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dna分子复制过程中的引物相关知识补充

中学生物学 2015年第8期31卷 3-4页

作者：刘学廷江苏省淮安中学

dna分子复制需要引物,体内dna分子复制需要RNA作为引物,复制结束后将引物切除,并通过相关酶补齐引物切除后留下的空隙;dna体外扩增时需要dna引物,复制结束时不需要切除引物,但对dna引物设计和合成提出了较高的要求。

关键词： RNA引物 dna引物引物切除引物设计

用引物介导的原位标记技术检测乳腺癌组织中HPV16dna的体会

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临床与实验病理学杂志 2001年第4期17卷 357-358页

作者：任占平黄健辉石喆杜娟陈蔚麟阮伶唐德艳戴文斌柳州市人民医院病理科柳州545001 柳州市人民医院外科柳州545001

自1993年Mansur等[1]证实人乳头瘤病毒(HPV)E6可转化人乳腺上皮细胞以来,乳腺癌组织中是否有HPV感染的存在一直是人们关注的焦点.1989年由Koch等[2]创立的引物介导的原位标记(primed in situ labeling,PRINS)技术可快速地特异识别细胞... 详细信息

自1993年Mansur等[1]证实人乳头瘤病毒(HPV)E6可转化人乳腺上皮细胞以来,乳腺癌组织中是否有HPV感染的存在一直是人们关注的焦点.1989年由Koch等[2]创立的引物介导的原位标记(primed in situ labeling,PRINS)技术可快速地特异识别细胞内感染的病毒基因的存在,其检测病毒基因的敏感性明显高于原位杂交法并可进行细胞内定位.为证实人乳腺癌组织中是否有HPV感染的存在,我们应用PRINS技术开展了乳腺癌组织中HPV16型dna的检测.1 材料与方法

关键词：乳腺肿瘤 dna引物人乳头状瘤病毒 HPV16 原位标记技术 dna

通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性(英文)

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北京大学学报（医学版） 2009年第6期41卷 691-698页

作者：何湘君张旗刘玉京潘秀英北京大学人民医院临床分子生物学研究所中心实验室北京100044

目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以... 详细信息

目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果:提高退火温度12℃～14℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。

关键词：微RNAs 逆转录聚合酶链反应 dna引物基因表达谱

采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒

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浙江大学学报（医学版） 2018年第4期47卷 405-412页

作者：赵锦夏海雄刘雨杰 Ravinder Pal 范安然何志旭曾令文贵州医科大学基础医学院免疫教研室组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 贵州医科大学海外教育学院贵州贵阳550004 中国科学院广州生物与医药健康研究院干细胞与分子诊断室广东广州510530

目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cdna用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置... 详细信息

目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cdna用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～10^(12)fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0. 98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。

关键词：登革热/诊断 dna引物序列分析核酸扩增技术纳米技术金/诊断应用生物技术

基因组简并寡核苷酸引物聚合酶链反应的影响因素

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北京大学学报（医学版） 2005年第4期37卷 436-439页

作者：杨丽君郁卫东梁蓉尚美郭静竹北京大学人民医院儿科北京100044 北京大学人民医院中心实验室北京100044

目的:对影响现有微量基因组扩增方法———简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerateoligonucleotideprimedPCR,DOP-PCR)的因素进行探讨。方法:针对现有DOP-PCR扩增过程中存在的影响产物产量和特异性的因素进行分析,分别从不同的dna模... 详细信息

目的:对影响现有微量基因组扩增方法———简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerateoligonucleotideprimedPCR,DOP-PCR)的因素进行探讨。方法:针对现有DOP-PCR扩增过程中存在的影响产物产量和特异性的因素进行分析,分别从不同的dna模板来源、模板梯度稀释与否以及DOP-PCR扩增产物是否采用低熔点胶回收去除干扰分析的小片段等方面进行研究,最后以特异性基因(FTCD和CBS)PCR扩增的结果作为评价指标,了解上述因素对DOP-PCR扩增的影响。结果:以小鼠单个卵细胞基因组为模板与以肝基因组dna为模板相比,在产量上前者明显低于后者,特异性上两者相当。小鼠肝基因组dna梯度稀释作为模板进行扩增的结果没有明显差异。与未经低熔点胶回收的DOP-PCR产物相比,经低熔点胶回收的DOP-PCR产物在常规PCR扩增反应中得到的产物特异性更好。结论:应用DOP-PCR方法进行扩增时,小鼠单个卵细胞可以用来进行DOP-PCR的扩增从而用于对特异性基因的检测,但是在扩增产量方面需要进一步的改进或优化。对现有DOP-PCR反应进行产物低熔点胶回收纯化,能够增加产物的特异性,效果满意。

关键词：基因扩增 dna引物聚合酶链反应小鼠

简并寡核苷酸引物聚合酶链反应扩增单细胞全基因组均匀性研究

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中华妇产科杂志 2000年第8期35卷 459-461页

作者：金帆黄荷凤叶英辉徐晨明邢兰凤浙江大学医学院附属妇产科医院产科杭州310006

目的　探讨单细胞简并寡核苷酸引物聚合酶链反应 (DOP PCR)扩增全基因组dna的均匀性及植入前胚胎遗传学研究的新途径。方法　获取正常男女性、X单体、X、13和 2 1三体细胞 ,行单细胞DOP PCR ,通过比较基因组杂交 (CGH )双色荧光强度比变... 详细信息

目的　探讨单细胞简并寡核苷酸引物聚合酶链反应 (DOP PCR)扩增全基因组dna的均匀性及植入前胚胎遗传学研究的新途径。方法　获取正常男女性、X单体、X、13和 2 1三体细胞 ,行单细胞DOP PCR ,通过比较基因组杂交 (CGH )双色荧光强度比变化 ,分析扩增均匀性。结果　 (1)DOP PCR产物 /正常男性基因组dnaCGH :约 1/ 3常染色质区强度比均数及标准差超过正常允许范围 ,X染色体假性过度表达 ,13、2 1三体无明显变化。 (2 )DOP PCR产物 /正常男性单细胞DOP PCR产物CGH :94%强度比均数及标准差接近期望值 ,能显示正常男女性、X单体、X、13和 2 1三体染色体拷贝数变化。结论　单细胞DOP PCR扩增基因组dna存在明显的不均匀性 ,但这种不均匀扩增是非随机的。如选择合适的参照 ,扩增产物可用于植入前胚胎等单细胞全基因组研究。

关键词：白细胞,单核 dna引物聚合酶链反应植入前诊断

简并引物在扩增GBV-C/HGVNS3高度变异区的应用

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第5期18卷 417-420页

作者：王佑春庄辉李河民张华远 R LING TJ HARRISON 中国药品生物制品检定所北京医科大学微生物系 ROYAL FREE HOSPITAL SCHOOL OF MEDICINE

目的试图比较简并引物扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ３变异较大的区域的作用。方法设计了简并引物和减温（ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ）ＰＣＲ扩增程序以对目的基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行克隆及测序。结果该方法能够检测基因变异约达... 详细信息

目的试图比较简并引物扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ３变异较大的区域的作用。方法设计了简并引物和减温（ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ）ＰＣＲ扩增程序以对目的基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行克隆及测序。结果该方法能够检测基因变异约达２１％的区域。结论提示该法是一项有效的了解基因家系的技术。

关键词： dna引物聚合酶链反应庚型肝炎病毒 NS3

通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究

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中华预防医学杂志 2009年第10期43卷 890-894页

作者：文海燕王静刘衡川孙肖红杨宇胡孔新单麟军中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所北京100025 四川大学华西公共卫生学院

目的建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法，用于生物恐怖病原体的快速筛检。方法选择保守的细菌16S rdna序列，并针对炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis，B．a）、鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis，Y.p）、布鲁菌属（Brucella spp.，... 详细信息

目的建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法，用于生物恐怖病原体的快速筛检。方法选择保守的细菌16S rdna序列，并针对炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis，B．a）、鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis，Y.p）、布鲁菌属（Brucella spp.，Bru）、土拉弗朗西斯菌（Francisella tularensis，F.t）和类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei，B．P）等5种生物恐怖细菌设计种（属）特异性探针，经16S rdna通用引物341A、519B扩增基因组dna，用基因悬浮芯片方法进行检测，并对方法的灵敏度、特异度、重复性、检测能力进行验证。结果经16S rdna通用引物扩增，特异性探针杂交检测，能将样本细菌鉴定到属水平，同属菌出现交叉反应；检出限分别为类鼻疽伯克霍尔德菌1．5pg／μl，布鲁菌属20pg／μl，炭疽芽孢杆菌7pg／μl，土拉弗朗西斯菌0．1pg／μl，鼠疫耶尔森菌1．1pg／μl；15次重复检测各探针变异系数（CV）为5．18％～17．88％，具有较好的重复性；方法可正确检出模拟白色粉末样本中炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森菌。结论建立了通用型基因悬浮芯片检测体系快速高通量筛查生物恐怖细菌的方法。

关键词： dna引物电泳微芯片生物恐怖细菌

内蒙古8种啮齿类动物细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因引物的优化研究

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中华地方病学杂志 2015年第5期34卷 322-325页

作者：刘芳常子丽李建云王建军王浩珲胡艳红武正华马志东范龙兴张忠兵内蒙古地方病防治研究中心呼和浩特010031 内蒙古满洲里市疾病预防控制中心地方病防治科

目的确定内蒙古鼠疫自然疫源地8种啮齿类动物细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ （CO Ⅰ）基因扩增的最佳引物.方法在内蒙古锡林郭勒盟和乌兰察布市,采集8个鼠种的动物,提取基因组dna,选择6对已报道的扩增鼠CO Ⅰ基因的引物（F1/R1、F2/R2、F3/R3... 详细信息

目的确定内蒙古鼠疫自然疫源地8种啮齿类动物细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ （CO Ⅰ）基因扩增的最佳引物.方法在内蒙古锡林郭勒盟和乌兰察布市,采集8个鼠种的动物,提取基因组dna,选择6对已报道的扩增鼠CO Ⅰ基因的引物（F1/R1、F2/R2、F3/R3、F4/R4、VF/VR、F6/R6）,PCR扩增8个鼠种的CO Ⅰ基因,对扩增的产物进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析和比较.结果达乌尔黄鼠扩增CO Ⅰ基因的最佳引物为F3/R3,达乌尔鼠兔和蒙古兔尾鼠均为鸡尾酒引物VF/VR,大沙鼠、蒙古毛足鼠和布氏田鼠均为F6/R6,五趾跳鼠为F2/R2,子午沙鼠为F1/R1.8种啮齿动物的CO Ⅰ序列进行比对后,发现所有dna条码都是物种所独有,每个物种都有各自的鉴别位点.结论不同鼠种在扩增CO Ⅰ基因时需要相应种属特异性引物;扩增多种鼠种时,优先选择F6/R6引物或鸡尾酒引物,针对特殊鼠种可选择该鼠种特异引物进行扩增.

关键词：鼠疫基因扩增 dna引物