宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测

作     者：高艳娥 郭金珠 张菊 宋天保 阎小君 GAO Yan-E;GUO Jin-Zhu;ZHANG Ju;SONG Tian-Bao;YAN Xiao-Jun

作者机构：西安交通大学第二医院妇产科陕西西安710004 第四军医大学全军基因诊断技术研究所陕西西安710032 西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系陕西西安710061 

出 版 物：《癌症》 (Chinese Journal of Cancer)

年 卷 期：2006年第25卷第11期

页      面：1374-1379页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：陕西省科技计划项目(No.2004K13-G2)~~ 

主　　题：人乳头瘤病毒16型 E6蛋白 基因表达 血清抗体 宫颈肿瘤 

摘      要：背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16E6血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E6基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用异丙基硫代-$-D-半乳糖苷(isopropylthio-$-D-galactoside,IPTG)诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被ELISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体。同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPVDNA。结果:pRSET-16E6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr24×103的HPV16E6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%。表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率显著高于正常人(P0.05)。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16E6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者。