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In Search of Regulators of <i>LeSPL-CNR</i>by South-Western blotting and Yeast One-Hybrid Library Screening System

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American Journal of Plant Sciences 2018年第5期9卷 1037-1050页

作者： Xiaohong Wang Bishun Ye Ying Wang Ting Zhou Tongfei Lai Research Centre for Plant RNA Signaling College of Life and Environmental Sciences Hangzhou Normal University Hangzhou China Key Laboratory for Quality and Safety of Agricultural Products of Hangzhou City College of Life and Environmental Science Hangzhou Normal University Hangzhou China

LeSPL-CNR is a crucial transcription factor for fruit ripening of Solanum lycopersicum. The cnr (colorless non-ripening) epimutation resulted from hypermethylation in a 286 bp region of LeSPL-CNR promoter inhibits normal fruit ripening. In present study, potential regulators of LeSPL-CNR, which could bind to the specific 286 bp region, were screened via south-western blotting and yeast one-hybrid (Y1H) library screening system. Results indicated that a total of 13 and 19 candidate proteins were acquired respectively, and both ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase and 40S ribosomal protein were identified by two methods. These would provide some information for revealing roles of DNA methylation and the regulatory mechanism for LeSPL-CNR.

关键词： Solanum lycopersicum LeSPL-CNR 286 bp Region South-Western blotting Yeast One-Hybrid

Observation on Plant Leaf Transection by Gelatin blotting

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Journal of Northeast Agricultural University(English Edition) 2011年第3期18卷 7-11页

作者： TAN Dahai LI Fuheng WANG Xiaocen HUANG Fushan College of Life Sciences Northeast Agricultural University Harbin 150030 China Resources and Environmental Sciences College Northeast Agricultural University Harbin 150030 China

blotting was used to observe cell structures of leaf epidermis cells, and the key method of leaf transaction observation was paraffin section. The concentration, suitable solidification time, melting temperature of gelatin solution and the stain for the gelatin blotting were studied in this research. The results showed that the gelatin blotting could be used to study leaf transaction, it was benefit to make operation easily, and save time, money and so on

关键词： gelatin solution blotting leaf transaction observation

高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究

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首都医科大学学报 2016年第5期37卷 616-620页

作者：纪晓方李丽英常娜首都医科大学2011级基础医学专业北京100069 首都医科大学基础医学院细胞生物学系肝脏保护与再生调节北京市重点实验室北京100069

目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组... 详细信息

目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。

关键词：高内涵分析 Western blotting 蛋白质核质分布

疯牛病和羊痒病Western blotting检测方法的建立

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中国兽医学报 2007年第1期27卷 66-69,73页

作者：王辉暖赵德明宁章勇杨建民吴常德郝俊峰白玉王传武孟丽平中国农业大学国家动物海绵状脑病实验室北京100094

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为... 详细信息

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90V,分离胶电泳电压为恒压160V,转印的最佳电压和时间为恒压100V1.5h;封闭液为3%BSA时,封闭15min,封闭效果最好;AH6的最佳稀释度为1∶4000,4℃下孵育过夜,马抗鼠二抗的最佳稀释度1∶1000,室温下孵育30min。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics-Check WEST-ERN进口试剂盒的检测结果比较,发现其敏感性为100%,特异性为99.4%,与进口试剂盒(100%,100%)无显著差异,这为国产试剂盒研制提供了条件。

关键词：疯牛病羊痒病 Western blotting

反向Northern blotting对小梅山猪下丘脑发育差异表达ESTs的鉴定

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江苏农业科学 2009年第3期37卷 22-24页

作者：周春宝潘孝青李霖丁家桐扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300 扬州教育学院江苏扬州225009

用mRNA差异显示技术从小梅山猪下丘脑不同发育阶段,分离并筛选出3个差异表达ESTs,分别命名为MS01、MS02、MS03。利用地高辛DNA标记与检测技术反向Northern斑点杂交,对分离出来的ESTs进行鉴定结果理想。此法避免了同位素放射性污染,操作... 详细信息

用mRNA差异显示技术从小梅山猪下丘脑不同发育阶段,分离并筛选出3个差异表达ESTs,分别命名为MS01、MS02、MS03。利用地高辛DNA标记与检测技术反向Northern斑点杂交,对分离出来的ESTs进行鉴定结果理想。此法避免了同位素放射性污染,操作简单,可防止DDRT-PCR过程中假阳性的出现,提高了试验准确性,是一种鉴定差异显示ESTs简单而有效的方法。

关键词：小梅山猪反向Northern blotting 下丘脑 ESTs 鉴定

肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测

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中国畜牧兽医 2011年第1期38卷 100-104页

作者：张利涛刘慧琳曹以诚华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表... 详细信息

研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表达的载体,用来表达siRNA。将目标载体分别转染肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MDB-MB-231、人胚肾细胞293,在蛋白质水平上检验siRNA抑制的组织特异性。Western blotting结果证实,siEGFP在肝组织来源的细胞系HepG2中抑制效率明显高于其他两组细胞。构建的载体可以在肝癌细胞系中特异性的表达siRNA,而在其他组织细胞中不表达,实现了组织特异性。进一步将siEGFP替换为抑制HBV表达的siRNA,同样可以实现肝脏特异性的表达。

关键词： RNAi 组织特异性siRNA 肝脏特异性 EGFP Western blotting

基于分子对接虚拟技术及Western blotting实验考察苍耳亭对肝癌上皮间质转化作用靶点的影响

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药物评价研究 2017年第11期40卷 1535-1540页

作者：吴育曹刚石美琴杨水英姜晓燕南通市中医院药剂科江苏南通226001

目的用分子对接技术探讨苍耳亭在上皮间质转化(EMT)过程中的作用靶点,并通过Western blotting实验检测其对肝癌HepG2细胞相应靶点蛋白表达的影响。方法选取在EMT过程中的关键因子蓬乱蛋白(Dhs)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、血管内皮生... 详细信息

目的用分子对接技术探讨苍耳亭在上皮间质转化(EMT)过程中的作用靶点,并通过Western blotting实验检测其对肝癌HepG2细胞相应靶点蛋白表达的影响。方法选取在EMT过程中的关键因子蓬乱蛋白(Dhs)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)为作用靶点,采用分子对接虚拟技术评价苍耳亭与其空间结合能力,并与相应内源性物质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、醋酸离子、黄素腺嘌呤二核苷酸、N-乙酰葡糖胺对比;培养HepG2细胞,给予1、5、20μmol/L浓度的苍耳亭,利用Western blotting实验检测其对Dhs、Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白表达的影响。结果分子对接结果显示,苍耳亭与EMT过程中作用靶点均具有一定亲和力,其中与Dhs、Snail、VEGFR3的亲和力高于内源性物质,与Vimentin的亲和能力不及内源性物质;Western blotting实验结果显示,苍耳亭显著下调Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白表达(Pblotting实验结果具有一定的相似性,能预先提示潜在靶因子。

关键词：苍耳亭上皮间质转化分子对接 Western blotting 肝癌侵袭转移作用靶点

拟南芥DBB1a(double B-box 1a)蛋白的表达、纯化及Western blotting检测

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激光生物学报 2010年第2期19卷 224-228页

作者：屠小菊汪启明李秀山邓克勤唐东英罗泽宇赵小英刘选明湖南大学生命科学与技术研究院湖南长沙410082 湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室湖南长沙410082 湖南大学生命科学与技术研究院湖南长沙410082

PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a。15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测。证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合。表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBBl a功能奠定了基础。

关键词： DBBla 原核表达蛋白纯化 Western blotting

Western blotting中低丰度蛋白转膜方法改进

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泸州医学院学报 2014年第5期37卷 472-475页

作者：牟宏宇罗波何涛泸州医学院肿瘤医学研究所四川泸州646000

目的:改进Western blotting转膜方法,提高低丰度蛋白转膜效率。方法:在Western blotting转膜过程中,采用不同孔径的PVDF膜、不同的转膜时间及不同的甲醇含量进行转膜。转膜后,考马斯亮蓝染色观察PAGE胶上蛋白残留情况,ECL发光法检测FGFR... 详细信息

目的:改进Western blotting转膜方法,提高低丰度蛋白转膜效率。方法:在Western blotting转膜过程中,采用不同孔径的PVDF膜、不同的转膜时间及不同的甲醇含量进行转膜。转膜后,考马斯亮蓝染色观察PAGE胶上蛋白残留情况,ECL发光法检测FGFR1曝光强度。结果:通过改变膜孔径大小和转膜时间所得实验结果可见,孔径为0.22μm的PVDF膜转移2h的转膜效率更高。通过改变转膜液中甲醇含量所得实验结果可见,甲醇含量为10%转膜效率更高。结论:本实验对Western blotting转膜过程中低丰度蛋白的转膜方法进行了成功改进,改进后能提高蛋白显影强度,具有广泛的应用前景,是一种方便可行的操作方法。

关键词： Western blotting 低丰度蛋白质 PVDF膜甲醇