检索结果-南通市图书馆

转基因植物检测体系在环境污染物突变性评价中的应用

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遗传 2004年第5期26卷 782-786页

作者：陈东韩凝马依群朱睦元浙江大学生命科学学院杭州310012 杭州市余杭区环境检测站杭州311100

很多环境污染物都能对生物体产生诱变性,可利用多种测试材料与方法对其基因毒性进行检测。转基因植物检测体系不仅能对环境污染的诱变性大小进行评价,而且还可以进一步分析其突变的分子机理。介绍了转基因植株检测体系的应用前景。

关键词：环境检测转基因工程 gus基因基因毒性

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胡杨转基因体系的建立

植物学报 2009年第6期44卷 728-734页

作者：范源伟刘挨枝王华芳北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室林木、花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种生物工程重点开放性实验室北京100083 内蒙古阿拉善盟农牧业局巴彦浩特750306

胡杨(Populus euphratica)是唯一能在沙漠里生长的高大乔木树种,建立其转基因体系可为胡杨抗逆分子机制与应用技术研究提供基本方法。通过研究农杆菌介导的胡杨转gus基因的技术体系得出以下结论:(1)胡杨再生植株体系,叶片在附加1.0μmol... 详细信息

胡杨(Populus euphratica)是唯一能在沙漠里生长的高大乔木树种,建立其转基因体系可为胡杨抗逆分子机制与应用技术研究提供基本方法。通过研究农杆菌介导的胡杨转gus基因的技术体系得出以下结论:(1)胡杨再生植株体系,叶片在附加1.0μmol·L-16-BA和5.0μmol·L-1NAA的1/2MS培养基上不定芽诱导率较高;(2)转基因体系,胡杨叶片在含100μmol·L-1乙酰丁香酮的OD600值为0.4-0.6的根癌农杆菌菌液中浸染15分钟,共培养2天,gus基因转化效率较高;(3)转基因植株抗生素筛选,转gus基因胡杨叶片用300mg·L-1头孢霉素抑制农杆菌生长,在含9mg·L-1G418的培养基上诱导不定芽以获得转基因的抗性植株。

关键词：根癌农杆菌 gus基因胡杨抗逆

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小麦茎生长点转化研究初报(英文)

华北农学报 2005年第1期20卷 17-22页

作者： RAZZAQAbdul 张艳敏杨帆游颜杰赵和马峙英王海波河北省农林科学院遗传生理研究所河北农业大学河北保定071001 河北农业大学

为了躲避转基因技术对组织培养的过分依赖,本研究以小麦为材料尝试了一种对生长点直接进行转化的方法,并初步证明了这一方法的可行性。具体做法是:将种子萌芽,然后剥去胚芽鞘暴露出生长点,再用玻璃纤维制作的小刷子将生长点刺伤,最后... 详细信息

为了躲避转基因技术对组织培养的过分依赖,本研究以小麦为材料尝试了一种对生长点直接进行转化的方法,并初步证明了这一方法的可行性。具体做法是:将种子萌芽,然后剥去胚芽鞘暴露出生长点,再用玻璃纤维制作的小刷子将生长点刺伤,最后用带有外源基因的农杆菌进行侵染处理。用携带hph-gus基因的LBA4404农杆菌,侵染处理1-11日龄幼苗(生长点),共培养7 d后检测新生芽中gus的瞬时表达情况;侵染1-2日龄幼苗(生长点),取长成植株的2-3朵小花进行gus稳定表达检测。又用携带BADH和npt Ⅱ基因的AGL1农杆菌菌株侵染1 日龄的幼苗(生长点),在含100 mg/L卡那霉素的蛭石中进行选择。结果表明,gus的瞬时表达率随被处理幼苗的日龄增加而降低,以2日龄幼苗为最高(10.7％)。用花序检测gus的稳定表达,被侵染受体为1日龄幼苗时的表达率高于2日龄的幼苗。蔗糖的存在并不提高gus基因在花序中表达的频率。不过花序表现为gus阳性的植株后代, 经PCR检测后并没有证实gus基因存在。用AGL1菌株进行转化,获得了13.6％的抗卡那霉素的绿色植株,但只有3株呈现PCR阳性,且只有1株结了实。

关键词：日龄幼苗侵染 gus基因植株小麦花序农杆菌 BADH 瞬时表达

油棕脂肪酸脱饱和酶基因ω3启动子区的克隆及其表达组织特异性分析

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分子植物育种 2016年第3期14卷 570-577页

作者：王雷郜凌超郑育声李东栋海南大学农学院海口570228 海南大学材料化工学院生物工程系海口570228

本研究是以油棕叶片基因组DNA为模板,通过数据库预测的油棕脱饱和酶基因ω3的启动子序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增及TA克隆的方法得到了长度为1 144 bp油棕脱饱和酶基因ω3启动子序列。通过Plant CARE软件分析该序列的顺式作用元... 详细信息

本研究是以油棕叶片基因组DNA为模板,通过数据库预测的油棕脱饱和酶基因ω3的启动子序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增及TA克隆的方法得到了长度为1 144 bp油棕脱饱和酶基因ω3启动子序列。通过Plant CARE软件分析该序列的顺式作用元件,发现该启动子不仅含有转录必备的CAAT-box和TATA box,还有大量相关的光反应元件和激素响应元件。通过构建含gus的植物表达载体,农杆菌介导转化转基因拟南芥,对转基因拟南芥进行活性表达分析。结果表明:克隆获得的启动子序列和下游gus基因已经稳定的整合到获得的转基因拟南芥基因组当中;同时,gus基因在拟南芥不同组织中体现出明显的组织特异性,其中,茎干处表达量最高,在叶片的叶脉处表达次之。说明ω3启动子具有活性,可以启动目的基因的转录,本研究为进一步研究启动子的功能及基因表达调控奠定了基础。

关键词：油棕 ω3 启动子序列分析 gus基因

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苹果异戊烯基转移酶基因启动子调控特性研究

核农学报 2019年第3期33卷 455-463页

作者：杜传慧付艳王利敏仇占南李晨辉朱元娣中国农业大学园艺学院北京100193

异戊烯基转移酶(IPT)是细胞分裂素合成途径的第一限速酶,过表达苹果MdIPT3a的转基因烟草表现出典型的细胞分裂素特异的生长表型,可作为苹果同源转基因的潜在筛选标记。为阐明MdIPT3a自主启动子对基因表达的调控作用,本试验克隆了富士苹... 详细信息

异戊烯基转移酶(IPT)是细胞分裂素合成途径的第一限速酶,过表达苹果MdIPT3a的转基因烟草表现出典型的细胞分裂素特异的生长表型,可作为苹果同源转基因的潜在筛选标记。为阐明MdIPT3a自主启动子对基因表达的调控作用,本试验克隆了富士苹果MdIPT3a基因上游启动子序列,分别构建不同长度的MdIPT3a启动子驱动gus基因的植物表达载体,以CaMV35S驱动gus基因的表达载体作为对照,遗传转化烟草W38,并对转基因植株进行gus定性和定量分析,探讨不同长度的MdIPT3a启动子对gus表达的影响。结果表明,转基因植株的各组织均有gus染色,不同长度的MdIPT3a启动子均能驱动gus基因表达,最小的有效启动子长446 bp,且含MdIPT3a启动子的转基因植株gus表达水平显著低于含35S启动子的对照植株。本试验结果为Md IPT3a的同源转基因技术研究提供了一定的理论参考。

关键词： MdIPT3a启动子 gus基因转基因表达遗传转化

蜡梅CpAGL6基因启动子的克隆及功能初步分析

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园艺学报 2015年第6期42卷 1139-1149页

作者：敬帆罗登攀马婧李名扬西南大学园艺园林学院重庆市花卉工程技术研究中心南方山地园艺学教育部重点实验室重庆400715

利用hi TAIL-PCR法,从蜡梅(Chimonanthus praecox)基因组中克隆到花发育相关基因Cp AGL6翻译起始位点上游1 266 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,该启动子序列中存在启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box及多个与植物非生物胁迫相关... 详细信息

利用hi TAIL-PCR法,从蜡梅(Chimonanthus praecox)基因组中克隆到花发育相关基因Cp AGL6翻译起始位点上游1 266 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,该启动子序列中存在启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box及多个与植物非生物胁迫相关的响应元件。为进一步分析Cp AGL6启动子的功能,构建该基因启动子与gus基因融合的植物表达载体,并用农杆菌介导法转化烟草。对转基因烟草进行gus组织化学染色及gus酶活性定量检测,结果显示,Cp AGL6基因启动子能够驱动gus基因在转基因烟草的叶、茎、花中表达,并且在不同花期表达强度存在差异,在根中几乎不表达。转基因植株经黑暗、赤霉素和4℃低温处理后,gus酶活性均有所增加。结果表明,Cp AGL6启动子主要驱动gus报告基因在花器官和绿色器官组织中表达,推测其在抵抗非生物胁迫中具有重要作用。

关键词：蜡梅 CpAGL6基因启动子 gus基因

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新疆野苹果瞬时遗传转化方法建立及初步验证

分子植物育种 2018年第22期16卷 7315-7321页

作者：李心悦张克闯张道远李进王玉成新疆师范大学干旱区植物逆境生物学重点实验室乌鲁木齐830054 中国科学院新疆生态与地理研究所中国科学院干旱区生物地理与生物资源重点实验室乌鲁木齐830011 中国科学院大学北京100049 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

为了在家苹果祖先——新疆野苹果(Malus sieversii (Ledeb.) Roem.)中快速获得目标基因的表达,旨在建立一种高效的外源基因瞬时表达系统。本研究以木本植物新疆野苹果组培苗为转化材料,采用农杆菌侵染法,将携带pCAMBIA1301空载体的EHA10... 详细信息

为了在家苹果祖先——新疆野苹果(Malus sieversii (Ledeb.) Roem.)中快速获得目标基因的表达,旨在建立一种高效的外源基因瞬时表达系统。本研究以木本植物新疆野苹果组培苗为转化材料,采用农杆菌侵染法,将携带pCAMBIA1301空载体的EHA105农杆菌菌株转化至野苹果植株,并进行了瞬时表达条件的研究,确立了转化菌液OD600为0.6,侵染时间为3.5 h的最优转化条件。在此最优条件下,将分别含有EsDREB2B和ScALDH21外源基因的农杆菌菌株EHA105转化野苹果组培苗,经基因组DNA PCR电泳检测以及半定量RT-PCR电泳检测均证明已成功转化,且初步验证了这两种外源基因的耐盐功能。为后续抗逆相关基因的原位功能验证提供了基础,同时也为未来新疆野苹果抗逆基因的快速筛选鉴定提供了一定的技术支撑。

关键词：瞬时转化农杆菌侵染法 gus基因 EsDREB2B基因 ScALDH21基因

玉米In5-2启动子功能区域在洋葱瞬时表达系统中的分析

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农业生物技术学报 2010年第6期18卷 1073-1078页

作者：马亮梅晓宏许文涛罗云波周忻唐小革黄昆仑中国农业大学食品科学与营养工程学院农业部转基因生物食用安全检验监督测试中心

本研究旨在通过对根癌农杆菌侵染洋葱表皮细胞的条件进行优化,从而建立一种新的瞬时表达系统,并将其应用于玉米In5-2启动子的功能区域的分析中,明确In5-2启动子的乙酰苯胺类化合物诱导元件的具体位置。在本研究中采用根癌农杆菌(A groba... 详细信息

本研究旨在通过对根癌农杆菌侵染洋葱表皮细胞的条件进行优化,从而建立一种新的瞬时表达系统,并将其应用于玉米In5-2启动子的功能区域的分析中,明确In5-2启动子的乙酰苯胺类化合物诱导元件的具体位置。在本研究中采用根癌农杆菌(A grobacterium tume faciens)侵染洋葱(Allium cepa)表皮细胞,对转β-葡糖醛酸酶(gus)基因的瞬时表达进行研究,并分析了侵染液中乙酰丁香酮(As)的浓度、侵染时间、菌液浓度、共培养时间对gus基因的瞬间表达的影响。结果显示,在OD600值为0.8的农杆菌液中感染15min,共培养3d,能够得到较高的gus基因瞬间表达,从而建立了一种新的瞬间表达系统。同时,构建了含不同长度的玉米(Zeamays)In5-2启动子片段缺失载体,利用新的瞬时表达系统分析其功能区域,推测出乙酰苯胺类化合物诱导元件位于ATG上游-220～-143bp之间。结果表明新的瞬时表达系统可以快速有效地进行启动子的分析。

关键词：洋葱表皮细胞根癌农杆菌 gus基因瞬时表达玉米In5-2启动子

杜氏盐藻DCA1启动子内GT重复序列在盐诱导调控中的作用

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中国生物工程杂志 2009年第7期29卷 50-55页

作者：罗清菊李杰闫红霞卢雪景吕玉民薛乐勋郑州大学生物系郑州450052

为了研究杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶(DCA1)启动子中高度重复的GT序列在盐诱导表达时的调控作用,设计不同的引物,通过PCR法获得6条不同长度的DCA1启动子片段,分别与gus报告基因融合后构建6个表达载体;电击法转化杜氏盐藻细胞。组织化学染色... 详细信息

为了研究杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶(DCA1)启动子中高度重复的GT序列在盐诱导表达时的调控作用,设计不同的引物,通过PCR法获得6条不同长度的DCA1启动子片段,分别与gus报告基因融合后构建6个表达载体;电击法转化杜氏盐藻细胞。组织化学染色和荧光定量法检测gus在不同盐浓度下的瞬时表达。结果显示,DCA1启动子内高度重复的GT序列无论与其上游、下游或上下游片段同时结合均能驱动gus基因的表达,并且其表达受氯化钠浓度调控,其中和上下游均结合时活性最强;无GT重复序列的融合片段及GT重复的下游片段也能驱动gus基因的表达,但其表达不受氯化钠浓度调控;而GT重复的上游片段不能驱动gus基因的表达。结果提示:盐藻DCA1启动子中高度重复的GT序列在盐诱导调控中起重要作用,可能为一种新型的盐诱导元件。

关键词：杜氏盐藻碳酸酐酶 gus基因 GT重复序列