孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制研究

作     者：王晓霞 

作者单位：兰州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵丽

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：OFQ K562/ADM 多药耐药 MDR1 P-gp 

摘      要：目的：探索孤啡肽(OFQ)联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及与MDR1mRNA和P-糖蛋白(P-gp)表达的相关性。 方法：MTT检测OFQ、ADM细胞毒性及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测MDR1mRNA表达水平;蛋白印迹检测P-gp的相对表达量。 结果： 1、K562/ADM细胞经不同浓度ADM(5-40μg/mL)及OFQ(10-5-10-9mol/l)单独作用后,出现不同程度抑制,依据浓度-抑制率曲线,本实验选用非细胞毒性剂量的OFQ(10-7mol/l)及72小时IC50为21μg/ml ADM(15μg/ml)作为最佳作用浓度。 2、OFQ联合ADM后对耐药细胞生长抑制作用较ADM单独作用更为显著,与ADM组比较,48小时具有统计学意义(P0.05)。ADM单独用药时12、24、48、72小时耐药细胞的增殖抑制率(IR)分别为17.2%、19.5%、22.4%、32.3%,OFQ联合ADM后IR分别为18.7%、22.4%、34.1%、35.8%,耐药逆转倍数(RI)分别为1.09、1.15、1.52、1.11倍,48小时内随作用时间延长而增强(r=0.97),48小时耐药逆转作用达到最强;3、FCM结果显示OFQ联合ADM后,K562/ADM细胞凋亡百分率显著提高(P0.01)。12、24、48、72小时细胞R1分别为：18.91、10.84、6.76和1.61;4、RT-qPCR结果显示,与ADM单独用药组比较,ADM联合OFQ后K562/ADM细胞的MDR1mRNA相对表达量明显下降(P0.01)。48小时内OFQ+ADM组K562/ADM细胞的MDR1mRNA表达水平随作用时间的延长而降低(r=0.91),48小时达到最低;5、Western blot结果显示：OFQ联合ADM后P-gp蛋白的相对表达量降低,与ADM组比较具有统计学意义(P0.01)。OFQ联合ADM逆转K562/ADM细胞耐药性的逆转倍数(RI)分别为：1.261、1.517、3.382、2.103,48小时内随作用时间延长而增加(r=0.98)。 结论： 1、OFQ联合ADM可时间依赖性逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48小时为最佳逆转时间。 2、OFQ联合ADM逆转K562/ADM细胞多药耐药机制与下调MDR1mRNA和P-gp表达相关。