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人乳头瘤病毒16/18E6蛋白检测在子宫颈癌筛查中的应用

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肿瘤研究与临床 2017年第3期29卷 164-167页

作者：张玉孙立新赵宏伟张永贞王丽霞马朝辉许翊苏芳张瑞锋山西医科大学研究生院太原030001 山西省肿瘤医院妇科太原030013 山西省肿瘤医院流行病室太原030013 山西省肿瘤医院病理科太原030013

目的评价检测人乳头瘤病毒（HPV）16/18 E6蛋白诊断子宫颈癌前病变及子宫颈癌的准确性和有效性.方法选取2014年5月至2015年1月在山西省肿瘤医院妇科就诊的有性生活史的女性439例,其中子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ及以上（CINⅡ、CINⅢ及... 详细信息

目的评价检测人乳头瘤病毒（HPV）16/18 E6蛋白诊断子宫颈癌前病变及子宫颈癌的准确性和有效性.方法选取2014年5月至2015年1月在山西省肿瘤医院妇科就诊的有性生活史的女性439例,其中子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ及以上（CINⅡ、CINⅢ及子宫颈癌）患者299例（病例组）,其余患者为对照组（140例）,所有研究对象均接受了液基薄层细胞检测（TCT）、HPV DNA、HPV 16/18 E6蛋白检测和阴道镜检查.结果病例组TCT、HPV DNA、HPV 16/18 E6蛋白检测的阳性率分别为97.0%（290/299）、94.3%（282/299）、66.9%（200/299）,对照组分别为44.3%（62/140）、21.4%（30/140）、2.9%（4/140）,两组差异均有统计学意义（均P〈0.05）;HPV DNA与HPV 16/18 E6蛋白检测对诊断的灵敏度分别为94.3%、66.9%,特异度分别为78.6%和97.1%;一致率为71.9%（κ=0.21）.病例组中,TCT与HPV DNA联合检测灵敏度为98.9%,特异度为82.8%,准确度为81.7%;TCT与HPV 16/18 E6蛋白联合检测灵敏度为97.9%,特异度为97.1%,准确度为95.0%.结论HPV 16/18 E6蛋白检测可提高子宫颈癌筛查的特异度,可作为HPV DNA检测无法开展或开展困难的欠发达地区的初筛方法,或作为HPV DNA阳性患者分流的方法,以更合理地分配有限的卫生资源.

关键词：人乳头瘤病毒16 人乳头瘤病毒18 宫颈肿瘤普查 E6蛋白

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HPV 18型E6蛋白抗原表位预测与分析

现代预防医学 2018年第7期45卷 1260-1263+1283页

作者：苏琳张祥李泳榆刘思静蒋明娟汪川四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院)

目的用生物信息学方法分析预测HPV 18型E6蛋白的B细胞和T细胞表位,为宫颈癌免疫治疗的疫苗及药物开发提供参考靶点。方法基于NCBI中HPV18型E6蛋白的氨基酸序列,利用DNA star软件预测其二级结构、亲水性、表面可及性及柔韧性;利用ABCpre... 详细信息

目的用生物信息学方法分析预测HPV 18型E6蛋白的B细胞和T细胞表位,为宫颈癌免疫治疗的疫苗及药物开发提供参考靶点。方法基于NCBI中HPV18型E6蛋白的氨基酸序列,利用DNA star软件预测其二级结构、亲水性、表面可及性及柔韧性;利用ABCpred软件预测出其B细胞表位;综合使用CTLPred和Net MHC 4.0软件分析其CTL表位;Pro Pred和Net MHCIIpan 3.1软件预测其Th表位。结果 HPV 18型E6蛋白二级结构中α螺旋和β转角较多且分布较为均匀;预测出了4个B细胞表位,它们大多与亲水性强、表面可及性好、柔韧性好的蛋白区域重叠,易于结合抗体;E6蛋白具有丰富的细胞毒性和辅助性T细胞表位。结论 HPV 18型E6蛋白作为宫颈癌免疫治疗的理想靶点具有同时诱导特异性体液免疫和细胞免疫的潜能,通过对其B/T细胞抗原表位的预测为免疫治疗相关疫苗及药物抗原肽的选择提供了理论依据。

关键词：人乳头瘤病毒18型 E6蛋白表位预测生物信息学

HPV16型E6蛋白的B细胞线性表位预测及分析

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中国病原生物学杂志 2015年第3期10卷 220-223,227页

作者：杨恩张燕侯柏龙杜王琪张丽芳温州医科大学第一临床医学院浙江温州325035 温州医科大学分子病毒与免疫研究所微生物学与免疫学教研室

目的对高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus)16型E6蛋白的B细胞线性表位进行预测。方法以HPV16型E6蛋白(P03126)的全长氨基酸序列为基础,采用eXPASY网站上的生物信息学软件和DNAstar软件包中的Protean软件分析E6蛋白的二级结构,跨... 详细信息

目的对高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus)16型E6蛋白的B细胞线性表位进行预测。方法以HPV16型E6蛋白(P03126)的全长氨基酸序列为基础,采用eXPASY网站上的生物信息学软件和DNAstar软件包中的Protean软件分析E6蛋白的二级结构,跨膜趋势及其亲水性,表面可及性,抗原性,极性和柔韧性等特性。综合以上参数预测HPV16型E6蛋白的B细胞线性表位,并进一步进行同源性匹配分析。结果综合多个参数分析显示B细胞线性表位可能位于E6蛋白N端2-7、9-19、30-36、45-49、105-109、119-125和148-158区段及其附近,进一步同源性匹配分析支持其中区段2-7、9-19、119-125及148-158为可能的B细胞线性表位,其中区段148-158(RSSRTRReTQL)为HPV16型E6蛋白所特有的序列,而区段2-7(HQKRTA)、9-19(FQDPQeRPRKL)与HPV9型E6蛋白具有同源性,区段119-125(PeeKQRH)与HPV31型E6蛋白具有同源性。结论综合分析预测HPV16型E6蛋白的B细胞线性表位可能位于E6蛋白N端2-7、9-19、119-125及148-158区段,为HPV16型E6蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词： HPV16型 E6蛋白 B细胞线性表位预测同源性匹配分析

HPV e6癌蛋白检测在宫颈癌筛查中的临床应用研究

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HPV E6癌蛋白检测在宫颈癌筛查中的临床应用研究

作者：张玉山西医科大学

学位级别：硕士

目的:评价HPV 16/18 e6癌蛋白检测技术检测宫颈癌前病变及癌的准确性和有效性。方法:选取2014年5月-2015年1月在山西省肿瘤医院妇科就诊的25-65周岁有性生活的妇女439例作为研究对象,所有参与对象均无妊娠及宫颈外科手术史,均经过知情同... 详细信息

目的:评价HPV 16/18 e6癌蛋白检测技术检测宫颈癌前病变及癌的准确性和有效性。方法:选取2014年5月-2015年1月在山西省肿瘤医院妇科就诊的25-65周岁有性生活的妇女439例作为研究对象,所有参与对象均无妊娠及宫颈外科手术史,均经过知情同意,签署知情同意书。每位妇女均接受了TCT、HPV DNA、HPV 16/18 e6癌蛋白检测和阴道镜检查及活检。以病理学结果为标准,与HPV DNA检测相比较,评价HPV16/18 e6癌蛋白检测对CINII+的诊断价值。结果:1.在439例研究对象中,TCT、HPV DNA、HPV16/18 e6癌蛋白检测的阳性率分别为80.2%、71.1%、46.5%,且三者阳性率随着宫颈病变的逐渐加重呈逐渐增高的趋势。2.在检出CINII级以上（CINII+）的患者中,HPV 16/18 e6癌蛋白的总阳性率为66.9%（200/299）,低于HPV DNA总阳性率94.3%（236/299）,差异有统计学意义（X2=71.9,P＜0.005）。3.在检出CINII级以上（CINII+）的患者中,HPV16/18 e6癌蛋白检测的灵敏度为66.9%（200/299）,低于HPV DNA检测的灵敏度94.3%（282/299）,差异有统计学意义（X2=71.9,P＜0.005）;特异度为97.1%（136/140）,高于HPV DNA78.6%（110/140）,差异有统计学意义（X2=20.9,P＜0.005）;阳性预测值为98.0%（200/204）,高于HPV DNA90.4%（282/312）,差异有统计学意义（X2=10.5,P＜0.005）;阴性预测值为57.9%（136/235）,低于HPV DNA86.6%（110/127）,差异有统计学意义（X2=31.3,P＜0.005）;准确度为64.0%,低于HPV DNA检测的准确度72.9%。4.在检出CINII+的患者中,HPV16/18 DNA与e6癌蛋白同时表达阳性和阴性的例数为256例,二者检测的一致率为85.6%（256/299）,Kappa=0.76;在所有受检者中,二者检测的一致率为87.9%（386/439）,Kappa=0.83;二者的一致性很强。5.在CINII+患者中,TCT与HPV联合检测,灵敏度为98.9%,特异度为82.8%,准确度为81.7%;TCT与e6癌蛋白联合检测,灵敏度为97.9%,特异度为97.1%,准确度为95.0%。结论:HPV e6癌蛋白作为一种能够监测病毒致癌活性的标志物,可将其作为HPV DNA检测无法开展或开展困难的欠发达地区的初筛方法,或作为HPV DNA阳性病人或（和）TCT为ASCUS及以上病变病人分流的方法,这些都将提高宫颈癌筛查的特异度并合理分配有限的卫生资源。

关键词：人乳头瘤病毒（HPV） E6蛋白宫颈病变酶免疫层析法筛查

58型HPV E6蛋白的原核表达与分离纯化

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云南大学学报（自然科学版） 2012年第S1期34卷 93-98页

作者：黄成铖林洁马岚清华大学深圳研究生院生命与健康学部广东深圳518055 清华大学生命科学学院北京100084 云南大学生命科学学院云南昆明650091

宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(HPV)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,HPV病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型... 详细信息

宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(HPV)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,HPV病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型和18型的HPV病毒;但是对于我国比较常见的58型HPV病毒却研究甚少.所以,本试验依据实验室现有的表达纯化平台和噬菌体展示多肽筛选平台,设计并构建了HPV58 E6蛋白的原核表达体系,并对e6重组融合蛋白进行了诱导表达.通过对表达获得的包涵体蛋白进行反复的洗涤、亲和层析以及复性等纯化步骤,得到了纯度较高的e6融合蛋白.

关键词：宫颈癌 HPV58 E6蛋白

HPV16型e6重组蛋白的表达及其兔多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第3期36卷 264-270页

作者：张庆媛朱进顺王路得汪琪朱珊丽陈韶张丽芳蒋朋飞温州医科大学分子病毒与免疫研究所微生物学与免疫学教研室浙江温州325000

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型e6原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法通过PCR法从Siha细胞株中获取HPV16 e6基因后克隆至peT21a(+)载体,构建peT21a(+)/HPV16 e6重组质粒,并经测序鉴定;将重组质粒peT21a(+)/HPV16 e6转化至e.coli BL21(De3... 详细信息

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型e6原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法通过PCR法从Siha细胞株中获取HPV16 e6基因后克隆至peT21a(+)载体,构建peT21a(+)/HPV16 e6重组质粒,并经测序鉴定;将重组质粒peT21a(+)/HPV16 e6转化至e.coli BL21(De3)中,通过异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达HPV16 e6-His标签融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后通过Western blot法鉴定;将纯化的HPV16型e6重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,eLISA检测免疫后血清多克隆抗体效价,并用Western blot法和免疫荧光技术分析HPV16 e6兔多克隆抗体的特异性。结果成功构建peT21a(+)/HPV16 e6重组质粒,并经测序鉴定;在重组质粒peT21a(+)/HPV16 e6转化至大肠杆菌BL21(De3)后,经亲和层析法获得纯化的HPV16型e6重组蛋白,用于免疫日本大耳白兔获得多克隆抗体,抗体效价为1∶40000,并用Western blot法和免疫荧光技术确认了多克隆抗体的特异性。结论HPV16 e6原核表达成功并制备了HPV16 e6兔多克隆抗体。

关键词：人乳头瘤病毒(HPV) E6蛋白原核表达多克隆抗体

宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测

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癌症 2006年第11期25卷 1374-1379页

作者：高艳娥郭金珠张菊宋天保阎小君西安交通大学第二医院妇产科陕西西安710004 第四军医大学全军基因诊断技术研究所陕西西安710032 西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系陕西西安710061

背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16e6重组表达载体并表达纯化获得HPV16e6重组蛋白,用于检测不同人群血清相... 详细信息

背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16e6重组表达载体并表达纯化获得HPV16e6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16e6血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16e6基因与pRSeT-A融合表达载体连接,获得e6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(De3)并用异丙基硫代-$-D-半乳糖苷(isopropylthio-$-D-galactoside,IPTG)诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被eLISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体。同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPVDNA。结果:pRSeT-16e6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr24×103的HPV16e6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%。表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经eLISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16e6血清抗体阳性率显著高于正常人(P6%,HPV16DNA阳性率46.9%。HPV16DNA阳性组血清HPV16e6抗体阳性率(46.7%)高于阴性组(17.6%),但两组间的差异无显著性(P>0.05)。结论:在pRSeT-A/BL21中表达获得的HPV16e6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16e6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E6蛋白基因表达血清抗体宫颈肿瘤

人乳头状病毒E6蛋白与宫颈癌关系的研究进展

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医学研究生学报 2014年第11期27卷 1229-1232页

作者：潘登华何融泉韦康来陈罡广西医科大学第一附属医院病理科南宁医学硕士研究生530021 广西医科大学第一附属医院肿瘤内科南宁530021

人乳头状病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌发生的最重要因素。HPV的早期基因区编码早期调控蛋白中的E6蛋白与宫颈癌的发生发展密切相关。HPV表达E6蛋白诱发宫颈癌的机制包括降解P53蛋白、激活端粒酶、影响与PDZ蛋白的交联作... 详细信息

人乳头状病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌发生的最重要因素。HPV的早期基因区编码早期调控蛋白中的E6蛋白与宫颈癌的发生发展密切相关。HPV表达E6蛋白诱发宫颈癌的机制包括降解P53蛋白、激活端粒酶、影响与PDZ蛋白的交联作用、扰乱细胞的信号转导、抑制免疫识别和阻碍细胞凋亡等途径。靶向HPV E6蛋白有望在宫颈癌预防和治疗中发挥重要作用。

关键词：宫颈癌 E6蛋白人乳头状病毒

紫柏凝胶对宫颈癌裸鼠移植瘤生长及瘤组织e6、e7蛋白表达的影响

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中国中西医结合杂志 2020年第6期40卷 721-726页

作者：温利娟薛晓鸥谢伟北京中医药大学东直门医院妇科北京100700

目的观察紫柏凝胶对宫颈癌裸鼠的抑瘤作用及对e6、e7、Rb、P53蛋白表达的影响。方法建立人宫颈癌Siha细胞荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠按随机数字表法分为模型组,顺铂组,紫柏凝胶高、中、低剂量组,每组7只。模型组不干预,顺铂组腹腔内注射0.... 详细信息

目的观察紫柏凝胶对宫颈癌裸鼠的抑瘤作用及对e6、e7、Rb、P53蛋白表达的影响。方法建立人宫颈癌Siha细胞荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠按随机数字表法分为模型组,顺铂组,紫柏凝胶高、中、低剂量组,每组7只。模型组不干预,顺铂组腹腔内注射0.5 mL顺铂(5 mg/kg),每4日1次,紫柏凝胶高、中、低剂量组分别在瘤体表面涂抹紫柏凝胶0.9428、0.4714、0.2357 g/kg,每日1次,连续用药28日。每日测量肿瘤体积、裸鼠重量、进食水量,停药24 h后处死裸鼠,完整取出肿瘤组织,称重并测量体积,将肿瘤组织切片后,行He染色,行移植瘤组织病理学观察,并采用免疫组化SP的方法,检测肿瘤组织中e6、e7、Rb和P53蛋白表达水平。结果与模型组比较,紫柏凝胶中、高剂量组及顺铂组在治疗第22、28日肿瘤体积减小(Pe6、Rb蛋白表达均降低(Pe7、P53蛋白表达均降低(Pe6、P53、e7、Rb蛋白表达均升高(Pe6、P53、e7、Rb蛋白表达均降低(P蛋白e6和e7的表达有关。

关键词：紫柏凝胶宫颈癌人乳头瘤病毒 E6蛋白 e7蛋白