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Detection of somatostatin mRNA in rat gastroentero-pancreatic system with digoxigenin-labeled crna probe in situ hybridization

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Journal of Medical Colleges of PLA(China) 1996年第2期11卷 139-141,146页

作者：王瑞安蔡文琴姚钧向正华苏慧慈

Objective: To establish a sensitive, nonradioactive in situ hybridization method to detect the expression of gut regulatory peptide genes. Methods: The digoxigenin (Dig) labeled somatostatin (SS) RNA probes were synthesized with in vitro transcription system and the in situ hybridization was conducted on the cryostat sections of rat stomach , duodenum and pancreas. Results: Positive reaction sites were purple-blue in color and located in the cytoplasm with a light background and a strong contrast. Both the morphosis and distribution of the SS mRNA posrtive cells corresponded well with those of the previously reported SS immunoreactive cells. Conclusion: The Dig -labeled crna probe in situ hybridization method is simple, sensitive and reliable for the study of gut regulatory peptide gene expression.

关键词： digoxigenin somatostatin in situhybridization gastroenteropancreatic system crna probe rats

应用地高辛标记的crna探针原位杂交检测胰岛素mRNA

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解剖学报 1994年第3期25卷 323-326,T018页

作者：李占淳黄岩石爱荣北京医科大学组织学胚胎学系

成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，用地高辛标记的ＣＲＮＡ探针在胰腺切片上进行原位杂交，以检测胰岛Ｂ细胞胰岛素基因表达产物ｍＲＮＡ，同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞，进行比较。胰腺经４％多聚甲醛灌注固定... 详细信息

成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，用地高辛标记的ＣＲＮＡ探针在胰腺切片上进行原位杂交，以检测胰岛Ｂ细胞胰岛素基因表达产物ｍＲＮＡ，同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞，进行比较。胰腺经４％多聚甲醛灌注固定，经Ｂｏｕｉｎ液再固定２０ｈ，常规石蜡包埋和切片。经胰岛素ＣＲＮＡ探针杂交的胰腺切片中胰岛Ｂ细胞的胞质和核仁呈阳性反应，阳性信号为蓝色颗粒。瞩岛其他细胞及胰腺腺泡细胞为阴性。方法对照切片中均无阳性信号出现。经与免疫组织化学染色的相邻切片比较证明，原位杂交显示的阳性细胞与胰岛素免疫反应阳性细胞相一致。本研究所用原位杂交方法简单，结果可靠，重复性好。

关键词：胰岛素地高辛标记 crna 探针 mRNA

同时检测樱桃绿环斑驳病毒和桃潜隐花叶类病毒的二聚crna探针制备和应用

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植物保护学报 2016年第6期43卷 1055-1056页

作者：高蕊梁颖博李世访麦合木提江·米吉提卢美光中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 北京农学院北京102206

樱桃绿环斑驳病毒（Cherry green ring mottle virus,CGRMV）和桃潜隐花叶类病毒（Peach latent mosaic viroid,PLMVd）是桃树上的主要病原。在检测中发现,我国桃树病毒多以CGRMV与PLMVd复合侵染为主,侵染率较高。通过分子克隆,串联几... 详细信息

樱桃绿环斑驳病毒（Cherry green ring mottle virus,CGRMV）和桃潜隐花叶类病毒（Peach latent mosaic viroid,PLMVd）是桃树上的主要病原。在检测中发现,我国桃树病毒多以CGRMV与PLMVd复合侵染为主,侵染率较高。通过分子克隆,串联几个病毒核酸序列合成多聚探针,能同时检测多个病毒和类病毒（Torchetti et al.,2012）。目前尚无关于CGRMV单一探针和同时检测CGRMV与PLMVd二聚探针的报道。本研究通过设计带酶切位点的特异引物制备二聚crna探针,以期建立适用于田间果树样品中CGRMV和PLMVd的快速检测技术,为桃树病毒病害的防治提供理论基础。

关键词： crna 病毒病害复合侵染病毒核酸分子克隆类病毒 latent mosaic 体外转录重组质粒

构建crna作为标准曲线的实时RT-PCR检测方法

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临床检验杂志 2004年第3期22卷 172-174页

作者：蔡刚李闻捷丁健华付传刚沈茜第二军医大学附属长海医院中心实验室上海200433 第二军医大学附属长海医院普外科上海200433

目的　建立一种新的基于LightCyclerTM技术 ,并通过构建crna标准曲线来对目的基因进行定量实时RT -PCR的检测方法。方法　以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的crna作为标准品 ,并与样本同时进行反转录和PCR扩增 ,用此方法来检测目... 详细信息

目的　建立一种新的基于LightCyclerTM技术 ,并通过构建crna标准曲线来对目的基因进行定量实时RT -PCR的检测方法。方法　以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的crna作为标准品 ,并与样本同时进行反转录和PCR扩增 ,用此方法来检测目的基因在结直肠组织中的表达。结果　采用crna标准品制作的标准曲线具有较好的线性关系 (r>0 .99) ,而且在每次实验中都能取得较好的扩增效率 ,CEA与GAPDH的扩增效率分别大于 88.7%和 87.4 %。结论　此方法能较为准确的对组织中的目的基因表达进行定量检测。

关键词： crna 标准曲线实时RT-PCR检测 mRNA定量

用地高辛标记的crna探针检测人体内和环境中的肠道病毒

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国外医学(微生物学分册) 1994年第3期17卷 134-135页

作者：朱献忠

肠道病毒可感染人体多个系统而引起疾病,检测和控制肠道病毒感染很重要。作者用地高辛标记的crna探针,用斑点杂交法检测人体内和环境中的肠道病毒。用互补于脊髓灰质炎病毒RNA 5’端非编码区（5’NC）的探针和互补于VP;区的探针检测一... 详细信息

肠道病毒可感染人体多个系统而引起疾病,检测和控制肠道病毒感染很重要。作者用地高辛标记的crna探针,用斑点杂交法检测人体内和环境中的肠道病毒。用互补于脊髓灰质炎病毒RNA 5’端非编码区（5’NC）的探针和互补于VP;区的探针检测一系列已知效价的肠道病毒,以了解该方法的敏感性,再用同样方法检测临床粪便标本和水标本中的肠道病毒,并同时用细胞培养方法平行检测以作比较。粪便标本用加有抗生素的Eagle’s BME营养液悬浮后25 000r/min 1h离心,上清液作为粗制病毒液;水标本经超滤、透析、PEG-20000浓缩病毒,再用常规方法提取核酸进行杂交,加酶标地高辛抗体,最后加底物显

关键词：地高辛标记 crna NC 肠道病毒脊髓灰质炎病毒小儿麻痹病毒

诱生性一氧化氮合酶crna探针的制备及敏感性检测

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徐州医学院学报 1999年第4期19卷 265-267页

作者：王迎伟高丰光何球藻秦慧莲上海医科大学免疫学教研室

目的制备地高辛标记的大鼠诱生性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｃＲＮＡ探针。方法首先对携带大鼠ｉＮＯＳｃＤＮＡ的ＰＭＯＳＢｌｕｅ质粒进行转化扩增。然后提取扩增的质粒ＤＮＡ并用ＢａｍＨⅠ内切酶酶切处理使其线性化。以线性化的ｃＤ... 详细信息

目的制备地高辛标记的大鼠诱生性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｃＲＮＡ探针。方法首先对携带大鼠ｉＮＯＳｃＤＮＡ的ＰＭＯＳＢｌｕｅ质粒进行转化扩增。然后提取扩增的质粒ＤＮＡ并用ＢａｍＨⅠ内切酶酶切处理使其线性化。以线性化的ｃＤＮＡ为模板，在Ｔ７ＲＮＡ聚合酶的作用下，体外转录带有地高辛的ｉＮＯＳｃＲＮＡ探针。结果该地高辛标记的ｃＲＮＡ探针用点杂交法能检出相应ＤＮＡ的敏感性可达０．１μｇ／Ｌ。结论该ｉＮＯＳｃＲＮＡ探针可用作检测组织细胞内ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达。

关键词：地高辛 iNOS探针质粒一氧化氮合酶 crna

人体肿瘤病毒特异DNA的检测——Ⅱ、与人疱疹组病毒互补RNA(crna)的核酸杂交

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国际肿瘤学杂志 1976年第2期 72-73页

作者：胡利富

某些疱疹类病毒的致癌潜能早已确定。来自各种人体恶性和非恶性肿瘤组织的DNA与体外用人疱疹组病毒DNA为模板,以大肠杆菌RNA聚合酶合成的标记互补RNA一起在硝酸纤维素薄膜上进行分子杂交,结果表明:

关键词：何杰金氏病肉瘤 crna 恶性肉芽肿淋巴瘤 DNA RNA

前生长抑素原mRNA神经元在大鼠大脑皮质的生后早期发育──地高辛标记crna探针原位杂交的研究

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解剖学报 1994年第2期25卷 183-183页

作者：周兰仙韩爱民袁华胡家荦王丹王晓云章祖陈王亚威湖北医科大学解剖学教研室

前生长抑素原ｍＲＮＡ神经元在大鼠大脑皮质的生后早期发育──地高辛标记ｃＲＮＡ探针原位杂交的研究（湖北医科大学解剖学教研室，武汉４３００７１周兰仙，韩爱民，袁华，胡家荦，王丹，王晓云，章祖陈，王亚威）已有资料表明，生长... 详细信息

前生长抑素原ｍＲＮＡ神经元在大鼠大脑皮质的生后早期发育──地高辛标记ｃＲＮＡ探针原位杂交的研究（湖北医科大学解剖学教研室，武汉４３００７１周兰仙，韩爱民，袁华，胡家荦，王丹，王晓云，章祖陈，王亚威）已有资料表明，生长抑素作为一种神经递质或调质，在脑的...

关键词：地高辛标记 crna mRNA 神经元神经组织早期发育大鼠大脑皮质原位杂交

地高辛标记的crna探针在胰岛素mRNA原位分子杂交中的应用

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解剖学报 1993年第4期 395-395页

作者：李占淳黄岩石爱荣北京医科大学组织学胚胎学教研室北京医科大学组织学胚胎学教研室北京 100083

采用雄性成年Wistar大鼠胰腺,用地高辛标记的crna探针进行原位分子杂交,以检测胰岛B细胞的胰岛素基因表达产物mRNA;同时用免疫组织化学PAP法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行原位比较。1.标本制备:大鼠经4%多聚甲醛灌流固定,取... 详细信息

采用雄性成年Wistar大鼠胰腺,用地高辛标记的crna探针进行原位分子杂交,以检测胰岛B细胞的胰岛素基因表达产物mRNA;同时用免疫组织化学PAP法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行原位比较。1.标本制备:大鼠经4%多聚甲醛灌流固定,取胰尾,入Bouin液固定20h,常规石蜡包埋,切片厚6μm,裱在用铬矾明胶处理的载片上。2.探针标记:用RNA标记试剂盒(Boehringer Mannheim

关键词：地高辛标记 crna 胰岛素多肽 mRNA 分子杂交