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jc病毒样颗粒可直接转运进入细胞核

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第2期25卷 128-132页

作者：屈秋民郭峰乔晋泽洋文长岛和郎西安交通大学医学院第一附属医院神经内科 710061 日本北海道大学医学部分子细胞病理讲座

目的　探讨jc病毒 (jcV)病毒样颗粒 (VLP)是否可以直接转运进入细胞核。方法　应用jcV主要外壳蛋白VP1体外表达、重组VLP ,在其表面标记异硫氰基荧光素 (FITC) ,同时在其内部包裹荧光染料Cy3,感染培养的HeLa细胞和SVG细胞 ,荧光显微镜观... 详细信息

目的　探讨jc病毒 (jcV)病毒样颗粒 (VLP)是否可以直接转运进入细胞核。方法　应用jcV主要外壳蛋白VP1体外表达、重组VLP ,在其表面标记异硫氰基荧光素 (FITC) ,同时在其内部包裹荧光染料Cy3,感染培养的HeLa细胞和SVG细胞 ,荧光显微镜观察VLP入核转运。结果　HeLa和SVG细胞感染包裹Cy3的FITC VLP时 ,FITC与Cy3同时出现于细胞核内相同部位 ;而感染FITC VP1与Cy3混合物时 ,FITC虽可在细胞核内检测到 ,但Cy3信号几乎消失。包裹Cy3的VLP用SDS PAGE展开 ,荧光显像后行考马斯亮蓝 (CBB)染色 ,发现Cy3和VLP移行至不同部位 ,证明Cy3不能与VP1结合 ,提示VLP以完整的颗粒形式转运进入细胞核。应用包裹外源性DNA的VLP感染培养的HeLa和SVG细胞 ,发现包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到 ,提示jcV入核过程与VLP相同。结论　VLP可以不经裂解直接转运进入细胞核 ,jcV入核转运可能与VLP相同。

关键词：病毒样颗粒 HeLa细胞细胞核内 VLP 考马斯亮蓝 VP1 jcV VIP jc病毒体外表达外壳蛋白表面标记荧光染料微镜观察细胞感染不同部位 G细胞核转运 DNA 包裹荧光素 SVG 混合物外源性细胞浆培养检测

jc病毒VLP-Z具有定向基因传递载体特性

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生物医学工程学杂志 2013年第3期30卷 572-576页

作者：曾军燕屈秋民西安交通大学医学院第一附属医院神经内科西安710061

为了确定jc病毒(jcV)主要外壳蛋白VP1体外重组的病毒样颗粒(VLP-Z)是否具有定向基因传递载体的特性,我们利用二硫苏糖醇(DTT)和EGTA裂解、继之含钙离子溶液透析的方法,使VLP-Z包裹外源性DNA(PUC19)。通过PCR检测到VLP-Z包裹的外源性DNA... 详细信息

为了确定jc病毒(jcV)主要外壳蛋白VP1体外重组的病毒样颗粒(VLP-Z)是否具有定向基因传递载体的特性,我们利用二硫苏糖醇(DTT)和EGTA裂解、继之含钙离子溶液透析的方法,使VLP-Z包裹外源性DNA(PUC19)。通过PCR检测到VLP-Z包裹的外源性DNA不能被DNaseⅠ酶消化,证明外源性DNA包裹在VLP-Z内部。包裹外源性DNA(PUC19)的VLP-Z感染培养的HeLa细胞,分别提取细胞总DNA及核DNA,进行PCR检测,结果在细胞浆及细胞核中均可检测到外源性DNA,证明VLP-Z可以转运外源性DNA进入细胞核。包裹pEG-FP-N1质粒的VLP-Z转染HeLa细胞后,可在细胞内表达绿色荧光蛋白GFP。VLP-Z结合IgG后进行凝胶电泳及库马氏亮蓝染色,结果显示VP1-Z和IgG两个条带,体外结合实验中,VLP-Z可与IgG抗体结合。以上结果证明,VLP-Z具有基因传递载体的特性和IgG结合功能,可以作为定向基因传递载体。

关键词：定向基因传递 jc病毒病毒样颗粒蛋白质A

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jc病毒在肾移植受者中的感染状况

中华微生物学和免疫学杂志 2010年第7期30卷 670-673页

作者：胡建华赵宏张旋高海女杨美芳马亚丹李敏环黄雅萍范骏马伟杭浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003

目的探究多瘤jc病毒（jc virus,jcV）在肾移植受者中的感染情况及其感染对移植肾功能的影响,并初步探索jcV感染的影响因素.方法采用巢式PCR方法检测49例肾移植病人术后尿液标本中的jcV DNA,并以24例健康体检者为对照;定性PCR方法检测... 详细信息

目的探究多瘤jc病毒（jc virus,jcV）在肾移植受者中的感染情况及其感染对移植肾功能的影响,并初步探索jcV感染的影响因素.方法采用巢式PCR方法检测49例肾移植病人术后尿液标本中的jcV DNA,并以24例健康体检者为对照;定性PCR方法检测病人尿液标本中的巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）DNA;Binary Logistic回归方法分析jcV感染的可能影响因素：病人的年龄、性别、免疫抑制方案、CMV感染;以肾小球滤过率（glomerular filtration rate,GFR）作为肾功能的指标,t检验方法比较jcV感染和非感染者GFR有无差别.结果 jcV在肾移植病人中的感染率为42.9%,健康体检者为4.2%.移植后CMV感染和强的松＋MMF＋环孢素三联免疫抑制方案是jcV感染的危险因素（OR=10.101,P=0.049;OR=6.286,P=0.008）.jcV感染者和非感染者的GFR分别为86.470±29.990和84.060±33.729,两者间的差异无统计学意义（t=0.259,P=0.797）.结论 jcV在肾移植病人中有很高的感染率,CMV感染和使用强的松＋MMF＋环孢素三联免疫抑制方案可明显增加jcV感染的危险性;jcV感染对移植肾功能无影响.

关键词： jc病毒移植尿液感染

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jc病毒VLP—Z的制备及其生物活性鉴定

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第12期29卷 1114-1117页

作者：翟海燕屈秋民折潇西安交通大学医学院第一附属医院神经内科 710061

目的利用先期重组的原核表达质粒pET15b—VP1-Z体外表达重组的蛋白VP1-Z；研究VP1-Z是否组装成VLP—Z，以及VLP—Z是否具有与野生型VLP相同的生物学活性。方法重组质粒pET15b—VP1-Z转染大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导重组蛋白VP1-Z表... 详细信息

目的利用先期重组的原核表达质粒pET15b—VP1-Z体外表达重组的蛋白VP1-Z；研究VP1-Z是否组装成VLP—Z，以及VLP—Z是否具有与野生型VLP相同的生物学活性。方法重组质粒pET15b—VP1-Z转染大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导重组蛋白VP1-Z表达；按照野生型VLP的制备方法纯化蛋白；Westernblot和考马斯亮蓝染色确定纯化蛋白及其纯度；电镜观察VLP-Z是否形成病毒样颗粒；血凝抑制试验检测VLP—Z是否具有血凝抑制活性；细胞免疫荧光检测VLP—Z能否转运进入细胞。结果超速离心法得到纯度及浓度较高的重组蛋白VLP—Z，其相对分子质量约50×10^3；电镜观察发现VLP—Z组装成病毒样颗粒，直径约45—50nm，较野生型VLP直径稍大；血凝抑制试验证实VLP-Z可以抑制人“O”型红细胞聚集；细胞免疫荧光显示，感染后VLP—Z可以转运进入HeLa细胞质及细胞核，与野生型VLP感染后相同。结论成功制备了VLP—Z，且VLP—Z具有与野生型VLP相同的生物学活性。

关键词： jc病毒病毒样颗粒基因治疗定向基因传递

jc病毒蛋白VP3原核表达载体的构建及诱导表达

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西安交通大学学报（医学版） 2009年第2期30卷 169-172页

作者：李小权毛羽郑铁龙成军张树林王琦李兴旺北京地坛医院北京100011 西安交通大学医学院第一附属医院新生儿科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院传染科陕西西安710061

目的构建jc病毒蛋白VP3原核表达载体,并观察其表达情况。方法通过聚合酶链式反应(PCR)获得VP3基因,将其连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电... 详细信息

目的构建jc病毒蛋白VP3原核表达载体,并观察其表达情况。方法通过聚合酶链式反应(PCR)获得VP3基因,将其连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析鉴定融合蛋白的表达情况。结果扩增获得VP3基因片段,成功构建了大肠杆菌原核表达jc病毒VP3载体。经IPTG诱导,得到了分子质量为59 ku的目的蛋白,Western blot证实其具有良好的抗原性。结论本研究成功表达了VP3蛋白,对于研究VP3蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础。

关键词： jc病毒 VP3蛋白原核表达

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jc病毒与肿瘤的研究进展

中华肿瘤防治杂志 2012年第16期19卷 1276-1280页

作者：郑玉双郑华川中国医科大学基础医学院病理生理研究所生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳11000

目的:总结jc病毒(jcV)研究现状,深入分析jcV T抗原致癌机制及未来研究方向。方法:应用PubMed数据库检索系统,以"jc virus"或"John Cunningham virus"为关键词,检索1991-01-2012-06的相关文献,共检索到英文文献1 599条。纳入标准:1)jcV... 详细信息

目的:总结jc病毒(jcV)研究现状,深入分析jcV T抗原致癌机制及未来研究方向。方法:应用PubMed数据库检索系统,以"jc virus"或"John Cunningham virus"为关键词,检索1991-01-2012-06的相关文献,共检索到英文文献1 599条。纳入标准:1)jcV的基因组结构特点;2)jcV编码产物的生物学功能;3)jcV与恶性肿瘤发生、发展的关系。根据纳入标准,符合分析的文献41篇。结果:jcV属于多瘤DNA病毒家族成员,基因组早期编码区经选择性剪接编码T抗原和t抗原,晚期编码区编码衣壳蛋白VP1、VP2、VP3及调节蛋白Agno。T抗原可与抑癌基因p53和Rb蛋白结合后导致其失活,使Wnt和IGF信号传导途径发生紊乱,影响基因组稳定性,进而参与肿瘤发生。jcV经静脉、颅内注射及转基因动物实验表明,其可引发各种神经系统肿瘤;体内实验结果提示,jcV T抗原DNA存在与消化道、呼吸道肿瘤以及B细胞淋巴瘤关系密切。结论:jcV基因组嵌入后正确表达与恶性肿瘤发生关系密切,运用jcV T抗原建立恶性上皮肿瘤转基因动物研究,不但可证实其与恶性上皮肿瘤的关系,也为揭示其致癌机制和上皮肿瘤的基因治疗提供重要手段。

关键词：肿瘤 jc病毒 T抗原综述文献

jc病毒T抗原诱发肺肿瘤转基因动物模型检测

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中华肿瘤防治杂志 2014年第5期21卷 321-324页

作者：勾文峰赵爽宋来杨雪峰郑鑫高野康雄郑华川辽宁医学院附属第一医院肿瘤实验中心辽宁锦州121000 承德医学院附属第一医院肿瘤外科河北承德067000 神奈川县立癌中心临床研究所

目的:利用细胞角蛋白19(K19)启动子构建胃黏膜上皮细胞中jc病毒(John Cunningham virus,jcV)T抗原表达转基因鼠,试图建立胃黏膜自发肿瘤动物模型。方法:利用限制性内切酶NdeⅠ,酶切K19-jcV T抗原表达质粒,电泳分离带有K19启动子的T抗原... 详细信息

目的:利用细胞角蛋白19(K19)启动子构建胃黏膜上皮细胞中jc病毒(John Cunningham virus,jcV)T抗原表达转基因鼠,试图建立胃黏膜自发肿瘤动物模型。方法:利用限制性内切酶NdeⅠ,酶切K19-jcV T抗原表达质粒,电泳分离带有K19启动子的T抗原核酸序列后,显微注射入C57BL/6J30只小鼠受精卵中。PCR检测转基因阳性鼠,组织学观察主要脏器的形态学表现及免疫组化检测T抗原表达。结果:显微注射K19-jcV T抗原(KT)DNA片段后成功获得11种转基因阳性鼠,其中2个月龄KT7的各脏器组织学检测显示,脑、肝、肾、食管、前胃、胃、小肠、大肠、胰腺、肺、心脏和脾组织未见异常形态学改变,jcV T抗原特异表达于胃黏膜上皮细胞和支气管上皮细胞的细胞核中,16个月龄的KT7转基因鼠13.3%(2/15)出现肺肿瘤和腺癌的病理学改变,T抗原定位于癌细胞细胞核中。结论:jcV T抗原直接诱发肺肿瘤动物模型的建立为jcV T抗原嵌入所致上皮肿瘤提供了直接的实验依据,为jcV所致上皮肿瘤发生和演进分子机制奠定基础,同时为抗肿瘤药物筛选及基因治疗监控提供了良好的动物模型。

关键词： jc病毒 T抗原转基因鼠肺肿瘤

jc病毒小包膜蛋白VP2抗原及鼠多克隆抗体的制备

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中华传染病杂志 2010年第2期28卷 72-75页

作者：王殿丽郑铁龙王琦向天新成军毛羽卢联合李兴旺首都医科大学传染病学研究所北京100015 北京地坛医院外科北京地坛医院感染中心

目的构建jc病毒小包膜蛋白VP2的原核表达载体，表达纯化VP2蛋白，并制备其抗体。方法用PCR方法从患者脑脊液中扩增jc病毒小包膜蛋白VP2基因，测序正确后克隆入pET-32a（＋）原核表达载体，转化BL21大肠埃希菌，用异丙基-G—D硫代半乳糖... 详细信息

目的构建jc病毒小包膜蛋白VP2的原核表达载体，表达纯化VP2蛋白，并制备其抗体。方法用PCR方法从患者脑脊液中扩增jc病毒小包膜蛋白VP2基因，测序正确后克隆入pET-32a（＋）原核表达载体，转化BL21大肠埃希菌，用异丙基-G—D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达该蛋白并纯化。纯化的VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，制备鼠多克隆抗体。结果将pET-32a（＋）-VP2重组表达载体分别转化BL21大肠埃希菌，经IPTG诱导后，表达出相对分子质量为58．5×10^3左右的重组融合VP2蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示，IPTG诱导6～10h重组蛋白表达水平较高。Western印迹证实其具有良好的抗原性，且免疫BAI．B／c小鼠后成功制备了鼠多克隆抗体。结论成功构建原核表达载体pET-32a（＋）VP2并获得纯化VP2融合蛋白，并制备jc病毒小包膜蛋白VP2抗体，为进一步对VP2蛋白的功能及jc病毒流行病学调查等研究奠定了坚实的基础。

关键词： jc病毒基因病毒基因表达抗原病毒抗体病毒蛋白质类

jc病毒T抗原在儿童结直肠幼年性息肉中的表达

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临床儿科杂志 2014年第6期32卷 536-539页

作者：张莉娜潘键金玉南京医科大学附属南京儿童医院消化科江苏南京210008

目的探讨jc病毒感染与儿童结直肠幼年性息肉之间的关系。方法应用聚合酶链式反应(PCR)及免疫组化PV-9000法检测35例儿童结直肠幼年性息肉和23例儿童正常结直肠黏膜组织中jc病毒DNA片段及T-Ag蛋白。结果jc病毒DNA片段在儿童结直肠幼年性... 详细信息

目的探讨jc病毒感染与儿童结直肠幼年性息肉之间的关系。方法应用聚合酶链式反应(PCR)及免疫组化PV-9000法检测35例儿童结直肠幼年性息肉和23例儿童正常结直肠黏膜组织中jc病毒DNA片段及T-Ag蛋白。结果jc病毒DNA片段在儿童结直肠幼年性息肉中的检出率为31.4%(11/35),高于正常结直肠黏膜中的检出率[8.7%(2/23)];T-Ag蛋白在儿童结直肠幼年性息肉中的阳性表达率为22.9%(8/35),在正常结直肠黏膜中无表达;差异有统计学意义(P均jc病毒DNA片段检出率和T-Ag蛋白阳性率与患儿年龄、性别及息肉数量、部位、大小无明显关系(P均>0.05)。结论 jc病毒感染可能与儿童结直肠幼年性息肉有关,jc病毒感染可能是儿童结直肠幼年性息肉形成的危险因素之一。

关键词： jc病毒幼年性息肉结直肠息肉聚合酶链式反应免疫组织化学