k562/adm细胞AkT-m TOR-c Myc和Mek-MAPk信号通路,2-DG与adm联合处理,k562/adm细胞AkT表达量明显下降,而k562细胞没有明显变化;k562/adm细胞m TOR表达及磷酸化水平降低70%以上,而k562细胞下降则不足30%;k562/adm细胞c-Myc表达下降14%,k562细胞没有变化;k562/adm细胞Mek、MAPk表达量及磷酸化水平下降均超过40%,k562细胞几乎不受影响。2-DG抑制k562/adm细胞糖代谢相关AkT-m TOR-c Myc通路,其下游糖代谢相关蛋白GLUT4、LDH-A、GSk-3β的表达均受到抑制(Pk562/adm耐药细胞有氧糖酵解能力显著强于k562敏感细胞,存在Hk、Pk、LDH活性增高,GLUT4、LDH-A高表达及线粒体供能减弱的代谢重编程现象。2.k562/adm细胞的耐药性与增强的有氧糖酵解能力密切相关,抑制有氧糖酵解可有效逆转k562/adm细胞对阿霉素的耐受性。3.2-脱氧葡萄糖逆转k562/adm细胞耐药性的机制除直接竞争性抑制Hk活性、降低糖酵解而减少ATP供应外,还与降低AkT-m TOR-c-Myc通路和Mek-MAPk通路活性、下调代谢效应蛋白GLUT4、LDH-A和GSk-3β表达量,进而降低耐药细胞能

关键词：有氧糖酵解多药耐药糖酵解抑制剂 AkT/m TOR Mek/MAPk k562 k562/adm 铁死亡双氢青蒿素多药耐药性枸橼酸铁铵 Ferrostatin-1

补骨脂素逆转k562/adm多药耐药细胞系耐药性研究

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中国肿瘤临床 2004年第3期31卷 146-148页

作者：蔡宇蔡天革唐凤德张荣华何岚徐立群江西中医学院辽宁大学环境与生命科学学院生命科学系暨南大学药学院中药教研室广州市510632 中山大学药学院

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(k562/adm)多药耐药(multidrugresistance,MDR)性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数。结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对k562和k562/adm无明显... 详细信息

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(k562/adm)多药耐药(multidrugresistance,MDR)性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数。结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对k562和k562/adm无明显细胞毒作用,但与adm联合用药可使adm对k562/adm的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低adm对k562/adm细胞的IC50值。结论:补骨脂素能逆转k562/adm细胞的多药耐药。

关键词：补骨脂素多药耐药 k562/adm 逆转

孤啡肽联合阿霉素逆转k562/adm细胞多药耐药的分子机制研究

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孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制研究

作者：王晓霞兰州大学

学位级别：硕士

目的：探索孤啡肽(OFQ)联合阿霉素(adm)逆转k562/adm细胞多药耐药的分子机制及与MDR1mRNA和P-糖蛋白(P-gp)表达的相关性。方法：MTT检测OFQ、adm细胞毒性及两者联合后对k562/adm细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定... 详细信息

目的：探索孤啡肽(OFQ)联合阿霉素(adm)逆转k562/adm细胞多药耐药的分子机制及与MDR1mRNA和P-糖蛋白(P-gp)表达的相关性。方法：MTT检测OFQ、adm细胞毒性及两者联合后对k562/adm细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测MDR1mRNA表达水平;蛋白印迹检测P-gp的相对表达量。结果：1、k562/adm细胞经不同浓度adm(5-40μg/mL)及OFQ(10-5-10-9mol/l)单独作用后,出现不同程度抑制,依据浓度-抑制率曲线,本实验选用非细胞毒性剂量的OFQ(10-7mol/l)及72小时IC50为21μg/ml adm(15μg/ml)作为最佳作用浓度。2、OFQ联合adm后对耐药细胞生长抑制作用较adm单独作用更为显著,与adm组比较,48小时具有统计学意义(Padm单独用药时12、24、48、72小时耐药细胞的增殖抑制率(IR)分别为17.2%、19.5%、22.4%、32.3%,OFQ联合adm后IR分别为18.7%、22.4%、34.1%、35.8%,耐药逆转倍数(RI)分别为1.09、1.15、1.52、1.11倍,48小时内随作用时间延长而增强(r=0.97),48小时耐药逆转作用达到最强;3、FCM结果显示OFQ联合adm后,k562/adm细胞凋亡百分率显著提高(Padm单独用药组比较,adm联合OFQ后k562/adm细胞的MDR1mRNA相对表达量明显下降(Padm组k562/adm细胞的MDR1mRNA表达水平随作用时间的延长而降低(r=0.91),48小时达到最低;5、Western blot结果显示：OFQ联合adm后P-gp蛋白的相对表达量降低,与adm组比较具有统计学意义(Padm逆转k562/adm细胞耐药性的逆转倍数(RI)分别为：1.261、1.517、3.382、2.103,48小时内随作用时间延长而增加(r=0.98)。结论：1、OFQ联合adm可时间依赖性逆转k562/adm细胞多药耐药性,48小时为最佳逆转时间。2、OFQ联合adm逆转k562/adm细胞多药耐药机制与下调MDR1mRNA和P-gp表达相关。

关键词： OFQ k562/adm 多药耐药 MDR1 P-gp

沉默Atg5对k562/adm细胞阿霉素的化疗增敏作用

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沉默Atg5对K562/ADM细胞阿霉素的化疗增敏作用

作者：单园南华大学

学位级别：硕士

目的:研究下调自噬相关基因Atg5的表达对人白血病阿霉素耐药细胞株k562/adm化疗敏感性的影响。方法:1.体外培养k562/adm细胞、NC-k562/adm细胞、Atg5siRNA-k562/adm细胞。2.利用小分子干扰RNA(siRNA)技术针对自噬相关基因Atg5设计合成... 详细信息

目的:研究下调自噬相关基因Atg5的表达对人白血病阿霉素耐药细胞株k562/adm化疗敏感性的影响。方法:1.体外培养k562/adm细胞、NC-k562/adm细胞、Atg5siRNA-k562/adm细胞。2.利用小分子干扰RNA(siRNA)技术针对自噬相关基因Atg5设计合成特异性Atg5siRNA及与基因无同源性的阴性对照组scramble siRNA,然后在Lipofectamine2000介导下分别转染至k562/adm细胞,继续培养48小时后,通过蛋白印迹(Western Blotting)技术检测各细胞组(k562/adm细胞、NC-k562/adm细胞、Atg5siRNA-k562/adm细胞)中Atg5蛋白的表达水平,验证Atg5siRNA沉默Atg5基因表达的效果。3.在Atg5siRNA下调Atg5蛋白表达的基础上,同样条件下予不同浓度组阿霉素处理各组细胞,48小时后再运用细胞增殖-毒性检测(CCk-8)方法分别检测k562/adm细胞组、NC-k562/adm细胞组、Atg5siRNA-k562/adm细胞组中细胞的增殖情况。4.下调Atg5蛋白表达后,采用Western Blotting技术分别检测k562/adm细胞组、NC-k562/adm细胞组、Atg5siRNA-k562/adm细胞组中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达水平,并比较各组细胞之间自噬水平的变化。结果:1.与k562/adm细胞组及NC-k562/adm细胞组相比较、Atg5siRNA-k562/adm细胞组中Atg5蛋白表达的差异具有显著性(Pk562/adm细胞组中Atg5蛋白的表达水平明显下降,验证了Atg5siRNA能有效地沉默k562/adm细胞中Atg5的基因表达。2.在Atg5siRNA下调Atg5蛋白表达的基础上,同样条件下不同浓度组阿霉素处理各组细胞后,与k562/adm细胞组、NC-k562/adm细胞组相比较,Atg5siRNA-k562/adm细胞组的细胞存活率明显下降,即细胞对阿霉素的药物敏感性显著提高。3.下调Atg5蛋白表达后,Western Blotting检测到:较k562/adm细胞组、NC-k562/adm细胞组相比,Atg5siRNA-k562/adm细胞组中LC3-Ⅱ的蛋白表达水平明显降低,即细胞自噬明显受到抑制。结论:Atg5siRNA可有效下调k562/adm细胞中Atg5蛋白的表达,并通过抑制自噬来增强k562/adm细胞对阿霉素的化疗敏感性。

关键词：自噬相关基因5 k562/adm 小干扰RNA 自噬耐药

功劳木提取物DMAG逆转人白血病k562/adm细胞多药耐药的研究

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功劳木提取物DMAG逆转人白血病K562/ADM细胞多药耐药的研究

作者：王世广河南大学

学位级别：硕士

目的:从中药功劳木提取物中筛选出具有逆转肿瘤多药耐药活性的单体成分,研究其逆转肿瘤多药耐药作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药作用机制。方法:通过高内涵活细胞成像系统检测功劳木提取物对人白血病k562/adm细胞内罗丹明123(rhodamine12... 详细信息

目的:从中药功劳木提取物中筛选出具有逆转肿瘤多药耐药活性的单体成分,研究其逆转肿瘤多药耐药作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药作用机制。方法:通过高内涵活细胞成像系统检测功劳木提取物对人白血病k562/adm细胞内罗丹明123(rhodamine123,Rh123)蓄积的影响,筛选具有抑制k562/adm细胞膜上P-gp功能的活性成分;MTT法检测功劳木活性成分对k562及k562/adm细胞的无毒剂量以及对阿霉素(adriamycin,adm)的耐药逆转作用;高内涵系统检测功劳木活性成分对adm在k562/adm细胞内蓄积的影响;Rh123蓄积实验进一步检测活性成分对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)功能的影响;PI/Hoechst33342双染法检测功劳木活性成分对adm诱导肿瘤细胞凋亡的影响;半定量RT-PCR法检测功劳木活性成分对k562/adm细胞MDR1耐药基因表达的影响。结果:1.从功劳木提取物中筛选出6种具有抑制k562/adm细胞膜上P-gp功能的活性成分,其中活性最强的为DMAG,本论文即研究该化合物对k562/adm细胞的MDR的逆转作用。2. MTT检测结果显示,0.1μmol/L为DMAG的无毒剂量,其对k562细胞和k562/adm细胞的抑制率均adm联用,可浓度依赖性地逆转k562/adm细胞的耐药性(逆转倍数分别为3.17、3.99、5.01、6.14、6.45),其逆转作用明显强于阳性对照维拉帕米(Verapamil)。3. adm蓄积实验检测结果显示耐药细胞内荧光信号明显减少,而经DMAG处理后逐渐恢复到接近敏感株细胞的水平,表明DMAG能直接抑制P-gp的功能,恢复adm在细胞内的正常分布而达到逆转耐药的目的。4. Rh123蓄积实验检测结果显示无毒剂量的DMAG可剂量相关性增加耐药细胞株k562/adm细胞内Rh123的蓄积,对k562细胞内Rh123的蓄积没有影响。5.无毒剂量的DMAG单独使用时对k562和k562/adm细胞凋亡没有影响,与adm联用后均可增强adm诱导的k562/adm细胞凋亡,作用明显强于单用adm引起的细胞凋亡,与adm联用后对k562细胞的凋亡同只用adm引起的细胞凋亡相当。6.半定量RT-PCR法检测结果显示DMAG作用前后k562/adm细胞内MDR1基因表达水平有下调趋势,且随浓度增加下调趋势逐渐明显。结论:1.功劳木提取物DMAG具有较强的逆转人白血病k562/adm细胞多药耐药活性。2. DMAG通过下调MDR1基因及其蛋白产物P-gp的表达水平、抑制k562/adm细胞膜上P-gp的外排功能,恢复P-gp介导的肿瘤多药耐药细胞株对药物的敏感性,增加细胞内adm浓度,提高adm对耐药细胞的诱导凋亡作用,逆转肿瘤细胞的多药耐药。

关键词：功劳木 DMAG 多药耐药 k562/adm

槲皮素纳米制剂研究及Qu对k562/adm细胞代谢影响的NMR数据分析

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槲皮素纳米制剂研究及Qu对K562/ADM细胞代谢影响的NMR数据分析

作者：邵长丽暨南大学

学位级别：硕士

在恶性肿瘤化疗过程中多药耐药现象是导致化疗失败的主要原因之一。槲皮素是一种天然的黄酮类化合物,具有多种药理活性,但其水溶性极低,极大地限制了其体内吸收和生物利用度。本课题旨在制备槲皮素固体脂质纳米粒,并采集NMR数据分析不... 详细信息

在恶性肿瘤化疗过程中多药耐药现象是导致化疗失败的主要原因之一。槲皮素是一种天然的黄酮类化合物,具有多种药理活性,但其水溶性极低,极大地限制了其体内吸收和生物利用度。本课题旨在制备槲皮素固体脂质纳米粒,并采集NMR数据分析不同浓度Qu对k562/adm细胞代谢的影响差异。以超滤法联合HPLC测定Qu-SLN的包封率与载药量,采用乳化蒸发-低温固化法制备Qu-SLN,正交实验筛选确定最佳优化处方。以最佳处方制备Qu-SLN,其包封率为(89.3±1.21)%,载药量为(8.9±0.12)%,其粒子形态良好、大小均匀,平均粒径为(124.2±0.371)nm,平均Zeta电位为(-22.3±0.315)mv,PH值为(6.39±0.04),低温保存有利其稳定性。筛选确定Qu-SLN冻干粉剂的制备工艺,冻干粉剂外观饱满,色泽细腻光洁,具备良好的再分散性。与Qu-SLN胶体溶液相比,粒径增大一倍,Zeta电位略降低,PH值、包封率和载药量无明显变化。给予k562/adm细胞槲皮素药物刺激,细胞形态显示槲皮素可抑制k562/adm细胞生长与增殖。NMR数据分析显示,不同剂量的Qu对k562/adm细胞代谢影响无明显差异。

关键词：槲皮素固体脂质纳米粒代谢组学多药耐药 k562/adm

上调PTEN基因表达对k562/adm白血病细胞化疗增敏的实验研究

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上调PTEN基因表达对K562/ADM白血病细胞化疗增敏的实验研究

作者：张弘中南大学

学位级别：硕士

目的探讨上调人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10, PTEN）表达对白血病耐药细胞化疗增敏的机制。方法将PTEN真核表达质粒导入k562/adm（阿霉素）细胞中,采用West... 详细信息

目的探讨上调人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10, PTEN）表达对白血病耐药细胞化疗增敏的机制。方法将PTEN真核表达质粒导入k562/adm（阿霉素）细胞中,采用Western blot和RT-PCR方法检测PTEN基因在转染前后的表达;MTT法检测adm对转染前后k562/adm细胞存活率的影响;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;采用重组人胱天蛋白酶-3（caspase-3）活性定量试剂盒分析caspase-3的活性;Western blot检测自噬微管相关蛋白轻链3（LC3）-I/II、自噬相关蛋白Beclin1、磷酸化蛋白激酶B （p-Akt）和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶（p-p70S6k）的表达;单丹磺酰戊二胺（MDC）染色和透视电镜观察自噬泡的情况。结果①与未经处理和转染空载体的k562/adm细胞相比,转染PTEN基因的k562/adm细胞组PTEN mRNA和蛋白水平均增高。②转染PTEN基因使k562/adm细胞对adm的药物敏感性增强。与转染空载体组比较,其细胞存活率从（94.07±2.61）%降低到（53.83±4.23）%,细胞凋亡率从（11.89±1.69）%增加到（43.69±2.30）%,P值均＜0.05;而转染空载体组与未转染组的细胞存活率[（95.26±3.42）%vs（94.07±2.61）%]、细胞凋亡率[（7.64±3.62）%vs（11.89±1.69）%]差异无统计学意义（P＞0.05）。经caspase-3抑制剂（Z-DEVE-FMk）预处理后,转染组细胞存活率[（74.15±3.13）%]较未转染组[（97.46±1.31）%]及空载体组[（95.08±3.51）%]亦明显降低（P＜0.05）,但高于未加Z-DEVD-FMk干预的细胞存活率[（53.83±4.23）%]（P＜0.05）。③adm处理细胞12h和24h后,转染PTEN基因的k562/adm细胞casepase-3活性[（2.27±0.13）和（3.15±0.08）]均明显高于转染空载体组[（1.19±0.14）和（1.48±0.06）],P值均＜0.05。④与转染空载体组比较,转染PTEN基因的k562/adm细胞LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达水平分别增加了83%和18%,同时p-Akt和p-p70S6k的蛋白表达水平分别降低了96%和87%;⑤增加PTEN的表达,细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多。结论上调PTEN基因表达能明显增加k562/adm细胞对adm的敏感性,该作用可能与上调PTEN基因表达抑制了PI3k/Akt/mTOR通路活性,从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关。

关键词： PTEN k562/adm 自噬凋亡耐药基因转染