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二氢杨梅素对Bloom解旋酶结构和生物学活性的影响

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中国药理学通报 2019年第10期35卷 1453-1460页

作者：刘金河张望明晏文涛许键炜葛章文贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省人民医院检验科贵州贵阳550002 贵州中医药大学第一附属医院检验科贵州贵阳550001

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检... 详细信息

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检测等方法和技术研究DMY对BLM解旋酶的生物学活性的影响。结果圆二色谱和紫外光谱结果显示,DMY能与BLM解旋酶结合,且有1个结合位点;在0~25μmol·L^-1浓度范围内,DMY对BLM解旋酶的二级结构的干扰能力成正相关,在25~75μmol·L^-1浓度范围内则相反。荧光偏振和自由磷检测实验显示,DMY能结合在BLM解旋酶上,进而抑制BLM解旋酶的解链活性。结论DMY能够竞争性结合于BLM解旋酶的DNA结合位点上,改变BLM解旋酶的空间结构,从而抑制BLM解旋酶与DNA的结合,进而抑制BLM解旋酶的生物学活性。

关键词：二氢杨梅素 Bloom解旋酶生化活性构象二级结构圆二色谱荧光偏振

荧光偏振技术研究Bloom解旋酶催化核心与双链DNA的相互作用

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生物化学与生物物理进展 2013年第3期40卷 255-265页

作者：骆衡许厚强陈祥刘朝前许庆贺李坤贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学农学院贵州省山地农业病虫害重点实验室贵阳550025

bloom综合症(BLM)解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用.BLM解旋酶的突变可导致bloom综合症,患者遗传不稳定易患多种类型癌... 详细信息

bloom综合症(BLM)解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用.BLM解旋酶的突变可导致bloom综合症,患者遗传不稳定易患多种类型癌症.本研究运用荧光偏振技术研究BLM解旋酶催化核心(BLM642～1290)与双链DNA(dsDNA)的相互作用,分析其相关特征参数,了解BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链特性.结果表明:BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链与dsDNA 3′端的单链DNA(ssDNA)长度有关;解旋酶优先结合于dsDNA底物的ssDNA末端,且每分子解旋酶可结合9.6 nt的ssDNA;dsDNA 3′端ssDNA的长度为9.6 nt时,解旋酶的解链效率达到最大且不再随其长度而变化.另外,BLM642～1290解旋酶也能够结合和解链钝末端dsDNA,但其结合亲和力和解链效率低于有3′端ssDNA的dsDNA.推测BLM642～1290解旋酶在与dsDNA底物结合和解链时是单体形式,可能以尺蠖的形式解开dsDNA.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶的功能特征提供理论基础.

关键词： Bloom解旋酶 DNA结合 DNA解链荧光偏振技术

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用

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第二军医大学学报 2016年第6期37卷 699-703页

作者：罗霂榃许厚强刘忠伟段志强赵佳福吴萍陈福贵州大学生命科学学院贵阳550025 贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州大学农学院贵阳550025

目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用。方法使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细... 详细信息

目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用。方法使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(PBloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据。

关键词： RNA干扰前列腺肿瘤 Bloom解旋酶细胞增殖细胞迁移细胞侵袭细胞凋亡

人前列腺癌PC3细胞Bloom解旋酶基因干扰载体的构建

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中国细胞生物学学报 2015年第11期37卷 1497-1502页

通过RNAi技术干扰人前列腺癌PC3细胞bloom(BLM)解旋酶基因的表达。实验前期根据BLM解旋酶基因序列设计并合成两对sh RNA,插入到CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs载体,构建针对BLM解旋酶基因的重组干扰载体CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs-BLM1、CMV-cop GFPT2A-Puro-H1-mcs-BLM2。经测序载体构建成功后,用脂质体将所构建的载体及阴性对照载体转染前列腺癌PC3细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测转染细胞的BLM解旋酶表达情况。检测结果显示,成功构建了BLM解旋酶RNAi真核表达载体;利用脂质体转染PC3细胞后,荧光定量PCR和Western blot鉴定结果表明,BLM解旋酶的表达水平显著降低,即bloom RNAi真核表达载体在m RNA和蛋白质水平阻断了BLM解旋酶的表达。

关键词： RNAi 前列腺癌PC3细胞 Bloom解旋酶

RNA干扰Bloom解旋酶基因表达对人前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

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RNA干扰Bloom解旋酶基因表达对人前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

作者：罗霂榃贵州大学

学位级别：硕士

RecQ解旋酶家族是DNA解旋酶家族中高度保守的家族,在DNA复制、重组、修复、转录等细胞代谢和稳定遗传中起到至关重要的作用。Bloom解旋酶是RecQ家族中的一个重要的组成成员,它参与了DNA的复制、重组等细胞代谢过程,在维持端粒和染色体... 详细信息

RecQ解旋酶家族是DNA解旋酶家族中高度保守的家族,在DNA复制、重组、修复、转录等细胞代谢和稳定遗传中起到至关重要的作用。Bloom解旋酶是RecQ家族中的一个重要的组成成员,它参与了DNA的复制、重组等细胞代谢过程,在维持端粒和染色体的稳定性中也发挥着重要作用,并且其能够与多种蛋白因子发生相互作用,影响与之作用的因子的功能。Bloom解旋酶基因的突变可导致bloom综合征的发生,bloom综合征是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者不仅遗传不稳定,并且易患多种类型癌症。在DNA修复和细胞凋亡过程中,涉及到对DNA损坏和使复制叉停止的细胞应答。对DNA修复因子-BLM解旋酶的特异性抑制作用可能缓解癌细胞的高增殖率,暗示这种酶可能作为抗癌药物作用的分子靶标。本论文构建了Bloom解旋酶基因的RNA干扰载体,研究了其载体对人类前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响,这可能为人类前列腺癌的靶向基因治疗提供新思路,相关研究结果如下:1.构建了Bloom解旋酶基因的RNAi载体,经转化大肠杆菌感受态细胞克隆该载体,琼脂糖凝胶电泳和DNA测序证实了构建载体正确2.将构建的载体通过脂质体法转染进人前列腺癌PC3细胞中,转染一定时间后,提取细胞总RNA,反转录成cDNA,提取细胞总蛋白。用cDNA做模板进行荧光定量PCR实验,用定量后的总蛋白做模板进行蛋白质印迹(western-blot)实验。从基因和蛋白水平证明了该载体能够有效抑制Bloom解旋酶的表达。3.MTT、划痕实验、transwell小室实验检测、Hoechst/PI双染实验证明分别证明了Bloom解旋酶的表达被抑制后,人类前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移、侵袭能力均受到抑制,而PC3细胞的凋亡能力加强。

关键词： Bloom解旋酶 RNAi 人前列腺癌PC3细胞增殖迁移侵袭凋亡

用全内反射瞬逝场照明磁镊研究bloom解旋G-四联体

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物理学报 2017年第18期66卷 259-267页

作者：赵振业徐春华李菁华黄星榞马建兵陆颖中国科学院物理研究所软物质物理重点实验室北京100190 中国科学院大学物理学院北京100190 广东工业大学材料与能源学院广州510006

G-四联体(G-quadruplex,G4)是广泛存在于细胞基因组中的一种DNA结构,在DNA的代谢如复制、转录、同源重组等过程中起重要作用.G4解旋酶近年来受到广泛研究,其中bloom(BLM)解旋酶的研究已经相当丰富,但仍有一些基本问题不清楚.我们应用全... 详细信息

G-四联体(G-quadruplex,G4)是广泛存在于细胞基因组中的一种DNA结构,在DNA的代谢如复制、转录、同源重组等过程中起重要作用.G4解旋酶近年来受到广泛研究,其中bloom(BLM)解旋酶的研究已经相当丰富,但仍有一些基本问题不清楚.我们应用全内反射瞬逝场照明磁镊对BLM解旋G4的动力学过程进行了深入研究,观察到了BLM解旋G4的分步过程.相对于单分子荧光共振能量转移技术而言,借助磁镊的长时间观测性能,我们在近饱和三磷酸腺苷(ATP)浓度的实验体系中观察到BLM长时间反复解开G4或者长时间维持G4于打开状态的两种作用方式.最后,使用相同的实验条件做了单分子荧光共振能量转移实验,确定了加载2-3 pN的外力对BLM解旋G4没有显著影响.

关键词： Bloom解旋酶 G-四联体全内反射磁镊

分子标记物BLM联合超声在乳腺癌诊断中的价值研究

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现代实用医学 2021年第9期33卷 1150-1153页

作者：刘秀祥陈毅作温州市人民医院浙江省温州325000 温州医科大学附属第一医院

目的探讨分子标记物Bloom解旋酶(BLM)联合超声在乳腺癌诊断及靶向BLM治疗中的价值。方法选择40例乳腺癌患者作为观察组,40例乳腺良性肿瘤患者作为对照组。比较两组血清BLM蛋白和BLM-mRNA水平。根据超声结果对患者进行BI-RADS分级,分析BI... 详细信息

目的探讨分子标记物Bloom解旋酶(BLM)联合超声在乳腺癌诊断及靶向BLM治疗中的价值。方法选择40例乳腺癌患者作为观察组,40例乳腺良性肿瘤患者作为对照组。比较两组血清BLM蛋白和BLM-mRNA水平。根据超声结果对患者进行BI-RADS分级,分析BI-RADS分级与血清BLM蛋白水平相关性。分析超声、BLM蛋白单独及联合诊断乳腺癌的价值。结果与对照组相比,观察组血清BLM蛋白和BLM-mRNA水平明显上升(均P<0.05)。超声联合BLM蛋白诊断的符合率、特异度、敏感度、阴性预测值、阳性预测值、约登系数和AUC值均高于各项单独检测。BI-RADS分级与血清BLM蛋白水平呈正相关性(r=0.9081,P<0.05)。结论乳腺癌患者的血清BLM水平异常上升,超声联合血清BLM检测乳腺癌具有较高临床价值。

关键词：乳腺肿瘤癌 Bloom解旋酶超声检查